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Caco-2细胞模型的建立及其在真菌毒素吸收率研究中的应用
目的 构建Caco-2单层细胞转运5种毒素的吸收率模型并验证.方法 以Caco-2细胞系为工具,以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、黄曲霉毒素B1(AFB1)、AFB2、黄曲霉毒素G1(AFG1)和AFG2为研究对象,通过对转运介质溶液中毒素的初始浓度、温度、pH值、抑制剂存在与否等实验条件的优化,构建Caco-2细胞转运DON和4种黄曲霉毒素的生理模型并进行验证.结果 DON、AFB1、AFB2、AFG1及AFG2透过Caco-2单层细胞的量和表观渗透系数(Papp)随着体系溶液中pH的升高有下降趋势.AFB1在pH 7.4～7.5溶液中的Papp值高,AFB2、AFG1、AFG2及DON在pH 7.0～7.1溶液中的Papp值高.随着体系温度的升高,DON、AFB1、AFB2、AFG1及AFG2的透膜能力均有所增加.无论体系中AFB1、AFG1及AFG2浓度低或高,均在60 min时透过率达到平台期并维持稳定;而AFB2及DON从高浓度到低浓度均在120 min时透过率达到平台期并维持稳定.结论 所建5种毒素Caco-2单层细胞模型灵敏、稳定、可靠、有效.
关键词： Caco-2细胞模型 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 黄曲霉毒素 吸收率 风险评估 -
桃胶多糖对Caco-2细胞模型吸收葡萄糖的影响
目的:通过Caco-2体外细胞模型研究桃胶多糖影响葡萄糖吸收的机制.方法:以培养的Caco-2单层细胞为葡萄糖吸收模型,观察在桃胶多糖影响下,葡萄糖吸收量随时间的变化关系,从而推断桃胶多糖对葡萄糖跨膜转运过程的影响.结果:一定浓度桃胶多糖作用下,不同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),表明葡萄糖吸收受到桃胶多糖的抑制,且葡萄糖浓度越低,桃胶多糖抑制葡萄糖吸收的效果越显著(P<0.05);不同浓度的桃胶多糖作用下,相同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),且桃胶多糖浓度越高,抑制葡萄糖吸收的效果越好(P<0.05).结论:桃胶多糖能够竞争性抑制葡萄糖的吸收,其是否可能通过影响或者占据肠道刷状缘侧钠葡萄糖共转运载体1(SGLT-1)上葡萄糖的吸收位点达到降血糖目的,其机制尚有待进一步研究.
关键词： 桃胶多糖 糖尿病 葡萄糖 Caco-2细胞模型 钠葡萄糖共转运载体1 -
应用Caco-2细胞模型进行毒性中药研究的思路
本文概述了Caco-2细胞模型的基本特点、培养方法及其在中药研究方面的应用,提出了应用Caco-2细胞模型对毒性中药进行研究的新思路.
关键词： Caco-2细胞模型 毒性中药 -
基于Caco-2细胞模型研究蝙蝠葛碱的跨膜吸收机制
目的:研究蝙蝠葛碱在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制.方法:采用Caco-2细胞模型,进行A-B和B-A双向转运实验,计算表观渗透系数(Papp)、外排比率(ER)和累积转运量,考察蝙蝠葛碱不同质量浓度、细胞两侧pH梯度和螫合剂EGTA对蝙蝠葛碱转运的影响.结果:高、中、低浓度下的ER分别为1.11,4.49和7.24,即中、低浓度下转运有明显极化现象；顶侧pH 7.4和6.5时,ER值分别为3.95和9.38,即pH梯度存在时,蝙蝠葛碱吸收减少,外排增加；加入螯合剂EGTA后,Papp,ER和累积转运量均无显著改变.结论:蝙蝠葛碱的吸收有主动转运机制存在；pH梯度能驱动了蝙蝠葛碱的外排转运,偏碱性环境较酸性环境易于吸收；其吸收途径主要为跨细胞通道转运.
