363 保健食品与药品的相互作用(1)：各种保健食品对大鼠肝微粒体药物代谢的影响

人参皂苷元类被大鼠肝微粒体代谢：氧化伴随的侧链环醚化

186 银杏成分4'-O-甲基吡哆醇与大鼠肝微粒体反应生成代谢物的结构分析

藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响

目的:考察藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响.方法:采用“Cocktail"探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时测定6种探针药物氨苯砜、氢溴酸右美沙芬、香豆素、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的代谢消除率,评价余甘子鞣质部位对P450酶中CYP3A4、CYP2D6、CYP2A6、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9亚酶活性的影响.结果:余甘子鞣质部位对P450酶影响较小,CYP3A4,CYP1A2的IC50值超过200 μg· mL-1,CYP2C9的IC5o值超过500 μg· mL-1.结论:藏药余甘子鞣质部位对肝P450酶活性影响较弱.

制何首乌对大鼠肝CYP1A2酶活性及mRNA表达的抑制作用

目的:考察制何首乌水提物对大鼠肝细胞色素P450酶亚型CYP1A2的酶活性及mRNA表达的影响.方法:水回流提取得制何首乌水提物,HPLC确定主要成分并测定其含量.大鼠随机分为空白对照组、制何首乌水提物组(2 g/kg和20g/kg),给药组每天按10 mL/kg量灌胃给予制何首乌水提物,连续7d.取肝分离肝微粒体,HPLC测定肝微粒体对CYP1A2酶的底物非那西丁的代谢消除率,考察肝微粒体CYP1A2酶活性;实时荧光定量PCR技术检测肝组织中CYP1 A2基因mRNA的表达.结果:与空白对照组相比,制何首乌水提物20 g/kg组大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达均明显降低(CYP1A2酶活性,P＜0.01;CYP1A2的mRNA表达,P＜0.05).结论:制何首乌水提物20g/kg对大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达有明显抑制作用.

次乌头碱、甘草苷单用与合用对大鼠肝脏CYP450酶mRNA表达与活性的影响

目的:探讨次乌头碱(HA)及甘草苷(LQ)分别及合并给药对大鼠肝脏细胞色素P450(CYP450)酶mRNA表达及活性的影响.方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组、HA组(2.1mg/kg)、LQ组(20mg/kg)、HA+LQ配伍组,每组3只,每天灌胃给药1次,连续给药7d.取肝组织一部分用于提取总RNA,其余肝组织用于制备大鼠肝微粒体(RLM).应用实时定量PCR检测肝脏CYP 3A1、3A2、1A2、2E1、2C7和2C11 mRNA表达量,探针底物经RLM温孵后检测CYP3A、1A2、2E1和2C活性.结果:HA组、LQ组和HA+LQ配伍组对CYP3A活性有一定抑制作用,对CYP2E1活性有较强诱导作用;LQ抑制了CYP1A2活性,HA诱导了CYP2C活性,但合用后对CYP1A2、2C活性无显著影响.此外,HA组、LQ组及HA+LQ配伍组对CYP2E1、1A2 mRNA表达无显著影响;HA组、LQ组对CYP3A1、3A2、2C7和2C11 mRNA表达有一定影响,但合用后能显著拮抗HA对上述基因表达的影响.结论:HA与LQ合用在一定程度上会抑制HA与LQ的代谢清除.此外,研究结果也提示临床上附子甘草药对与CYP3A、2E1和2C底物药物共用时,可能会发生代谢相互作用.

伪麻黄碱与麻黄碱对大鼠细胞色素P45O酶活性的影响

目的:分析伪麻黄碱与麻黄碱对大鼠细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响.方法:大鼠CYP450酶探针底物双氯酚酸钠(CYP2C6)、奥美拉唑(CYP2C)、非那西丁(CYP1A2)、氯唑沙宗(CYP2E1)和睾酮(CYP3A)分别与不同作用浓度麻黄碱或伪麻黄碱在大鼠肝微粒体中共温孵反应适当时间后,用HPLC法测定探针底物的相对代谢清除率.结果:伪麻黄碱对CYP1A1/2、CYP2E1的IC50值分别为54.0和206.7μmoi/L,而麻黄碱(400μmol/L)能使非那西丁、双氯芬酸的相对代谢清除率分别提高了1.3倍和0.6倍.结论:伪麻黄碱对CYP1A1/2、CYP2E1活性一定抑制作用,而麻黄碱对CYP2C、CYP1A1/2活性有一定诱导作用.

何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究

大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10g·kg-1)7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响.与空白对照组相比,1,10g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P＜0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg-1组P＜0.05,10 g·kg-1组P＜0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P＜0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.01).

