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基于Caco-2细胞模型研究蝙蝠葛碱的跨膜吸收机制
目的:研究蝙蝠葛碱在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制.方法:采用Caco-2细胞模型,进行A-B和B-A双向转运实验,计算表观渗透系数(Papp)、外排比率(ER)和累积转运量,考察蝙蝠葛碱不同质量浓度、细胞两侧pH梯度和螫合剂EGTA对蝙蝠葛碱转运的影响.结果:高、中、低浓度下的ER分别为1.11,4.49和7.24,即中、低浓度下转运有明显极化现象；顶侧pH 7.4和6.5时,ER值分别为3.95和9.38,即pH梯度存在时,蝙蝠葛碱吸收减少,外排增加；加入螯合剂EGTA后,Papp,ER和累积转运量均无显著改变.结论:蝙蝠葛碱的吸收有主动转运机制存在；pH梯度能驱动了蝙蝠葛碱的外排转运,偏碱性环境较酸性环境易于吸收；其吸收途径主要为跨细胞通道转运.
关键词： 蝙蝠葛碱 Caco-2细胞模型 吸收机制 吸收途径 -
蝙蝠葛碱精制工艺优选
目的:制备高纯度蝙蝠葛碱.方法:利用两性生物碱可溶于酸水、碱水且在pH8-9易形成沉淀的性质,从北豆根中提取酚性总碱；利用蝙蝠葛碱的酸性与其他碱酸性的差异性,采用碱水溶液萃取,将蝙蝠葛碱同其他酚性碱分离.结果:提纯后的蝙蝠葛碱利用HPLC进行含量测定,平均含量达96％以上.结论:优选的精制工艺稳定、可行且易操作.
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粉防己碱温敏性缓释原位凝胶的大鼠体内药代动力学分析
目的:采用LC-MS/MS测定静脉注射、灌胃粉防己碱原料药与皮下注射粉防己碱凝胶剂的血药浓度,计算粉防己碱凝胶剂的生物利用度.方法:建立血浆中粉防己碱含量的检测方法.通过颈静脉注射粉防己碱原料药、灌胃原料药、皮下注射凝胶剂后采血,采用LC-MS/MS检测大鼠血浆中药物浓度,流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1;采用电喷雾电离,正离子检测模式,粉防己碱和蝙蝠葛碱(内标)的m/z分别为623.1 ～ 176.0,625.1 ～ 206.0.利用DAS 3.0软件计算药动学参数并绘制药-时曲线,计算口服和皮下注射方式的绝对生物利用度.结果:建立的LC-MS/MS精密度、稳定性良好(RSD均＜11.0％),萃取回收率81.36％ ～97.14％.灌胃给予粉防己碱与皮下注射粉防己碱凝胶剂的绝对生物利用度分别为42.76％和85.44％.结论:粉防己碱凝胶剂的生物利用度较灌胃给予原料药大大提高,且具有缓释效果,具有一定的开发前景.
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蝙蝠葛碱对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响
目的:探讨蝙蝠葛碱对暂时性局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠脑半暗带区神经元细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响.方法:SD大鼠随机分成伪手术组,模型组和蝙蝠葛碱低、中、高剂量组.线栓法制备右侧大脑中动脉局灶性脑缺血模型,缺血1 h后再灌注24 h.于大鼠脑缺血后即刻及复灌后11 h及23 h蝙蝠葛碱组腹腔注射蝙蝠葛碱(2.5,5,10 mg·kg~(-1)),伪手术组和模型组则注射生理盐水对照.再灌注24 h后,多聚甲醛灌流固定大鼠脑组织,制作病理切片.TUNEL染色法原位检测大鼠脑半暗带区神经元细胞凋亡情况,免疫组化法检测半暗带区细胞色素C释放情况和caspase-3,caspase-9的表达.结果:与模型组细胞凋亡数(25.5±3.3)个/mm2比,蝙蝠葛碱中剂量组(18.9±2.02)个/mm~2和高剂量组(15.9±2.9)个/mm2大鼠脑缺血再灌注区神经元细胞凋亡程度明显改善(P<0.05),蝙蝠葛碱中、高剂量组半暗带区细胞色素C释放减少,caspase -3和caspase-9表达亦明显降低(P<0.01).结论:蝙蝠葛碱对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制可能与其抑制神经元细胞凋亡有关.
