首页 > 文献资料
-
1-14 低氧处理对肝癌细胞生长和NQ01酶活性的影响
目的研究低氧环境下肝癌细胞生长是否被抑制,胞内Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)活性是否被诱导增高,以及二者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种于96孔培养板内,5%CO2孵箱培养24h后,换新鲜培养液(已用混合气预先平衡)放入低氧小罐,用5%CO2~95%N2混合气体进行缺氧处理(O2%<0.1%),分别培养6、9、12、24、36 h后,取出培养板,以MTT比色法检测细胞生长情况;NQ01酶活性采用微孔板直接测定法、细胞数用结晶紫染色法测定,NQ01酶活性结果表达为NQ01酶比活力(specifie activity)=A(NQ01酶活力)/B(细胞数).结果低氧处理6 h后细胞NQ01酶比活力较常氧对照组下降,而细胞生长加快.在9 h后,酶比活力呈现时效性升高,且低氧组酶比活力明显高于对照,而细胞生长则减慢(与常氧对照组比较均为P<0.01).将细胞生长曲线与酶活时间曲线作相关分析,统计学上差异无显著性.结论低氧处理在短时程内能够刺激肝癌细胞生长加快,抑制胞内NQ01酶活性;而超过这一时间段之后则使细胞生长减缓,诱导NQ01酶活性升高.
-
1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P<0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P<0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P<0.01);酪醇在70~100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P<0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
-
SLT型自动洗板机不进液故障的修理
简介进口的SLT型自动洗板机是,我院1996年引进.该仪器利用微处理器控制,能够使用九种软件定义板型,可根椐需要随时设置清洗方式、清洗模式,仪器的清洗头有三种:8针、12针、16针.微孔板上每个孔对应一个进液针和一个排液针,进液和排液速度有五种选择,自动化程度较高,大大降低了医护人员的劳动强度.深受各大医院欢迎.近期我们在做维修、保养时发现该机进液出现故障.我科受理了这一维修任务,下面介绍维护处理过程.
-
550型酶标仪特殊故障检修1例
550型酶标仪是日本 Bio-Rad厂家的产品,是一台具有 8道垂直光路的光度计,可以对 96微孔板进行光吸收值的检测.既可进行单波长,又可进行双波长的检测,还可将光吸收值以三位数字测定报告出来.整机由 CPU控制,机内有内置的软件,通过面板上的膜键和液晶显示指令进行程序操作.该机具有自检功能,出现常见故障,均能提示故障信息,帮助用户自我诊断排除.
-
洗板机的维修
洗板机是微处理器控制的专门用于洗微孔板的清洗机.是检验科的常用设备.现将其常见故障及维修情况简介如下.
-
多功能光度仪的使用与故障维修
化学发光检测是分子生物学实验中的重要环节,根据检测模式可分为单光子检测仪和微孔板光度仪.
-
ALISEI全自动酶免分析仪器几个常见故障处理
ALISEI全自动酶免分析仪器是一部高速全自动,可以使我们在微孔板上进行免疫分析实验的分析系统.它是一部非常自动化,灵活,可以进行任何免疫实验测定的分析系统.该仪器自动化程度很高,所以由于工作量大或使用年限长久而出现些故障.现总结几个常见故障的维修经验,供参考.
-
用微孔板微量测定血清总蛋白的评价
建立血清总蛋白双缩脲法在微孔板中运用酶标生化分析仪微量测定.方法学研究证明该法的精密度及准确度较好,且样品微量、性能稳定、检测快速、操作简便等优点,报道如下.
-
Elispot阅读仪中微孔板精确定位的一种图像方法
该文提出了一种Elispot阅读仪中微孔板孔底精确定位裁剪的图像方法,该方法解决了微孔板孔底图像的精确裁剪问题,降低了对机电定位和微孔板制造精度的要求.
关键词: Elispot阅读仪 微孔板 斑点分析 定位裁剪 -
建立引物双标记的聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测军团菌mip基因
建立一种新的检测嗜肺军团菌mip基因的引物双标记聚合酶链反应-酶联免疫吸附(PCR-ELISA)法,应用于豚鼠军团菌感染的早期检测和诊断.其方法是将一对嗜肺军团菌引物分别标记有生物素和异硫氰酸荧光素,经PCR扩增后,将标记有生物素的PCR扩增产物加入链酶亲和素包被的微孔板中,洗去未结合物后直接加入碱性磷酸酶标记的抗荧光素抗体,待与荧光素结合后,再加入底物产生显色反应,ELISA仪测得A值.