关键词： 蝙蝠葛碱 Caco-2细胞模型 吸收机制 吸收途径 -
Caco-2细胞模型及其在中药吸收转运研究中的应用
Caco-2细胞模型是一种筛选药物离体口服吸收特性的模型,现已广泛应用于评价药物在小肠的吸收特性和转运机理的研究.作者描述了Caco-2细胞的培养及其细胞单层模型如何建立和验证;探讨了Caco-2细胞用于药物吸收转运研究的机制;对其在中药被动转运、载体介导的主动转运、中药外排机制和吸收过程中药物相互作用等方面的应用进行了详细的阐述;并评价了该细胞用于中药吸收转运机制研究中的作用;后对该细胞模型可能的应用发展前景提出了展望.
关键词： Caco-2细胞模型 中药 吸收转运 -
山豆根中主要成分在Caco-2细胞模型上的转运特性
目的:考察山豆根水提物中主要成分在Caco-2细胞模型上的转运特性,为山豆根的体内吸收特性研究提供参考.方法:以Caco-2细胞模型研究山豆根中主要成分从给药端向吸收端的转运透过情况,采用UPLC-MS考察主要药效成分苦参碱和氧化苦参碱的吸收透过情况,流动相0 1％甲酸-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL· min-1.质谱条件采用正离子选择性离子进行检测,扫描测定氧化苦参碱(m/z±H)265.1,苦参碱(m/z±H)249.1,计算二者的表观渗透系数.结果:在给药120 min时,苦参碱、氧化苦参碱的表观渗透系数分别为(11.43±0.41)×10-6,(3.91±0.70)×10-6m·s-1.山豆根水提物中可检测到20种成分,包括苦参碱在内的5个主要组分(P2,P4,P6,P7,P25)有较高的透过率,6种组分(P3,P5,P9,P11,P14,P27)具有中等透过率,包括氧化苦参碱在内的其他组分透过率较低或不能透过细胞模型.结论:山豆根的主要成分中约55％易透过细胞模型,其中苦参碱在体外模型中极易被吸收,而氧化苦参碱在体外模型中具有低透过率,提示苦参碱是山豆根吸收进入体内的主要有效成分之一.
关键词： 山豆根 Caco-2细胞模型 苦参碱 氧化苦参碱 表观渗透系数 -
复方脑忆源片主要成分淫羊藿苷在Caco-2细胞模型上的转运研究
目的:对复方脑忆源片中主要成分淫羊藿苷进行转运研究,阐明吸收特点.方法:利用Caco-2细胞模型,对复方脑忆源片中主要成分淫羊藿苷(ICA)进行体外转运,并通过高效液相(Luna Kromasil C18色谱柱(4.6 mm× 150 mm,5μm)；流动相乙腈∶水(30∶70)；流速1.0 mL· min-1；检测波长270 nm；)测定单体、药材及复方中的淫羊藿苷转运后的含量.结果:淫羊藿苷在小肠吸收转运过程随时间增长而增加,可能会被Caco-2细胞中的P-gp转运蛋白外排.与淫羊藿单体和淫羊藿提取物中的淫羊藿苷比较,脑忆源片可显著提高淫羊藿苷的转运,同时可降低淫羊藿苷的外排作用.结论:在脑忆源片中,由于淫羊藿苷外排减少,可认为通过复方配伍后,方中的其他药物抑制了淫羊藿苷的外排,使其可以更好的发挥药理作用.
关键词： 脑忆源片 Caco-2细胞模型 转运 淫羊藿苷 -
丹参素在Caco-2细胞单层模型中的跨膜转运研究
目的:研究丹参素在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制.方法:通过研究丹参素在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度及转运蛋白抑制剂对丹参素吸收的影响.用液相-质谱联用法检测药物浓度,计算其表观渗透系数.结果:表观渗透系数Papp值随时间延长而增大,到一定时间趋向饱和状态,并随丹参素浓度的增加而逐渐减小.双向转运的Papp比值即Pratio均大于1.5.在加入P-gp转运蛋白抑制剂维拉帕米后,丹参素Papp,A-B值显著增大,而Papp,B-A值显著降低.结论:丹参素在Caco-2细胞模型中的转运可能主要是由P-gp转运蛋白介导的主动转运.
