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基于UPLC-Q-TOF/MS的RAW264.7细胞炎症模型的代谢指纹分析
为揭示炎症细胞模型的极性代谢组特征,该文选择RAW264.7细胞为研究载体,以LPS刺激诱导炎症细胞模型,进行细胞代谢组学的指纹分析.具体方法为:筛选、优化了细胞内极性代谢物的提取方法,建立了利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)进行细胞内代谢组的数据采集方法,采用正交偏小二乘判别分析(OPLS-DA)进行数据处理,筛选并初步鉴定了17种差异代谢物.结果显示,采用MeOH-CHCl3-H2O(8∶1∶1)作为提取溶剂,色谱峰数目较多,细胞内极性代谢物提取效率较高,分析方法的稳定性较好;与正常细胞相比,炎症细胞的蛋白质代谢、糖代谢、核苷酸代谢等代谢通路受到扰动.该研究建立了基于UPLC-Q-TOF/MS的RAW264.7细胞代谢组学指纹分析方法,为揭示细胞炎症机制及抗炎药物机制研究奠定基础.
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抗HIV先导物DAAN-4048在大鼠肝微粒体的代谢产物
目的 应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)并辅以代谢数据采集和处理软件,快速筛查和鉴定了新型非核苷类逆转录酶抑制剂的先导物二芳烃取代苯胺类化合物(DAAN)-4048在大鼠肝微粒体的代谢产物,并分析结构中的代谢软点.方法 应用质量亏损过滤技术在UPLC-QTOF-MS/MS上比较分析0h与2h孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中筛查得到了DAAN-4048的10个代谢产物.应用仪器的碰撞能量梯度功能(MSE)对部分产物进行MS2分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构.结果 结果表明,先导物在大鼠肝微粒体中发生广泛的代谢,Ⅰ相代谢反应以氧化(羟基化)为主,Ⅱ相代谢主要以谷胱甘肽结合反应为主.结论 本文通过分析新型抗HIV先导物DAAN-4048的结构和代谢转化,发现易于发生代谢的位点和结构特征,为该类先导物结构优化和后续的临床前评价提供了科学指导.
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两类抗HIV先导物的大鼠肝微粒体代谢产物筛查
应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)并辅以代谢数据采集和处理软件,快速筛查了两类新型非核苷类逆转录酶抑制剂先导物DAPA-7012和DAAN-4442在大鼠肝微粒体的代谢产物,并分析结构中的代谢软点.应用质量亏损过滤技术在UPLC-QTOF-MS/MS上比较分析0h与2h-孵育样品的数据,在大鼠肝微粒体孵育液中分别筛查得到DAPA-7012的14个代谢产物和DAAN-4442的14个代谢产物.应用仪器的碰撞能量梯度功能(MSE)对部分产物进行MS2分析,获得代谢产物的碎片,推断碎裂途径及产物结构.结果显示,两个化合物的Ⅰ相反应以氧化(羟基化)为主,Ⅱ相反应以谷胱甘肽结合为主.骨架结构上B环的差异(吡啶环和苯环)对两类先导物的肝微粒体代谢途径没有显著影响.化合物共同的易代谢位点是B环上的伯胺基与C环上的甲基.不同之处在于DAAN-4442 B环4-位上的硝基易发生还原反应,DAPA-7012C环的苄基碳原子(亚甲基)更易发生氧化反应.课题组前期构效关系(SAR)研究结果表明,伯胺基与甲基均为活性必需基团,有必要通过进一步结构优化来提高这些活性基团的稳定性.将先导物代谢产物信息与结构-活性分析相结合,可以为先导物结构优化提供参考.
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基于代谢组学方法的制附片煎煮过程成分变化规律及煎煮时限探讨
目的 分析制附片在煎煮过程中化学成分群的变化规律,探讨制附片的科学煎煮时限.方法 利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)技术对不同煎煮时间的制附片化学成分群信息进行采集,结合多元统计分析技术手段对采集得到的高精度数据进行处理,发现并鉴定出随煎煮时间变化显著的差异化合物,并对其变化规律、毒性及活性进行综合分析.结果 经偏小二乘判别分析(PLS-DA)法及t检验筛选得到15个差异化学标志物;通过分析4h内不同成分的变化规律发现,制附片煎煮过程中尼奥林等众多酯性牛物碱并不受热水解,成分变化主要是单酯型生物碱向醇胺类原碱的转变,而双酯型生物碱的水解是次要的.结论 临床治疗过程中,制附片若以发挥镇痛抗炎作用为主,建议常规煎煮0.5 h即可;若以发挥强心作用为主,还需要对单酯型生物碱与醇胺类原碱的强心活性进行系统比较,才能够确定久煎的必要性与科学性.