-
采用PCR微板核酸杂交-ELISA技术进行HBV DNA基因分型的研究
目的采用PCR微板核酸杂交-ELISA技术对HBV DNA进行基因分型研究。方法采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术,首先将HBV DNA进行PCR扩增,并将扩增产物加入预先包被HBV通用探针的微孔板,再加入HBV各基因型显色探针,同时进行微板核酸夹心杂交-ELISA显色,对152例临床诊断为不同程度乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型。结果 152例不同临床表现的肝炎患者血清中的HBV DNA的基因型大多集中在B、C和D这3种基因型,其所占比例分别为:B型28.29%(43/152)、C型37.50%(57/152)、D型18.42%(28/152);A型、E型、F型所占比例很少,各只有3.29%(5/152)。还存在一定比例的混合基因型,B、C、D三型不同组合的混合型共占10.53%(16/152)。结论 PCR微板核酸杂交-ELISA方法可以准确、快速、简便进行HBV基因分型,在探讨HBV的流行病学及观察各基因型毒力强弱及致病性大小方面有重要意义。
-
乙型肝炎病毒基因定量聚合酶链反应的临床应用
乙型肝炎病毒(HBV)感染时,外周血中HBV DNA是反映病毒复制活动直接和可靠的标志,其含量直接代表患者病毒血症水平.近年来,随着聚合酶链反应(PCR)的不断发展,在HBV DNA定性检测基础上建立了定量检测方法,灵敏度和特异性不断提高,在研究病毒感染量与临床病情的关系,进一步评价HBV感染的自然史和HBV血清标志物的临床意义及鉴定抗病毒药物疗效等方面具有重要意义.我们采用PCR-微孔板酶联杂交法定量检测102例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,以探讨病毒复制水平与血清标志物表现模式之间的关系,以期为广大乙肝患者的诊治及预测临床转归提供参考.
-
突变受阻性扩增系统快速检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的初步研究
利福平(RFP)是结核化疗方案中的一个关键药物,它的应用可明显缩短结核病的疗程.因此,创建快速、简便的检测方法一直是基础研究中的一个重要课题.突变受阻性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)[1]是一种可以检测任何已知点突变或小基因片段缺失的扩增技术,简便、可靠、无同位素污染.我们选择与结核分枝杆菌(结核菌)RFP耐药相关的rpoB基因中突变频率高的3种突变形式:531 TCG→TTG,526 CAC→TAC,516 GAC→GTC来设计ARMS特异性突变引物,ARMS-聚合酶链反应(PCR)扩增后结合微孔板探针杂交酶免疫技术(EIA)加以检测其扩增产物,进而推断其RFP耐药与否.
-
基于微生物生长状态估计电磁辐射场强的空间分布
目的:研究利用微生物微孔板培养及三维图形显示技术建立一种基于微生物(大肠杆菌)生长状态估测电磁辐射场强空间分布方法的可行性.方法:按照常规分子克隆方法将转化入质粒pET28b-tat-EGFP(Kana+抗性,卡那霉素抗性)的大肠杆菌BL21(DE3)接种到96孔板(150 μl/孔),置于工作频率为34.1 GHz、平均功率密度为12 W/cm2的高功率毫米波辐射源正下方分别连续照射1、5和10 min,照射后迅速置于37℃恒温箱培养6 h,检测D570值并在MatLab软件中采用三次方程插值法实现所测微孔板数据的三维图形显示,进而与红外热像仪监测结果及计算机模拟计算结果相比较,从而估计特定空间辐照强度的分布情况.结果:毫米波辐照1~5 min后,微孔板中靠近边缘区域的部分菌体生长增强,表现为三维图形中的波峰,而中间区域的菌体生长状态基本不变或被轻度抑制;照射10 min后,微孔板中心区域的菌体生长状态受到明显抑制,表现为三维图形中的波谷,而周边微孔中的菌体生长状态基本不受影响,且此时红外热像仪监测结果显示微孔板中心区域高温度达52.4℃.利用MatLab进行三维图形模拟显示的结果与红外热像仪监测结果及计算机模拟计算结果基本吻合.结论:利用微生物(大肠杆菌)的生长状态间接估测毫米波辐射源场强空间分布的方法是可行的,为进一步深入研究电磁辐射的生物效应奠定了基础,可望为电磁辐射的生物剂量学研究提供新的参考手段.