关键词： 丹参素 Caco-2细胞模型 主动转运 -
獐牙菜苦苷生物转化产物在Caco-2细胞模型中的转运机制研究
目的:采用Caco-2细胞模型研究獐牙菜苦苷转化产物獐牙菜新素{(Z)-5-ethylidene-8-hydroxy-3,4,5,6,7,8-hexahydm-1H-pyrano[3,4.c]pyridine-1-one,EHPO}的吸收机制.方法:以Caco-2细胞单层作为吸收研究模型,分别考察给药浓度、环境、pH以及加入维拉帕米后对EHPO双向跨膜转运的影响.通过HPLC测定药物浓度,计算表观渗透系数(P_(app)).结果:在Caco-2细胞模型中,给予不同剂量的EHPO后,双向P_(app)几乎相等.在所试验浓度范围内EHPO的P_(app)基本保持恒定,pH值、维拉帕米对其跨膜转运有一定的影响.结论:在Caco-2细胞模型中,EHPO主要以被动扩散方式较快的被吸收.
关键词： 獐牙菜苦苷 Caco-2细胞模型 被动转运 -
小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制研究
目的:研究小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制.方法:利用MTT实验筛选小柴胡汤在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究小柴胡汤的双向转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定,考察时间对小柴胡汤吸收的影响.结果:汉黄芩苷(wogonoside,WGS)和汉黄芩一素(wogonin,WGN)由AP侧到BL侧的Papp分别为(1.23±0.09)×10-6,(1.07±0.89)×10-5,由BL侧到AP侧的Papp分别为(2.12±0.19)×10-6,(7.12±1.02)×10-6,二者的转运率随着时间的增加而增加,WGS和WGN的PappAP→BL/PappBL→AP分别为0.58,1.49.黄芩苷、黄芩素和甘草酸不能透过Caco-2细胞单层.结论:WGS和WGN在Caco-2,细胞单层模型中的转运途径可能为被动转运.
关键词： 小柴胡汤 Caco-2细胞模型 转运 -
β-环糊精包合物对香附四物汤挥发油中主要成分在Caco-2细胞模型中转运的影响
虽然香附四物汤挥发油具有较强的药理活性,但挥发油特殊的物理化学性质制约了其临床应用与药效发挥.该文采用环糊精包合技术对香附四物汤挥发油部位进行制剂处理,同时利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型,研究了香附四物汤挥发油经β-环糊精包合后主要活性成分体外跨膜转运的改变,探讨了β-环糊精包合物对以低溶解性、高渗透性为特征的生物药剂学分类系统中第Ⅱ类药物跨膜转运与吸收的影响.首次建立了UPLC-MS/MS进行香附四物汤挥发油中主要活性成分洋川芎内酯A、正丁基苯酞、藁本内酯、去氢木香内酯、α-香附酮同时测定的含量分析方法.结果表明,将香附四物汤挥发油制成β-环糊精包合物能显著提高其活性成分在体外的透膜转运与吸收,据此推测环糊精包合物对难溶性药物的口服生物利用度有一定改善作用.该文的研究内容为香附四物汤β-环糊精包合物更加深入的体内过程研究提供了一定的实验依据,同时也为其新型口服制剂的研发奠定了基础.
