DryLab软件辅助建立同时测定6种细胞色素P450酶探针底物的HPLC法

目的：采用DryLab软件辅助建立可同时测定6种细胞色素P450酶(cytochrome P450, CYP450)探针底物的HPLC法。方法选择6种CYP450酶探针底物为研究对象，应用DryLab软件辅助建立合适的液相色谱分离方法，并进行方法学考察。结果借助DryLab软件辅助建立的色谱方法可较好的将6种探针底物分离，分离度均大于2.00，各探针底物在一定范围内峰面积与浓度呈线性关系，R＞0.9998，回收率在86.38%～110.29%范围内，其 RSD 在1.69%～3.80%之间，日内和日间精密度分别在0.42%～2.01%和1.36%～2.29%范围内。结论通过DryLab软件建立的色谱方法可同时检测6种探针底物，缩短了色谱方法的开发周期。

CYP3A探针底物咪达唑仑在大鼠体内的非线性药动学过程及剂量优化

人细胞色素P450酶2J2的功能及其配体研究进展

细胞色素酶P450 2J2 (cytochrome P450 2J2,CYP2J2)广泛分布于人体多个组织,参与众多内源性化合物和外源性药物的代谢.CYP2J2可催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)生成具有多种生理功能的环氧化二十碳三烯甘油酸(expoxyeicosatrienoic acids,EETs),进而在调节心血管功能和肿瘤发生发展中发挥重要作用.此外,CYP2J2在阿司咪唑、依巴斯汀和特非那定等临床药物的肠道代谢中也发挥关键作用,是多种药物肠道首过代谢环节的重要屏障.本综述结合国内外新近研究进展,系统介绍了CYP2J2的分布、功能及催化特征,CYP2J2功能的表征方法和探针底物研究现状、药物等外源物对CYP2J2的调节作用以及CYP2J2与人类疾病间的关系等,旨在使国内医药领域的研究者更加深入地了解CYP2J2的功能及其在疾病发生发展中的作用.本文通过对近年来CYP2J2配体(底物和抑制剂)研究进展的总结,以期为以CYP2J2为靶点的新药研发提供指导和参考.

LC-MS/MS法研究黄酮类化合物对人肝微粒体细胞色素P450酶6种亚型的体外抑制作用

目的:建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)研究黄酮类化合物对人肝微粒体细胞色素P450酶6种亚型的体外抑制作用.方法:采用ESI正离子和负离子选择反应检测同时测定扑热息痛、4.羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、氧去甲基右美沙芬、6-羟基氯唑沙宗和氧化硝苯地平,分别代表CYP1 A2,CYP2C9,CYP2C19.CYP2D6.CYP2E1,CYP3A4的活性;黄酮类化合物和6种探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC_(50).值表示对CYP450酶的抑制程度.结果:黄酮苷类(水飞蓟宾、金丝桃苷、儿茶素、表儿茶素、葛根素、芦丁、甘草苷以及柚皮苷)的IC_(50).值均大于50μmol·L~(-1),对6种亚型没有抑制作用.而黄酮苷元如槲皮素等均能不同程度地抑制CYPlA2,IC_(50)值从0.054 μmol·L~(-1)到31.9l μmol·L~(-1)不等;有些对其他亚型如CYP2C9.CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4也有一定的抑制作用.所有的黄酮类化合物对CYP2D6无抑制活性.黃酮对CYP3A4的活性也有激活作用.结论:建立的LC-MS/MS方法准确、灵敏、可靠.33种黄酮类化合物对CYP450酶6种亚型有不同的抑制作用,这些信息有助于中药-药物相互作用的预测.