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蝙蝠葛碱抗离体家兔心房压增加所致机电反馈效应的研究
目的 探讨心房压增加引起的心肌电生理变化及蝙蝠葛碱对其的影响和机制.方法 采用离体 Langendoeff 心脏模型,观察房压增加前后心肌有效不应期(ERP)、单相动作电位时程(MAPD90)和房颤阈(VFT)的变化,测定各组心房肌Na+、K+和Ca2+水平,并比较蝙蝠葛碱和维拉帕米对上述参数变化的影响.结果 房压上升(20 cm H2O )引起 ERP 和 MAPD90缩短,AFT 下降,蝙蝠葛碱可有效抑制上述变化,且与对照组相比,心房肌Na+、K+和Ca2+水平均有下降(P＜0.01);而维拉帕米对此没有明显影响.结论 蝙蝠葛碱作为牵张激活性通道阻滞剂,通过抑制非选择性阳离子通道电流而消除超负荷时机电反馈效应.
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蝙蝠葛碱抗心脏机电反馈效应的初步研究
目的 探讨蝙蝠葛碱对左心室前负荷增加所致心电生理变化的机制.方法 采用豚鼠离体工作心模型,通过调节左房灌注压改变左室前负荷,观察负荷增加前后蝙蝠葛碱和维拉帕米对心肌单相动作电位时程(MAPD90)、振幅(MAPA)、有效不应期(ERP)和室颤阈(VFT)的影响;并比较超负荷后各组细胞内主要阳离子含量变化.结果 对照组负荷后MAPD90和ERP缩短,MAPA和VFT下降(均P＜0.01),蝙蝠葛碱组上述指标无显著变化(P＞0.05),同时心肌细胞内Na+、K+和Ca2+含量均有减少.结论 蝙蝠葛碱可能通过阻滞牵张激活性非选择性阳离子通道而抑制超负荷所致的机电反馈效应.
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蝙蝠葛碱药理作用的研究进展
蝙蝠葛碱是北豆根中主要的成分,根据以往研究表明蝙蝠葛碱(dauricine,Dau)具有抗心律失常、抗心肌缺血作用.是多种离子通道阻滞剂.现就Dau的药理作用研究现况做一综述报道.
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蝙蝠葛碱对快速心房起搏间隙连接蛋白40表达和分布的影响
近年发现,心房细胞间隙连接蛋白表达和分布的变化在心房颤动(房颤)的发生和维持中起重要作用.本研究观察家兔心房快速起搏后心房间隙连接蛋白40(Connexin40 ,Cx40)的变化及蝙蝠葛碱的干预作用.
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粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞凋亡
目的 观察粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱与长春新碱合用对多药耐药肿瘤细胞诱导凋亡的作用。方法 采用荧光染料Hoechst 33342和碘化丙锭联染技术、流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳技术，检测长春新碱及其与上述单体合用诱导耐药株瘤细胞MCF-7/Dox的凋亡程度。结果 单用长春新碱可引起约10%细胞凋亡，而长春新碱与粉防己碱、甲基莲心碱或蝙蝠葛碱合用明显地增加细胞凋亡的百分率，其中粉防己碱的作用强。联合用药的细胞凋亡数显著地大于单用长春新碱的作用。结论 粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱均有明显的增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞的凋亡作用。
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蝙蝠葛苏林碱在兔血浆浓度监测及药代动力学
目的建立测定血浆中蝙蝠葛苏林碱浓度的方法,并研究蝙蝠葛苏林碱在家兔体内的药代动力学.方法以蝙蝠葛碱作为内标.血浆样品经乙腈去蛋白,再用二氯甲烷两次萃取,采用RP-HPLC方法检测.结果血浆药物浓度在0.05～20.00 mg*L-1线性关系良好(r=0.999 6),低定量浓度为0.05 mg*L-1,绝对回收率均大于80%,相对回收率为(101±5)%,精密度试验的日内及日间RSD%分别为1.9%～5.6%和3.5%～6.5%.药代动力学研究表明,家兔蝙蝠葛苏林碱单剂量iv后,其体内血药浓度时间数据符合二房室开放模型.结论本方法专属性强、灵敏度高、回收率高、重现性好,可用于蝙蝠葛苏林碱血药浓度测定及药代动力学研究.
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高效液相色谱法测定蝙蝠葛碱的平衡溶解度和油水分配系数
目的:测定蝙蝠葛碱在不同pH条件下的平衡溶解度以及在正辛醇-缓冲液体系中的油水分配系数.方法:采用HPLC法测定蝙蝠葛碱的浓度,以饱和法测定平衡溶解度,采用摇瓶法-HPLC法测定蝙蝠葛碱在正辛醇和水相中浓度,从而计算油水分配系数.结果:37℃下蝙蝠葛碱的平衡溶解度随pH的升高而增大；油水分配系数随pH的升高而增大,在pH 6.8 ～8.0范围内(小肠的pH环境),蝙蝠葛碱的lgP约为0.5,说明其脂溶性较强.结论:蝙蝠葛碱平衡溶解度和油水分配系数都受pH的影响；本试验所建立的方法可准确测定蝙蝠葛碱的平衡溶解度和油水分配系数,并预测其体内过程.