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黄芪多糖口服吸收促进剂的研究
该实验利用黄芪多糖中引入的仲氨基与FITC中氰基发生亲核反应,得到FITC荧光标记的黄芪多糖,并采用Caco-2细胞模型评价了低相对分子质量壳聚糖和鱼精蛋白对黄芪多糖的吸收促进作用.结果表明该荧光标记方法稳定性好,灵敏度高;低相对分子质量壳聚糖和鱼精蛋白对细胞毒性作用均较小;2种吸收促进剂对黄芪多糖的吸收均具有一定的促进作用,同时吸收促进剂的比例越大时,作用越明显,低相对分子质量壳聚糖的作用略强于鱼精蛋白.实验前后细胞跨膜电阻(TEER)的变化表明其作用机制可能是吸收促进剂能暂时打开细胞间的紧密连接,增加了膜的流动性,从而提高药物的透过性.
关键词： 黄芪多糖 FITC Caco-2细胞模型 吸收促进剂 -
Caco-2细胞单层模型研究黄芩提取物中黄芩苷转运机制及白芷提取物对其转运的影响
目的:研究黄芩提取物中黄芩苷的吸收转运机制以及白芷提取物对其吸收影响,分析探讨白芷提取物对黄芩苷转运的影响机制.方法:建立人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞模型,利用此模型研究pH、时间、药物浓度、温度对黄芩提取物中黄芩苷的转运影响；研究黄芩苷在P-gp,MRP蛋白专属抑制剂存在与否时黄芩苷在Caco-2细胞模型的双向转运情况；并考察白芷提取物对黄芩苷吸收转运的影响.结果:37℃环境下黄芩苷转运在pH 7.4条件下吸收较好,且存在浓度依赖性；4℃环境下蛋白失活,转运量降低；黄芩苷双向转运PDR为0.54,P-gp抑制剂维拉帕米、MRP抑制剂丙磺舒加入后,黄芩苷BL→AP转运减少,而PDR无差异.加入白芷活性成分香豆素、挥发油、香豆素与挥发油混合物后黄芩苷转运分别提高了2.34,3.31,3.13倍.结论:黄芩苷主要转运机制为被动转运,兼有外排蛋白参与.白芷活性成分对黄芩苷有促吸收作用,此作用可能与黄芩苷的被动转运机制有关,白芷提取物打开了细胞间的紧密连接,也可能与白芷抑制外排蛋白的表达或功能有关.
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养阴通脑颗粒主要有效部位的转运研究
目的:研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制.方法:利用MTT试验研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究养阴通脑颗粒主要有效部位配伍后的转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定.结果:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素的吸收转运Papp皆＜1.0×10-6 cm·s-1,吸收转运Papp与难吸收药物阿替洛尔接近,其口服在体内的吸收从大到小的顺序为:葛根素＞川芎嗪＞黄芪甲苷.皂苷与黄酮配伍后,黄芪甲苷吸收转运Papp明显提高,促进吸收方向转运；黄酮、皂苷和生物碱的相互配伍对黄芪甲苷的外排作用明显,对川芎嗪和葛根素的吸收转运影响不明显.各有效部位代表成分的双向转运程度差异较大,Papp(B→A)明显大于Papp(A→B),提示这3个有效部位代表成分在Caco-2细胞单层模型中从BL侧到AP侧的外流转运较占优势.结论:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素可能为吸收不良的化合物,在其转运途径中可能受到了小肠顶侧膜的转运蛋白的外排作用.
关键词： 养阴通脑颗粒 Caco-2细胞模型 有效部位 高效液相色谱法 转运 -
吸收促进剂对绿原酸的跨膜转运影响
采用Caco-2细胞模型,研究不同吸收促进剂对绿原酸跨膜转运的影响.绿原酸浓度采用高效液相色谱法测定.在20～80 μg·mL-1内,绿原酸吸收速率常数(Ka)无显著性差异;40和20 μg·mL-1的双向转运表观渗透系数(Papp)比值分别为1.14和1.18;在吸收促进剂的作用下,绿原酸吸收速率常数和表观渗透系数增加,吸收半衰期减少.绿原酸主要以被动转运的方式通过Caco-2单层细胞膜,转运过程可能有载体参与;冰片对其通过Caco-2细胞膜的转运过程无影响,牛胆盐、十二烷基硫酸钠和卡波姆3种吸收促进剂的促吸收能力按以下顺序递减:十二烷基硫酸钠＞牛胆盐＞卡波姆.
