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发酵虫草菌粉对细胞色素P450酶的影响研究
目的:研究发酵虫草菌粉对大鼠细胞色素P450酶CYP1A2,CYP3A4,CYP2E1的影响.方法:用Cocktail探针药物法,将Wistar大鼠按体重随机分2组,灌胃给予33 g·L~(-1)的虫草菌粉生理盐水混悬液给药组,生理盐水对照组,灌胃体积为8.5 mL·kg~(-1)诱导10 d后静脉注射给予3种探针药物咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗,股动脉插管取血浆,通过HPLC检测各探针药物的代谢以评价各组CYP1A2,CYP3A4,CYP2E1业邱酶的活性;药动学计算采用DAs 2.0软件完成.结果:给予发酵虫草菌粉组的大鼠,咖啡因、氨苯砜代谢均加快,t_(1/2)分别为(2.90±0.47)h,(4.83±0.60)h;氯唑沙宗t_(1/2)与对照组无显著差异.结论:发酵虫草菌粉对大鼠CYP1A2,CYP3A4有诱导作用,对CYP2E1的作用不明显.
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人参总皂苷对γ射线照射后大鼠肝P450酶调节作用研究
该研究用5.5Gy的γ射线照射大鼠,用Cocktail探针法结合液质联用、qPCR和Western blot法检测P450各个同工酶的酶活性、mRNA和蛋白表达来评价人参总皂苷对γ射线照射后大鼠肝P450酶调节作用.结果发现,辐射组CYP1 A2,2B1,2E1,3A4与空白组相比,表达增加;人参总皂苷组CYP1 A2,2B1,2E1,3A4与辐射组相比,表达下降.表明人参总皂苷对辐射诱导大鼠P450酶上调起到反向干预作用.
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扶正化瘀方对正常及肝纤维化大鼠体内CYP450酶的影响
使用Cocktail探针药物法,研究扶正化瘀方(FZHY)对正常和肝纤维化大鼠细胞色素P450(CYP450)5种同工酶的影响.正常和二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射诱导的肝纤维化模型大鼠,以FZHY浸膏粉连续灌胃2周后,单剂量尾静脉注射由CYP450 5种同工酶的特异性探针底物非那西丁(CYPlA2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C 19)、氢溴酸右美沙芬(CYP2 D6)和咪达唑仑(CYP3A4)配置的Cocktail探针溶液后,通过建立的LC-MS/MS法同时检测血浆中5种探针药物的浓度,采用PK solution 2TM对数据进行处理,并计算主要药动学参数.正常大鼠灌胃FZHY后,非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑和氢溴酸右美沙芬的AUC0-t均出现不同程度的增加,CL也均出现降低趋势,提示FZHY能明显抑制正常大鼠CYP1 A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6的活性,但对CYP3 A4的活性影响不明显;肝纤维化大鼠灌胃FZHY后,甲苯磺丁脲的AUC0-t显著增加,Vd显著降低,其他4种探针药物的药动学参数未见显著改变,提示在肝纤维化大鼠体内FZHY仅对CYP2C9有抑制作用,对CYP1 A2,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4活性影响不明显.CYP450酶在肝纤维化条件下活性的改变可能是FZHY对正常和肝纤维化大鼠CYP450酶影响不同的原因.
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LC-MS/MS同时测定6种CYP450探针药物及快速评价小鼠CYP450同工酶活性
目的:建立同时测定小鼠全血中6种CYP450探针药物,即咖啡因(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C)、奥美拉唑(CYP2C)、右美沙芬(CYP2D22)、氯唑沙宗(CYP2E1)和咪达唑仑(CYP3A11)的方法,并采用cocktail法快速评价药物对CYP450同工酶的影响.方法:蛋白沉淀法处理血样,离心后取上清,LC-MS/MS检测.选取地塞米松作为药酶诱导剂,对所建立的模型进行验证.结果:咖啡因、甲苯磺丁脲和氯唑沙宗的线性范围均为20～4000 ng/ml,咪达唑仑、奥美拉唑和右美沙芬的线性范围均为1～200 ng/ml.6种探针药物的日内及日间精密度均小于15%,方法回收率均大于90%.地塞米松表现出对小鼠CYP450有诱导作用.结论:本方法准确、灵敏、重现性好,可用于cocktail法快速评价整体动物主要CYP450亚型酶的活性.