抗HIV先导物DAAN-4048在大鼠肝微粒体的代谢产物

目的 应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)并辅以代谢数据采集和处理软件,快速筛查和鉴定了新型非核苷类逆转录酶抑制剂的先导物二芳烃取代苯胺类化合物(DAAN)-4048在大鼠肝微粒体的代谢产物,并分析结构中的代谢软点.方法 应用质量亏损过滤技术在UPLC-QTOF-MS/MS上比较分析0h与2h孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中筛查得到了DAAN-4048的10个代谢产物.应用仪器的碰撞能量梯度功能(MSE)对部分产物进行MS2分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构.结果 结果表明,先导物在大鼠肝微粒体中发生广泛的代谢,Ⅰ相代谢反应以氧化(羟基化)为主,Ⅱ相代谢主要以谷胱甘肽结合反应为主.结论 本文通过分析新型抗HIV先导物DAAN-4048的结构和代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为该类先导物结构优化和后续的临床前评价提供了科学指导.

抗HIV先导物DAAN-10341的体外代谢产物筛查

目的 应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLG-QTOF-MS/MS)并辅以代谢数据采集和处理软件,对新型非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)的先导物DAAN-10341在大鼠肝微粒体的代谢产物进行快速筛查和鉴定,并对其结构中的代谢位点进行分析.方法 应用质量亏损过滤技术在UPLC-QTOF-MS/MS上比较分析0h与2h孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中筛查得到了DAAN-10341的16个代谢产物.应用仪器的碰撞能量梯度功能(MSE)对部分产物进行MS2分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构.结果 先导物DAAN-10341在大鼠肝微粒体中的I相代谢反应以氧化(羟基化)为主;Ⅱ相代谢主要以葡糖醛酸结合反应与谷胱甘肽结合反应为主.结论 本文通过分析新型抗HIV先导物DAAN-10341的结构和代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为该类先导物结构优化和后续的临床前评价提供科学指导.

黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学

目的研究黄皮酰胺(clausenamide,Clau)对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学并比较其立体选择性差异.方法应用反相HPLC法测定Clau对映体在体外代谢系统中的产物,并用Eadie-Hofstee作图法分析数据、求算酶促反应动力学参数Km和Vmax以及肝代谢速率Vmax/Km.结果在体外代谢系统中,左旋黄皮酰胺主要生成7-羟-Clau、5-羟-Clau和4-羟-Clau,其优势代谢途径为7位羟化;7位羟化代谢的Vmax/Km值高于5位和4位.右旋黄皮酰胺的4位羟化反应Km小、Vmax大, 因此代谢速率高,是左旋体4位羟化的8倍;而其7-羟-Clau和5-羟-Clau 的产生量很小.结论黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的羟化代谢存在明显的底物立体选择性差异.

D-异苯环戊胺对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制和诱导作用

目的:本文探讨了D-异苯环戊胺对大鼠肝脏细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)酶活性的抑制和诱导作用.方法:采用探针底物法,通过考察D-异苯环戊胺在体外温孵体系中对大鼠肝微粒体CYP1A1/2,2C6,2D1/2,2E1和3A1/2的IC50值评价其对各亚型的抑制作用.通过考察大鼠连续灌胃10d后肝微粒体中CYP1 A 1/2和CYP3A1/2活性的变化评价其诱导作用.结果:D-异苯环戊胺对大鼠肝微粒体CYP2C6和CYP2D1/2的IC50分别为5.3和2.3 μmol·L-1,对分别以睾酮和咪达唑仑为底物时CYP3A1/2的IC50分别为8.3和1.7 μmol·L-1.30和100 mg· kg-1剂量D-异苯环戊胺连续灌胃给药10 d后,大鼠肝脏CYP1 A1/2和CYP3A1/2酶活性为空白对照组的2倍以上.结论:D-异苯环戊胺对大鼠肝微粒体CYP2C6,CYP2D1/2和CYP3A1/2表现出中等强度的抑制作用,对CYP1A1/2和CYP3A1/2有一定的诱导作用.