关键词： 绿原酸 Caco-2细胞模型 转运机制 吸收促进剂 -
20(S)-原人参二醇生物药剂学性质的多元化研究
本研究旨在对20(S)-原人参二醇(PPD)的生物药剂学性质进行多元化研究.首先测定PPD的平衡溶解度和表观油水分配系数,预测其在体内的吸收行为;其次结合Caco-2细胞模型与在体单向肠灌流模型,探讨PPD的膜渗透性和吸收窗;后将生物利用度与体内代谢相结合,多元化研究分析PPD在体内的吸收和代谢特性,为PPD的剂型设计提供理论和实践基础.结果表明:PPD的水溶性较差,在水中的平衡溶解度仅为35.24mg·L-1,油水分配系数(P)为46.21 (logP=1.66).Caco-2细胞模型显示PPD吸收一般,有一定的外排现象.在体肠灌流模型结果表明,PPD在各肠段吸收良好,且各段的有效渗透系数按大小依次为十二指肠、空肠、回肠和结肠.PPD的口服生物利用度较低,为29.39％.代谢研究表明PPD在体内存在广泛的代谢.因此PPD的溶解性差和首过作用是影响其口服生物利用度的主要因素.
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藏花酸在Caco-2细胞模型中的吸收转运研究
目的 探讨藏花酸(CRO)在Caco-2细胞模型中的吸收转运机制.方法 摄取实验用系列浓度藏花酸(20,40,60,80μmol·L-1)在Caco-2细胞摄取30 min.维拉帕米对藏花酸摄取影响实验采用系列浓度藏花酸(10,20,40μmol·L-1)并分别加入60 μmol·L-1维拉帕米37℃摄取30 min,经处理后,用HPLC测定藏花酸的摄取量,同时设置不加维拉帕米的对照组.转运实验用跨膜电阻和甘露醇渗漏符合要求的Caco-2细胞单层中进行,用60 μmol·L-1藏花酸和60μmol·L-维拉帕米的药液孵育20 min,经处理后,用HPLC测定藏花酸的转运量,同时设置不加维拉帕米的对照组,探索维拉帕米对Caco-2对藏花酸转运的影响.结果 藏花酸在Caco-2细胞中的药物摄取量随浓度的增加呈线性增加分别是(2.65±0.03),(4.75±0.09)和(7.57 ±0.14) nmol·min-1·mg-1 protein,加入维拉帕米后对藏花酸细胞摄取(2.77±0.04),(4.67±0.06)和(7.91±0.12)nmol·min-·mg-protein,摄取无差异.藏花酸在Caco-2细胞模型中转运实验渗透系表观渗透率(PDR) 1.52±0.03,加入维拉帕米后表观渗透率为1.51±0.05,转运无显著影响.结论 藏花酸可能是以被动扩散为主要方式被小肠上皮细胞摄取和转运,同时可能存在主动转运,与P-糖蛋白的外排无关.