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参麦注射液对大鼠肝脏CYP450酶的影响
目的:考察参麦注射液及各单药注射液对大鼠肝脏CYP450酶活性及mRNA表达的影响.方法:采用超速离心法制备大鼠的肝微粒体,与探针药物共孵育,应用LC/MS法测定各同工酶特异性底物非那西丁,甲苯磺丁脲,安非他酮,咪达唑仑在大鼠肝微粒体的代谢产物的生成量,间接反映各同工酶的活性.应用RT-PCR方法计算CYP1A2,CYP2B,CYP2C和CYP3A条带灰度与CYC条带灰度的比值,间接反映各处理组亚酶mRNA表达水平的改变.结果:参麦注射液可增加CYP2B6,2C9酶活性,与空白组比较具有显著性差异(P＜0.05),对CYP1A2,SA酶活性无明显影响;红参注射液对CYP1A2,2B6和2C9酶活性具有明显诱导作用(P＜0.05),对CYP3A酶活性有抑制趋势,无统计学差异;麦冬注射液显著诱导CYP2C9酶活性(P＜0.05).参麦注射液能诱导CYP1A2,2B,2C mRNA表达,红参注射液和麦冬注射液能诱导CYP2C mRNA的表达;红参注射液有抑制CYP3A mRNA表达的趋势,但无统计学差异.结论:参麦注射液及其各单药对CYP450同工酶不同程度的诱导或抑制作用,提示当药物联合应用时应关注可能产生的药物间相互作用.
关键词： 参麦注射液 细胞色素P450酶 Cocktail 逆转录聚合酶链式反应 -
LC-MS/MS同时测定5种探针底物代谢产物和快速评价细胞色素P450同工酶的活性
目的 建立同时测定奥美拉唑(CYP2C19)、右美沙芬(CYP2D6)、睾酮(CYP3A4)、氯唑沙宗(CYP2E1)和甲苯磺丁脲(CYP2C9)5种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法,快速评价药物对人肝微粒体细胞色素P450同工酶活性的影响.方法 通过人肝微粒体与5种探针底物在还原系统NADPH的作用下,于37℃水浴条件下共同孵育,采用液质联用(LC-MS/MS)分析方法,测定探针底物的代谢产物生成量来评价各P450同工酶的活性.结果 建立了同时测定5种P450同工酶活性的酶反应条件和LC-MS/MS分析方法,数据显示该方法具有良好的线性和分析灵敏度,以及具有良好的准确度、精密度、重现性,可用于药物间相互作用的体外快速评价.结论 可用于体外快速评价药物对相应的CYP450亚型酶活性的影响,以预测潜在的药物相互作用.
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Cocktail探针法测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP450亚酶活性的影响
目的 利用Cocktail探针法,测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP1A2、CYP3A4 、CYP2C9和CYP2C19酶活性的影响,从药物相互作用角度探寻二者配伍增毒相反的体内证据.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分组,南沙参组、藜芦组、合用组分别灌胃南沙参煎液(13.5g·kg-1)、藜芦煎液(0.81g·kg-1)、合煎液(14.31g·kg-1),空白组灌胃生理盐水,连续给药7天,于第8天尾静脉注射混合探针药物后于不同时间点采集血样;血样经处理后利用HPLC同时测定不同时间点各探针药物的血药浓度,通过WinNolin5.2软件计算各探针药物的药动学参数,并进行组间比较,进而反映亚酶活性在各组之间的差异.结果 与空白对照相比,藜芦组可降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t),增加其Vz;南沙参组可降低咖啡因的AUC(0～∞),显著降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t)、AUC(0～∞)并使其Vz,CL显著增加,对氨苯砜、奥美拉唑的各药动学参数无明显影响;与藜芦组相比,合用可增加氨苯砜的MRT(0～t),降低奥美拉唑的AUC(0～t),AUC(0～∞)并增加其CL;与南沙参组相比,合用可增加甲苯磺丁脲的AUC(0～t),降低其Vz,CL.结论 与空白组相比,藜芦组对大鼠CYP2C9具有诱导作用,南沙参组对大鼠CYP1A2酶具有诱导作用,对CYP2C9酶具有显著诱导作用,对CYP3A4、CYP2C19无明显影响;与藜芦组相比,合用组对大鼠CYP3A4酶具有抑制作用,对CYP2C19酶具有诱导作用;与南沙参组相比,合用组对大鼠CYP2C19酶具有抑制作用.