HPLC法测定珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体生物转化的时程曲线

目的:建立高效液相色谱(HPLC)分析方法研究珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体生物转化的时程曲线,并对转化产物E-5-甲氧基紫罗绒苔素乙酸酯(M3)和Z-5-甲氧基紫罗绒苔素乙酸酯(M4)进行朔源.方法:应用HPLC分析法测定珊瑚菜内酯的大鼠肝微粒体生物转化中的原形及其转化产物白当归素的含量.色谱柱为DiamonsilTM ODS C18(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1;检测波长为315 nm;柱温为25.0℃.通过转化产物不同萃取方法的比较,朔源M3和M4.结果:绘制了珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体体外的生物转化时程曲线,在60 min内下降较快,在60 ～ 240 min内基本稳定.其转化产物白当归素在60 min时达大值,然后开始下降,到120 min时基本稳定.在大鼠肝微粒体温孵培养物中,珊瑚菜内酯和白当归素分别在600～1 800和0.2 ～2.4 μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好(r2＞0.999),方法的精密度和稳定性RSD均小于15％;回收率分别为88.6％ ～ 92.9％和79.0％～89.5％,RSD均小于15％.结论:本研究建立的分析方法经方法学验证,可对大鼠肝微粒体温孵培养物中珊瑚菜内酯和白当归素含量进行测定,快速、准确、灵敏;珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体体外的生物转化缓慢;M3和M4是“人工”转化产物.

甲基丁香酚的大鼠肝微粒体生物转化

甲基丁香酚(1)是中药肉豆蔻的主要成分之一,将其与大鼠肝微粒体共温孵,从温孵物中通过色谱方法得到原形化合物1和8个转化产物(2-9),根据谱学数据并与文献报道数据比较,确定它们分别为(R)-1'-甲氧基甲基丁香酚(2)、3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-甲氧基-2-丙烯(3)、顺式-3,4-二甲氧基桂皮酰乙酯(4)、反式-3,4-二甲氧基桂皮酰乙酯(5)、(R)-1 '-羟基甲基丁香酚(6)、反式-3,4-二甲氧基桂皮醇(7)、顺式-3,4-二甲氧基桂皮醇(8)、(R)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-丙烷-1,2-二醇(9).化合物7和8的13C NMR数据为首次报道.本文结果为甲基丁香酚的应用提供了有用的信息.

TM208在大鼠肝微粒体中代谢产物与细胞色素P450亚型代谢酶鉴别研究

在大鼠肝微粒体的体外代谢中研究作用于TM208的细胞色素P450亚型代谢酶.以不含细胞色素P450化学抑制剂的样品为对照,研究不同细胞色素P450亚型选择性化学抑制剂对TM208代谢转化率的影响.CYP2D和CYP2B的选择性抑制剂对TM208的代谢表现出浓度依赖性较强抑制作用,CYP1A的选择性抑制剂对TM208的代谢表现出一定抑制作用.CYP3A的选择性抑制剂对TM208的代谢没有表现出明显的抑制作用.TM208在大鼠肝微粒体体外代谢中主要通过CYP2D和CYP2B两种细胞色素P450亚型代谢酶参与代谢.

HPLC 测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶活性及体外动力学研究

目的 建立一种测定1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)高效液相色谱分析方法,并以1-氯-2,4-二硝基苯为探针测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性并进行体外动力学分析.方法 色谱条件:Welch Materials UltimateTM XB C18反相柱(4,6mm× 250 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(7:3),流速0.8 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长238 nm.实验方法:1-氯-2,4-二硝基苯与大鼠肝微粒体在37℃温孵7 min后,冰乙腈终止反应.反应液离心取上清液过滤后进行HPLC分析,通过Sigma Plot软件作图求算Vmax、Km及代谢清除率(CLint)值.结果 1-氯-2,4-二硝基苯的Rt=6.0 min,峰形良好,且无内源性干扰.低检测限为1.0 μmol·L-1,线性范围:2.5 ～100.0μmol·L-1.日内、日间精密度均小于10％.5d内于室温及- 20℃下较稳定.方法回收率为99.38％～108％.动力学分析表明,不同浓度1-氯-2,4-二硝基苯在0.02 mg·mL-1蛋白浓度下孵育7 min,测得动力学参数:Vmax为85.45 nmol·min-1·(mg protein)-1；Km为15.09 μmol·L-1；CLhet为5.66 mL·min-1·(mg protein)-1.结论 该方法稳定可靠,灵敏度高,能准确快速测定谷胱甘肽硫转移酶活性,可用于其体外动力学研究.

UPLC-MS用于体外大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP2D1酶代谢活性表征及动力学研究

目的 建立大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP2D1酶活性的快速测定方法并考察两种CYP酶反应动力学.方法 利用CYP1A2和CYP2D1选择性探针底物即非那西丁与右美沙芬进行温孵实验,采用超高压液相色谱与质谱联用(UPLC-MS)的方法建立相应代谢产物的含量测定方法.结果 非那西丁代谢产物对乙酰氨基酚的线性范围为0.409 ～ 10.227μmol·L-1(r2 =0.999 1),LOD和LOQ值分别为0.067和0.267 μmol·L-1;右美沙芬代谢产物去甲右美沙芬为0.020～5.051 μmol·L-1(R2=0.998 0),LOD和LOQ值分别为0.002和0.007μmol·L-1.方法回收率分别为95.9％～104.0％和102.1％～107.1％,精密度以RSD值表示均低于5％.CYP酶活性测试及反应动力学表明,CYPl A2和CYP2D1的米氏常数(Km值)分别为(28.4±2.7)和(13.9±1.3) μmol·L-1;其代谢活性(底物浓度为10 μmol·L-1时)分别为(1.47±0.12)和(3.98±0.09)nmol·mg-1.结论 本实验建立的UPLC-MS分析方法快速、灵敏、准确、可靠,适用于药物代谢研究中CYP1A2和CYP2D1体外活性测定及其反应动力学分析.