关键词： 藏花酸 Caco-2细胞模型 摄取 P-糖蛋白 跨膜转运 -
桂皮醛通过 Caco－2细胞体外吸收模型对白血病K562细胞株的作用
目的：研究桂皮醛通过Caco－2细胞体外吸收模型作用于白血病K562细胞株并使K562细胞向髓系、红系分化的情况。方法桂皮醛经Transwell转运池Caco－2细胞模型，确定无细胞毒质量浓度为0，50，100，200，400，600，800，1000μg· mL－1，高效液相色谱法检测透过模型的成分。噻唑蓝（ MTT）法检测桂皮醛作用K562细胞72 h 的无细胞毒的浓度范围。桂皮醛标准品（50，75μg· mL－1）直接培养白血病细胞K562共72 h，流式细胞仪检测K562细胞的表面抗原CD235a、CD36、CD41、CD61、CD13、CD33和CD14的比例。结果桂皮醛无细胞毒质量浓度为200μg · mL－1，透过模型的成分为桂皮醛。50，75μg· mL－1桂皮醛作用 K562细胞在以下不同时间的抑制率：24 h 为（25.29±0.97）％，（36.60±0.18）％；48 h 为（48.23±0.63）％，（57.15±0.58）％；72 h为（58.23±0.63）％，（57.15±0.58）％，和对照组相比，抑制效果明显（P＜0.05）。50，75μg· mL－1桂皮醛作用K562细胞72 h后，髓系分化表型CD13、CD33、CD36在K562细胞上表达量分别为（0.33±0.21）％，（32.89±0.19）％，（7.73±0.57）％；（0.72±0.43）％，（38.80±0.03）％，（10.90±0.82）％，和对照组比较，表达均明显增高（P＜0.05）。红系分化表型CD235a的表达量为（52.38±0.65）％，（57.48±0.70）％，和对照组比较，表达均明显增高（ P ＜0.05）。巨核系分化表型 CD41、CD61的表达率无明显变化（ P＞0.05）。结论桂皮醛能透过Caco－2细胞体外吸收模型且能使K562细胞向髓系、红系分化。
关键词： 桂皮醛 K562细胞 Caco-2细胞模型 表面抗原 -
丹酚酸B及二甲酯在Caco-2细胞模型中跨膜转运的对比研究
目的:比较丹酚酸B(SAB)和丹酚酸B二甲酯(DMB)在Caco-2细胞模型中的转运特性及影响因素.方法:以Caco-2细胞作为吸收研究模型,分别考察药物浓度、顶侧pH及外排蛋白抑制剂对SAB和DMB转运的影响,采用HPLC-MS/MS法检测药物浓度,计算并对比两者的表观渗透系数(Papp)、外排比及总回收率.结果:在相同浓度下,SAB和DMB的A-to-B转运的Papp无明显差异,而B-to-A转运的Papp和外排比在高浓度下有显著性差异(P＜0.05),且DMB的Papp和外排比明显比SAB高;顶侧pH的改变对两者的转运结果没有显著影响;而外排蛋白P-gp和BCRP对DMB的外排作用要强于SAB.结论:SAB和DMB均为低渗透性化合物,可能不是外排蛋白P-gp和BCRP的底物或是弱的底物,SAB的二甲基酯化并没有改变其渗透性.
关键词： 丹酚酸B 丹酚酸B二甲酯 Caco-2细胞模型 渗透性 外排蛋白 -
候选药物TW918在Caco-2细胞模型中的吸收和转运特性
目的:研究候选药物TW918在Caco-2细胞模型中的吸收、转运特性及其机制.方法:建立Caco-2细胞摄取、转运模型,采用HPLC法检测Caco-2细胞单层的完整性及p-糖蛋白(P-gp)的功能,测定单层细胞的跨膜电阻(TEER),分别考察时间、pH、浓度及抑制剂对TW918吸收的影响;测定药物在不同转运时间双向转运的速度,计算TW918的表观渗透系数.结果:用于转运实验和摄取实验的Caco-2细胞能形成均匀的细胞单层,且其致密性、完整性及功能性均良好.Caco-2细胞对TW918的吸收在20 min内呈线性关系,药物的摄取时间定为10 min;pH对TW918的吸收没有显著影响,浓度依赖性结果显示,TW918的吸收由一个饱和成分和一个非饱和成分组成;P-gp抑制剂维拉帕米对TW918的吸收无显著影响,而耐药相关性蛋白(MRP)抑制剂MK571可显著增加Caco-2对TW918的吸收(P＜0.05).双向转运的表观渗透性存在方向差异,且受浓度的影响.结论:TW918在Caco-2细胞中以主动和被动2种形式吸收,其吸收存在外排机制,可能是MRP2对TW918的吸收有外排作用.
关键词： TW918 Caco-2细胞模型 吸收 转运