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Cocktail探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP1A2,2C11和3A作用的研究
目的 用“cocktail”探针药物法研究单次或多次口服辣椒素对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C11和CYP3A的影响.方法 将雄性SD大鼠随机分组,给予辣椒素25 mg·kg-1,分别灌胃1,3,7d,以0.5％羧甲基纤维素钠作为空白对照组,每组8只,给药后于不同的时间点采集血样.用HPLC测定大鼠血浆中探针药物咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜的浓度,血药浓度-时间数据采用DAS2.1.1软件进行药动学分析.结果 与对照组相比,辣椒素灌胃7d后,咖啡因的AUC0-t、AUC0-∞和Pmax显著减小,L/F显著增大；甲苯磺丁脲的AUC0-t显著减小,ρmax极显著减小；氨苯砜的AUC0-t和AUC0-x极显著减小,CL/F和V/F极显著增大.结论 辣椒素灌胃7d后对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C11和CYP3A可能存在不同程度的诱导作用,其中对CYP3A的诱导作用较强.
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血栓通注射液对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响
目的 用Cocktail探针药物法,研究血栓通注射液对大鼠肝细胞细胞色素P450(CYP450)的影响.方法 分别以茶碱、氯唑沙宗和咪哒唑仑作为CYPIA2,CYP2E1及CYP3A4的探针药,将大鼠随机分为低剂量和高剂量两组,每日尾静脉注射血栓通注射液,采用高效液相色谱法测定连续使用血栓通注射液前后大鼠血浆中相应的探针药物的浓度及其药动学参数.结果 连续注射14 d后,与用药前比较,茶碱、氨苯砜的血药浓度及其药动学参数未见显著性改变;但低剂量组和高剂量组中氯唑沙宗的AUC,_(0-t)减少,ρ_(max) 明显降低,CL/F显著增加,t_(1/2)和V_d/F变化不明显.高剂量组中t_(max)有所降低(P<0.05).结论 连续注射血栓通注射液14 d后,对CYP2E1酶活性有显著诱导作用,而对CYP3A4、CYPlA2酶活性无影响.
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大明胶囊对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响
目的 用Cocktail探针药物法研究大明胶囊对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响.方法 将大鼠随机分组,低剂量和高剂量组分别给予大明胶囊50、100 mg·kg-1,空白对照组给予生理盐水,通过HPLC测定探针药物的血药浓度并计算其药动学参数,评价大明胶囊对相应大鼠细胞色素P450酶活性的影响.结果 低剂量和高剂量组中美托洛尔、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的药动学参数与空白对照组相比无显著性差异；高剂量组中咖啡因和奥美拉唑AUC,t1/2,ρmax显著增加,Vd/F和CL/F明显降低,tmax无明显变化,低剂量组各参数与空白对照组无显著性差异；低剂量和高剂量组中氨苯砜AUC,t1/2,ρmax显著增加,Vd/F和CL/F 明显降低,tmax无明显变化.结论 大明胶囊对大鼠CYP3A4有抑制作用,对CYP2C9、CYP216和CYP2E1无显著影响,高剂量大明胶囊对CYP1A2和CYP2C19有抑制作用,低剂量则无明显影响.
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Cocktail探针药物法用于评价细胞色素P450同工酶影响的研究进展
目的综述Cocktail探针药物法用于评价药物对细胞色素P450同工酶影响的方法可行性及研究概况,为此方面的研究工作提供参考.方法查阅、总结和归纳近年来国内外有关文献.结果与结论Cocktail探针药物法已被设计用来证实药物-药物相互作用的体外预测,评估某种药物对细胞色素P450同工酶的诱导和抑制作用,用于表型分析及比较不同个体中酶活性的差异,在药动学研究和临床合理用药方面有重大意义.
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Cocktail探针药物同时评价连翘对肝细胞色素P450的影响
目的用Cocktail探针药物法,研究连翘对大鼠肝CYP450的影响.方法将SD 大鼠随机分组,给予连翘的水提物,以生理盐水组为空白对照,通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组CYP450.结果给予连翘组的大鼠CYP1A2的水平显著低于对照组,CYP3A4的水平显著高于对照组,CYP2E1的水平没有显著变化.结论连翘对大鼠CYP1A2有抑制作用,对大鼠CYP3A4有诱导作用,但对大鼠CYP2E1的影响不显著.
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Cocktail探针药物评价姜黄对肝细胞色素P450酶的影响
用Cocktail探针药物法,研究姜黄对大鼠肝细胞P450(CYP450)的影响.将SD雄性大鼠分组,给予姜黄的水提物,以生理盐水组为空白对照,以苯巴比妥组为阳性对照,通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组的CYP450.结果:给予姜黄组的大鼠CYP1A2和CYP2E1的水平显著低于对照组,CYP3A4的水平没有显著变化.表明:姜黄对大鼠CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,但对大鼠CYP3A4的影响不显著.