何首乌中8种成分在大鼠肝微粒体体系中的肝毒性研究

目的 以胆红素代谢过程中UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1酶)介导的胆红素葡萄糖醛酸结合环节为切入点,考察何首乌中8种单体成分肝毒性.方法 以胆红素为UGT1A1酶底物,以表观抑制常数Ki为评价指标,采用体外大鼠肝微粒体孵育法测定待测单体成分肝毒性有无及大小,并寻找构效关系.结果 8种待测单体成分在大鼠肝微粒体(RLM)体系中对UGT1A1酶的抑制情况分别为:大黄素-8-O-葡萄糖苷(中等强度抑制)＞大黄素(中等强度抑制)＞羟基大黄素(中等强度抑制)＞儿茶素(弱抑制)＞没食子酸(无抑制)＞大黄素甲醚(无抑制)＞大黄酸(无抑制)＞大黄素-6-O-葡萄糖苷(无抑制).且存在构效关系,推测6位羟基为活性必需基团.结论 本实验所建立的体外研究方法稳定可行.实验结果证明,酶抑制作用存在一定的结构选择性,为预测同类结构对酶活性作用提供实验基础.

介导盐酸双苯氟嗪代谢的细胞色素P450酶鉴别

目的 鉴别参与盐酸双苯氟嗪(Dip)代谢的大鼠肝微粒体细胞色素P450酶(CYP)亚型.方法 制备SD大鼠肝微粒体并与Dip孵育,产生的Dip代谢产物(M1,M2,M4和M5)采用LC-MS/MS鉴别,通过细胞色素P450酶选择性抑制剂实验、相关性分析实验和重组酶实验确定参与盐酸双苯氟嗪代谢的CYP酶亚型.结果 抑制剂研究、相关性分析实验和重组酶实验3种分析方法测定结果均显示,大鼠肝微粒体中CYP2A1、CYP3A和CYP2C11是催化生成M1和M5的酶亚型;代谢盐酸双苯氟嗪生成M2的CYP酶按作用大小依次为CYP3A、CYP2A1、CYP1 A2、CYP2C1 1和CYP2E1;转化盐酸双苯氟嗪生成M4的酶亚型活性高低依次为CYP3A、CYP2A1、CYP2E1和CYP2C1 1,重组酶实验结果还进一步表明CYP3A2较CYP3A1具有更强的活性.结论 CYP3A和CYP2A1均参与了Dip 4种代谢物的生成反应.

五味子和甘草对大鼠肝药酶的诱导作用导致利多卡因药动学的改变

通过大鼠的体外和体内药代动力学研究,探讨了五味子和甘草与其他药物之间的相互作用.雄性SD大鼠口服6 d五味子或甘草水煎液,剂量为生药1 g或3 g/kg,空白对照和阳性对照分别给予蒸馏水和苯巴比妥钠(0.12 g/kg),制备各给药组肝微粒体并测定P450水平.以利多卡因为探针药物,以给予五味子、甘草或苯巴比妥钠6 d的大鼠肝微粒体研究其体外代谢速率;在体内药代动力学的研究中,大鼠先口服6 d五味子、甘草或苯巴比妥钠,第7天静脉给予利多卡因(10 mg/kg),测定血浆和尿液中利多卡因的浓度,计算出药动学参数.结果:五味子组和甘草组大鼠P450水的平与对照相比有显著差异,P450水平与剂量和时间呈相关性.第6天,与空白对照的P450水平(0.695 μmol/g)相比,五味子组、甘草组和苯巴比妥钠组分别增加了58%、91%和270%.在服用了五味子、甘草和苯巴比妥钠的大鼠肝微粒体中利多卡因的代谢速率明显高于空白对照,而体内的药动学参数也明显改变.在五味子组和甘草组中,利多卡因的半衰期分别缩短了28%和39%,总清除率增加了76%和59%.表明五味子和甘草对P450同工酶具有诱导作用.因此,当其他药物与五味子或甘草合用时,其有效性和安全性将会受到影响.