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毒性导向下的北豆根中蝙蝠葛碱的质量控制方法学研究
目的 以北豆根不同组分的小鼠急毒研究为导向,进行北豆根毒性物质基础蝙蝠葛碱的质量控制方法学研究.方法 用高效液相色谱法测定北豆根全组分、水提组分、醇提组分中蝙蝠葛碱的含量.色谱条件:色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈- 0.05％三乙胺水溶液(40:60),流速:1.0mL/min,检测波长:282nm,柱温:25℃.结果蝙蝠葛碱在0.82～9.84g范围内与其峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.7％.对北豆根不同组分中的蝙蝠葛碱的含量测定,发现蝙蝠葛碱的含量大小为:全组分＞水提组分＞醇提组分.结论 高效液相色谱法测定北豆根中蝙蝠葛碱的含量,方法线性关系良好,精密度、稳定性、重现性均较好,回收率较高.北豆根不同组分中蝙蝠葛碱的含量大小与急性毒性间均有一定的关系,但不完全一致.初步提示中药成分复杂,蝙蝠葛碱不是北豆根中的唯一毒性物质基础,因此寻找其他毒性成分进行多成分指标控制北豆根质量,对于北豆根的毒性研究具有重要作用.
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提取方式对北豆根“质量-毒性”综合评价模式的影响
目的 对不同提取方式制备的北豆根中生物碱的含量和急性毒性大小进行比较研究,探讨不同提取方式对北豆根“质量-毒性”综合评价模式的影响.方法 以0.5％硫酸为溶剂,用热回流法、超声法、渗漉法、温浸法4种方法提取北豆根总生物碱,用酸碱滴定法测定了总生物碱的含量,用高效液相色谱法测定提取物中蝙蝠葛碱的含量,用经典急性毒性实验法进行急性毒性比较研究.结果 不同提取样品中总生物碱含量大小依次为:超声法＞渗漉法,热回流法和温浸法所得提取样品总生物碱含量无法测出.蝙蝠葛碱的含量是热回流法大于温浸法,但超声法和渗漉法未测出蝙蝠葛碱含量.不同提取方式对小鼠急性毒性大给药量( MLD)大小为:渗漉法＞超声法＞热回流法＞温浸法,以温浸法所得提取样品的急性毒性大.结论 提取方式不同,北豆根主要化学成分含量和毒性大小不同,而且其毒性大小与总生物碱和蝙蝠葛碱含量有一定的关系,但不完全一致.说明提取方式对北豆根“质量-毒性”综合评价模式有一定的影响,通过此综合评价模式确定有毒中药的提取方式,更全面客观合理.
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大鼠在体单向肠灌注模型研究蝙蝠葛碱肠吸收机制和吸收动力学
目的 研究蝙蝠葛碱在大鼠小肠的吸收特性及其机制.方法 采用在体单向灌流法进行小肠吸收实验,利用HPLC测定灌流液中蝙蝠葛碱的浓度,考察不同灌流速度、大鼠不同肠段和不同质量浓度对蝙蝠葛碱吸收的影响.结果 蝙蝠葛碱的吸收速度和吸收程度随灌流速度(0.1、0.2和0.4 mL·min-1)的逐渐增加而显著增加(P＜0.05)；蝙蝠葛碱在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收常数无显著性差异(P＞o.05)；高、中、低3个浓度下吸收速率常数Ka分别为(2.36±0.0073)×10-2、(3.73±0.005 2)× 10-2和(5.62±0.013 6)× 10-2min-1,表观渗透系数Papp分别为(2.02±0.0002)×10-3、(3.10±0.0007)×10-3和(5.31±0.001 0)×10-3 cm·min-1,透膜吸收百分率分别为8.66％、10.17％和19.06％,高、中、低3个浓度下蝙蝠葛碱在不同时间的累积吸收量和累积吸收百分率均较低,且各浓度间有显著性差异(P＜0.05).结论 蝙蝠葛碱的吸收随灌流速度增大而增大；其在整个肠道无特异性吸收部位；吸收机制有主动过程参与；其透膜能力差,胃肠道上皮细胞屏障作用是影响其口服生物利用度很低的重要因素.