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无梗五加果实提取物对大鼠CYP450活性的影响
目的 研究无梗五加果实提取物对大鼠CYP450亚型CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4活性的影响.方法 以咖啡因、奥美拉唑、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1和CYP3A4特异性探针药物,配制cocktail混合探针溶液,建立同时测定4种探针药物血药浓度的高效液相色谱法.将SD大鼠随机分为无梗五加果实70%乙醇提取物组、水提取物组和对照组,每天分别ig无梗五加果实70%乙醇提取物溶液、水提取物溶液和溶剂10 mL/kg,连续给药1周,于第8天ip混合探针药物10 mL/kg,分别在给药0、0.083、0.25、0.417、0.583、0.833、1、2、3、5、8、11、12 h于大鼠眼眶静脉丛采血,采用HPLC法对血浆样品进行分析,对给药组和对照组探针药物的药动学参数生物半衰期(t1/2)进行比较.结果 与对照组比较,无梗五加果实水提取物组和70%乙醇提取物组咖啡因、咪达唑仑的t1/2显著降低,奥美拉唑、氯唑沙宗的t1/2显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05、0.01).结论 无梗五加果实70%乙醇提取物和水提取物对大鼠的CYP2C19、CYP2E1有抑制作用,对大鼠的CYP1A2、CYP3A4有诱导作用.
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单探针与混合探针底物法在细胞色素P450酶底物酶促动力学中的比较研究
[目的]研究5种细胞色素P450酶亚型的特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、咪达唑仑(CYP3A4)在人和大鼠肝微粒体中的酶动力学特征,比较两种探针底物法的适用性.[方法]5种特异性探针底物分别经人或大鼠的肝微粒体代谢反应后,采用高效液相色谱法测定特异性探针底物的代谢速率,根据底物浓度-代谢速率曲线计算酶动力学常数.[结果]单探针与混合探针两种方法在人肝微粒体中所得的VmaxKm值具有一致性;而在大鼠肝微粒体中所得的Km具有一定差异,表明该混合探针底物法在用于药物对大鼠肝微粒体中的细胞色素P450酶活性评价时可能会出现一定程度的影响.[结论]在人肝微粒体中,两种探针底物法的Vmax、Km值具有一致性,因而混合探针底物法可代替单探针法用于细胞色素P450酶活性评价;在大鼠肝微粒体中,探针底物混合后可使得部分探针底物的Km值升高,与酶亲和力下降,在细胞色素P450酶活性评价中可能出现假阴性结果.
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"Cocktail"体外探针法评价补骨脂素对人肝微粒体P450酶亚型活性的影响
[目的]利用Cocktail体外探针法,测定补骨脂有效成分补骨脂素对人肝微粒体多种P450酶亚型活性的影响,为补骨脂临床联合用药安全提供参考.[方法]建立液质联用方法,同时测定人肝微粒体P450酶中各探针代谢产物6α-OH紫杉醇、α-OH咪达唑仑、4-OH甲苯磺丁脲、去甲基右美沙芬、7-OH香豆素、对乙酰氨基酚和6-OH氯唑沙宗的含量.通过Cocktail体外探针实验中补骨脂素对人肝微粒体P450酶各亚型的影响,证明补骨脂对人体肝脏的代谢有影响作用.[结果]所建立的液质联用方法精密可靠,符合生物样品测定要求,可用于人肝微粒体中各P450酶探针的代谢产物的定量分析.与对照组相比,补骨脂素组各底物的转化率均下降,其中香豆素的转化率下降为显著,补骨脂素对其转化的抑制率为95.84％,而紫杉醇的转化的抑制不明显,仅为10.39％.补骨脂素对其他几种底物的转化抑制率均在82％～91％之间.[结论]补骨脂素对人肝微粒体的CYP1A2、2A6、2C8、2C9、2D6、2E1和3A4亚型均有抑制,其中对CYP2A6、1A2和2D63种亚型的影响较为显著,表明补骨脂素对人肝微粒体P450酶不同亚型影响差异显著,长期给药补骨脂应关注药物联合用药安全.