双环醇对大鼠CYP450同工酶及Ⅱ相酶的影响

目的:研究双环醇对大鼠肝微粒体CYP450同工酶及Ⅱ相酶的诱导或抑制作用.方法:大鼠灌胃给予双环醇200 mg·kg-1·d-1,连续给药3 d,测定CYP450 6种主要同工酶(CYP2D,2C6,2c,3A,1A2,2E1)选择性底物的代谢速率及Ⅱ相酶[尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDPGT)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)及谷胱苷肽还原酶(GR)]的酶活性.结果:双环醇10 μmol·L-1与正常大鼠肝微粒体体外温孵后,对CYP3A,1A2,2E1和2C同工酶选择性底物氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗和奥美拉唑的代谢速率有一定抑制作用,分别为对照组的19%,40%,42%和78%,其中以对CYP3A底物氨苯砜的抑制作用为明显.双环醇灌胃给药3 d后,对大鼠肝微粒体CYP2C和CYP2D有不同程度的抑制作用,Km和Vmax分别为对照组的32%和57%,对CYP2E1的酶活性有轻度诱导作用,Km和Vmax为对照组的170%.双环醇对Ⅱ相酶UDPGT,GST,GR也有轻度诱导作用(酶活性分别为对照组的129%,121%和1 17%).结论:双环醇对CYP450和Ⅱ相酶具有一定的调控作用,其对代谢性药物相互作用的潜在影响值得关注.

不同方法诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝模型的CYP酶活性比较研究

目的 研究四氯化碳(CCl4)诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)模型在不同时间段对主要细胞色素P450(cytochrome P450 proteins,CYP)酶活性的影响,并与高脂饲料诱导大鼠NAFL模型相比较.方法 将实验动物分为模型组和溶媒/空白对照组,模型组采用每周2次皮下注射40％CCl4,连续9周(CCl4模型)或连续给予高脂饲料9周(高脂模型).通过组织病理学观察,测定肝脏脂质含量及肝脏系数(肝脑比)等确认大鼠NAFL造模成功,并测定血生化谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),测定主要CYP酶活性变化.结果 两种模型的组织病理学所见符合NAFL特点,肝内脂质含量及肝脑比均有显著性增加.在不同周龄,CCl4模型组的主要CYP酶活性(第4周CYP2 B6除外)与溶媒组相比,有显著性下降(P<0.001),且随时间延长有加重趋势;高脂模型的主要CYP酶活性与空白对照组比较无明显变化.ALT和AST在CCl4模型组显著升高,而在高脂模型组无明显变化.结论 肝脏组织中主要CYP酶活性可用于鉴别两种不同途径(CCl4或高脂饲料)诱导的大鼠NAFL模型.

单探针与混合探针底物法在细胞色素P450酶底物酶促动力学中的比较研究

[目的]研究5种细胞色素P450酶亚型的特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、咪达唑仑(CYP3A4)在人和大鼠肝微粒体中的酶动力学特征,比较两种探针底物法的适用性.[方法]5种特异性探针底物分别经人或大鼠的肝微粒体代谢反应后,采用高效液相色谱法测定特异性探针底物的代谢速率,根据底物浓度-代谢速率曲线计算酶动力学常数.[结果]单探针与混合探针两种方法在人肝微粒体中所得的VmaxKm值具有一致性;而在大鼠肝微粒体中所得的Km具有一定差异,表明该混合探针底物法在用于药物对大鼠肝微粒体中的细胞色素P450酶活性评价时可能会出现一定程度的影响.[结论]在人肝微粒体中,两种探针底物法的Vmax、Km值具有一致性,因而混合探针底物法可代替单探针法用于细胞色素P450酶活性评价;在大鼠肝微粒体中,探针底物混合后可使得部分探针底物的Km值升高,与酶亲和力下降,在细胞色素P450酶活性评价中可能出现假阴性结果.

细胞色素P450 3A4代谢机制有关方面的研究进展

CYP3A4是细胞色素P450家族中为重要的药物代谢酶,其在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用.本文通过查阅国内外相关文献,对CYP3A4的基本结构、活性部位、作用机制、基因表型、探针底物和药物代谢等方面的研究进展作一综述,从而阐明CYP3A4与代谢机制有关的问题.

人细胞色素P450同工酶探针底物特异性的研究进展

细胞色素P450(CYP450)同工酶活性测定可用于药物/毒物代谢、药物相互作用和代谢多态性等研究,探针底物的特异性和实验条件的合理性对CYP450同工酶活性测定的准确性有着极其重要的意义.该文就近年来常用和新出现的CYP450同工酶探针底物的研究进展作一综述和评价.