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UPLC-QTOFMS法快速测定饮料中三聚氰胺
目的:建立咖啡、奶茶、豆奶、牛奶等饮料中三聚氰胺的超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用( UPLC - QTOFMS)方法.方法:样品经1％三氯乙酸溶液和乙腈处理,以ACQUITY UPLC BEH C8柱(2.1×100 mm,1.7 μm)为分离柱,以10 mmol/L乙酸铵:乙腈(1∶1)为流动相,采用QTOFMS技术检测.结果:1 min内可快速分离测定三聚氰胺,在0.4 mg/L～ 200 mg/L内线性关系良好,加标回收率为75.5％ ～117％,RSD为2.12％ ～9.77％.结论:该方法快速、准确,可用于饮料中三聚氰胺的快速测定.
关键词： 超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱 三聚氰胺 饮料 -
罗布麻叶黄酮类成分的UPLC-Q-TOF-MS分析
目的:建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对罗布麻叶中黄酮类成分分析的方法.方法:采用Alltima C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-1％醋酸为流动相,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃.在电喷雾负离子模式下监测采集数据.结果:初步鉴定出11个黄酮类化合物,并同时测定其中6个黄酮的含量.6个黄酮的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.9996),加样回收率为94.3％ ～ 103.3％.结论:该方法准确可靠,重现性好,可作为罗布麻叶内在质量评价的依据.
关键词： 超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱 罗布麻叶 黄酮类 -
超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱同时测定樟芝菌粉中6个核苷类化合物及其指纹图谱研究
目的:建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)同时测定樟芝菌粉中尿嘧啶、胞苷、腺嘌呤、鸟苷、胸苷和腺苷6个核苷类成分及其指纹图谱的分析方法.方法:采用Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以甲醇-5 mmol·L-1醋酸铵溶液(pH 8.5)为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,检测波长为254 nm,柱温为30℃.在电喷雾正离子模式下,输入各化合物的分子离子质量数得到相应的提取离子色谱图,以色谱峰面积进行定量分析;以腺苷为参照物,测定其指纹图谱,并作相似度评价.结果:尿嘧啶、胞苷、腺嘌呤、鸟苷、胸苷和腺苷的浓度分别在0.3571～35.71μg· mL-1(r =0.9993)、0.2032 ～20.32μg· mL-1(r =0.9995)、0.0601 ～6.01 μg· mL-1(r =0.9998)、1.6160～161.60μg· mL-1(r =0.9996)、0.4809 ～48.09 μg· mL-1(r =0.9998)、0.5988 ～ 59.88 μg·mL-1(r=0.9993)范围内与各自峰面积值呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为106.7％、103.3％、98.8％、94.6％、97.1％、102.6％,RSD分别为3.9％、5.3％、5.7％、4.8％、6.4％、4.8％;初步建立了以9个共有峰为特征指纹信息的樟芝菌粉UPLC-MS提取离子流(EIC)指纹图谱.结论:该定量方法快速、准确,所建立的提取离子流指纹图谱专属性强,两者结合可实现对樟芝菌粉内在质量的综合评价和较全面控制.
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UPLC-QTOF-MS结合主成分分析法用于龟甲胶、鹿角胶中添加牛皮源成分的检测研究
目的:建立龟甲胶、鹿角胶中非法掺人牛皮源成分的检测方法.方法:采用胰蛋白酶对龟甲胶、鹿角胶、牛皮源成分进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)进行测定,采用Markerlynx软件对3种胶类的液质数据进行主成分分析,找出鉴别牛皮源成分的专属性特征肽段,并对特征肽的序列进行确认.结果:对19批样品进行检测发现,其中8批龟甲胶及8批鹿角胶中可检出牛皮源成分的特征肽段.结论:所建立的方法经验证,专属性较强,可用于龟甲胶、鹿角胶中非法掺人牛皮源成分的检测.