关键词： Cocktail 补骨脂素 人肝微粒体P450酶 探针药物 -
Cocktail法评价注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A的诱导作用
目的:研究注射用益气复脉(冻干)Yi Qi Fu Mai Injection( YQFM) (Lyophilized)对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A的诱导作用.方法:将wistar大鼠分为生理盐水对照组,苯巴比妥钠诱导组,YQFM组,连续给药7天后处死,制备肝微粒体.采用Cocktail法,将特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、睾酮(CYP3A)与肝微粒体共孵育,采用高效液相色谱测定孵育所得代谢产物对乙酰氨基酚和6β一羟基睾酮的生成速率,来评价YQFM对CYP1A2、CYP3A的诱导作用.结果:空白对照组、诱导组和YQFM组的对乙酰氨基酚的生成速率分别为(18.04±1.00)、(43.07±2.90)、(27.6±4.5) ng·(mg protein)-1·min-1,6β-羟基睾酮的生成速率分别为(15.79±1.43)、(40.86±3.32)、(32.8±3.67 )ng·(mg protein) -1·min -1.结论:YQFM对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A有诱导作用.
关键词： 注射用益气复脉(冻干) Cocktail CYP1A2 CYP3A -
Cocktail探针药物法评价傣药“雅解沙把”对大鼠肝药酶P450亚型CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4活性的影响
目的:采用cocktail探针药物法研究傣药“雅解沙把”对肝细胞色素P450亚型CYPlA2、CYP2C 19、CYP2E1、CYP3A4的影响.方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、苯巴比妥钠组(10.8 mg/kg)、“雅解沙把”低剂量组(0.27 g生药/kg)和“雅解沙把”高剂量组(2.43 g生药/kg),按上述剂量灌胃给药,空白对照组灌胃蒸馏水.连续灌胃7天后处死动物,取肝脏制备肝微粒体,以甲硝唑为内标,建立HPLC方法检测Cocktail探针药物奥美拉唑、氯唑沙宗、咖啡因、氨苯砜的代谢情况.结果:与空白对照组比较,“雅解沙把”低剂量组和高剂量组氯唑沙宗的代谢明显升高,氯唑沙宗的含量显著降低(P-＜0.01),“雅解沙把”高剂量组奥美拉唑和氨苯砜的代谢明显升高,奥美拉唑和氨苯砜的含量明显降低(P＜0.05).“雅解沙把”低剂量组和高剂量组虽咖啡因代谢较与空白对照组有上升的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:傣药“雅解沙把”能促进肝药酶CYP3A4、CYP2C19、CYP2E1的活性,加速药物代谢,这可能是其解药物毒的作用机制之一.
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葛根芩连汤及不同配伍对肝细胞色素P450酶的影响
目的 采用Cocktail探针药物法研究葛根芩连汤(葛根、黄芩、黄连和炙甘草)及其不同配伍对大鼠肝细胞色素P450酶系活性的影响.方法 大鼠连续7d分别灌服葛根组、芩连组、甘草组,尾静脉注射Cocktail探针药物咖啡因、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、咪达唑仑.建立LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中5种探针药物的浓度,DAS2.0软件计算其药动学参数.结果 与空白组比较,全方能诱导大鼠CYP2C6、CYP2D4的活性,抑制CYP2E1的活性,对CYP1A2、CYP3A1/2无影响.葛根组能诱导CYP2C6、CYP3A1/2活性,抑制大鼠CYP2D4及CYP2E1活性.芩连组能诱导CYP2C6的活性,抑制CYP1A2、CYP2D4、CYP2E1的活性.甘草组能诱导CYP1A2、CYP2C6和CYP2D4的活性,抑制CYP3A1/2的活性.结论 葛根芩连汤及不同配伍对大鼠CYP450酶的活性影响不同,其中葛根起到主要的作用.
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Cocktail探针药物评价淫羊藿提取物对大鼠CYP450酶的影响
目的 研究淫羊藿提取物对大鼠CYP450酶系的影响.方法 将SD雄性大鼠随机分成2组(均n=20),用药组给予淫羊藿提取物(相当于淫羊藿总黄酮300 mg·kg-1,ig,qd×14 d),空白对照组给予生理盐水,于d 15日清晨灌胃给予Cocktail探针药物咖啡因(15 mg·kg-1)、氨苯砜(15 mg·kg-1)、苯妥英(75 mg·kg-1)和氯唑沙宗(30 mg·kg-1).采用RP-HPLC法检测各探针药物浓度,通过药动学参数来评价各组CYP450酶系的活性.结果 咖啡因、氨苯砜、苯妥英和氯唑沙宗的线性范围分别为0.2～1.6 mg·L-1、0.075～0.600 mg·L-1、0.2～1.6 mg·L-1、0.25～2.00 mg·L-1,4种探针药物日内、日间RSD均<5.14%,方法回收率均>95.0%(RSD<6.14%).给予淫羊藿提取物的大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的活性水平显著高于对照组(P<0.05).结论 该RP-HPLC法快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于探针药物评价主要CYP450亚型酶的活性.淫羊藿提取物对大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的活性均有诱导作用.