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蝙蝠葛苏林碱和蝙蝠葛碱犬体内药动学-药效学结合研究
目的建立Beagle犬体内蝙蝠葛苏林碱(DS)和蝙蝠葛碱(Dau)的药动学-药效学(PK-PD)结合模型.方法通过测定给药后Beagle犬体内的血药浓度并以给药后的Q-Tc间期延长率作为效应指标,采用Sheiner等提出的PK-PD结合模型进行PK-PD结合研究.结果药物效应与效应室浓度成良好的相关性,符合Sigmoid-Emax模型,并通过计算得出相应的PK-PD模型参数.结论本试验在Beagle犬体内成功地建立了DS和Dau的PK-PD结合模型,建立了药物效应E,血药浓度Cp及时间t之间的关系,故可较为成功地预测DS和Dau的血药浓度及其效应.
关键词： 蝙蝠葛苏林碱 蝙蝠葛碱 药动学-药效学结合模型 -
HPLC法测定不同产地北豆根中蝙蝠葛碱的含量
目的 建立测定北豆根中蝙蝠葛碱含量的方法.方法 采用Agilent TC C18色谱柱；流动相为乙腈0.05％三乙氨梯度洗脱；检测波长为284 nm;柱温为35℃.结果 蝙蝠葛碱在0.149～2.678 μg范围内线性关系良好(r=0.9999);加样回收率为98.14％(RSD=0.83％,n=6).不同产地的11批北豆根样品中蝙蝠葛碱的含量为0.30％～0.79％.结论 本法简便、准确、重复性好.
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HPLC法测定蝙蝠葛酚性碱片中蝙蝠葛碱
蝙蝠葛酚性碱片是由从蝙蝠葛Menispermum dauricum DC.干燥根茎中提取的以蝙蝠葛碱为主的酚性生物碱制成的片剂,具有活血化瘀,行气止痛,扩张冠脉血管,改善心肌缺血作用,用于预防和治疗冠心病,心绞痛以及瘀血内阻之胸痹、眩晕、气短、心悸,胸闷或痛等病症.在前期研究[1,2]基础上,本实验采用高效液相色谱法测定了蝙蝠葛碱,以期为建立该制剂科学合理的质量控制方法提供依据.
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北豆根中生物碱类成分的研究
对中药北豆根与山豆根的鉴别方法,及北豆根中生物碱类成分,尤其是蝙蝠葛碱的提取分离、纯化、含量测定和指纹图谱的研究进行了综述.
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蝙蝠葛碱对成骨细胞分化成熟的影响
目的 探讨蝙蝠葛碱对成骨细胞分化成熟的影响及其机制.方法 正常人成骨细胞株(NHOst)培养在含有100ng/ml的蝙蝠葛碱的培养基中,7d后,通过相差显微镜观察细胞形态的变化,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALPase)和硝酸银(Von Kossa)镀银染色检测钙沉积.通过RT-PCR分析核心结合因子A1(Core binding factor A1,Cbfa1) mRNA的表达.通过Western-blot检测骨基质蛋白Osteocalcin的表达.结果 培养7d后,实验组细胞呈岛样生长并开始分化成熟,成熟的细胞形成骨结节,而对照组细胞则未见骨结节形成.通过碱性磷酸酶和硝酸银镀银染色发现,实验组细胞可见钙沉积,而对照组细胞未见钙沉积.实验组Cbfa1和Osteocalcin的表达都明显高于对照组.结论 蝙蝠葛碱可促进骨细胞分化成熟.
关键词： 蝙蝠葛碱 成骨细胞 分化 Cbfa1 Osteocalcin -
蝙蝠葛碱促进大鼠成肌细胞分化成熟及可能机制
目的 探讨蝙蝠葛碱对成肌细胞分化成熟的促进作用及可能机制.方法 培养正常大鼠的成肌细胞系(L6)在含有100ng/mL蝙蝠葛碱的培养基中,21d后,通过相差显微镜观察细胞形态的变化和肌管的形成,采用RT-PCR分析肌红蛋白(MyoD)家族中肌细胞生成素(Myogenin)和肌细胞调节因子4(muscle-specific regulatory factors 4,MRF4) mRNA的表达,采用Western-blot检测Myogenin蛋白的表达.结果 随着培养时间的延长,分散的梭形成肌细胞相互聚集,逐渐形成双核连肌管和多核连肌管并产生自律性收缩.暴露于蝙蝠葛碱后,成肌细胞聚集融合形成的肌管数目明显增加,肌管直径显著增大,并产生明显的自律性收缩(未见于同期对照组).RT-PCR和Westemn Blot测表明,成肌细胞的Myogenin和MRF4的表达水平在培养5d后达到峰值.蝙蝠葛碱处理后,Myogenin峰值表达水平持续时间显著延长,MRF4表达高峰出现延迟但表达量明显升高.结论 蝙蝠葛碱可促进大鼠肌细胞分化成熟.