-
利用文本识别及图形显示技术实现微孔板实验数据的快速分析
质控可使文本识别的正确率达100%,并且在PowerPoint中实现了微孔板数据的直观平面显示,同时利用插值法在MatLab中实现了微孔板数据的三维图形显示,为批量进行微孔板实验数据的快速处理和分析提供了一种有效方法.其中的文本识别过程具有通用性(亦可用于ELISA数据的快速识别和录入),而图形显示技术则可结合特定目的灵活使用(例如动态显示微生物或培养细胞的生长曲线等).结论:该方法能够便捷地实现微孔板实验数据的批量分析,具有一定的实用性和推广价值.
-
无须离心的微孔板凝聚胺抗体筛查法及其应用
目的:建立一种简便、快速的无须离心的微孔板凝聚胺抗体筛查方法.方法:将传统的试管凝聚胺法进行改进,采用自制的微孔板代替传统的试管,省却离心等步骤进行不规则抗体筛查.结果:将无须离心的微孔板凝聚胺法同传统的试管凝聚胺法及抗球蛋白法进行比较,无须离心的微孔板凝聚胺法与试管凝聚胺法检测抗-D、抗-E灵敏度无差异,都高于抗球蛋白法,无须离心的微孔板凝聚胺法抗-C稍低于试管凝聚胺法(1∶256 & 1∶512),与抗球蛋白法相同;输血前筛查150份标本,同时发现2例不规则抗体,分别为抗-D及抗-M;对以前鉴定的11例不规则抗体,两者都漏检了抗-Jka,其他完全一致.结论:无须离心的微孔板凝聚胺法无须试管及离心设备,具有简便快速、经济有效等特点,是一种可行的抗体筛查方法.
-
PW-960型全自动酶标洗板机的故障排除
0 引言PW-960型全自动酶标洗板机采用先进的设计理念和成熟的技术,操作直观简便、可靠性高、洗涤干净,适用多种规格微孔板(96孔板或48孔板).其多可存储99个洗板程序,可灵活设置洗板大值(1~99);浸泡和振动2种清洗方式,时间1~999 s可选;具有可底部冲洗、两点吸液功能,程控调节加液时间,安全阀可调节加液流量;1~12条微孔任意条组合清洗;位置调节功能定义每个洗板程序对应储存一种酶标板位置参数;批量修改洗板程序参数,尤其是位置参数;废液溢出报警,自动暂停洗板动作,排除后可继续执行前面的洗板工作.
-
PW-960型全自动酶标洗板机的故障排除与维护
随着现代科技的发展,实验室自动化分析仪越来越普遍,如何正确使用和维护医用电子仪器,已成为各实验室的一个重要课题.PW-960型全自动酶标洗板机操作简便、可靠性强、洗涤干净、洗板模式灵活,有单板、双板、多板3种,并且增加了底部冲洗、两点吸液、震荡和液量调节等功能,适用于酶联免疫吸附测定实验中多种规格微孔板(如平底、网底、U型、V型板等)的清洗.现将使用过程中的常见故障排除及维护保养总结如下,供参考.
-
TECAN Freedom EVOlyzer全自动酶免分析一体机的应用体会
Freedom EVOlyzer(全自动酶免工作站)是TECAN公司推出的新一代全自动酶免分析工作站.它具备专业的酶免分析平台,可满足不同批处理量的试验要求,实现微孔板ELISA试验的自动化,并且依靠其高品质的组件来确保酶免试验高效、快速、安全地完成[1].
-
安图iWO-960全自动洗板机的维护与保养
0 引言近年来,随着医学技术的飞速发展,新的医疗设备不断涌现,直接推动着医院的发展进步.iW0-960全自动洗板机是安图公司针对医院检验科研发的新产品,该洗板机具有性能可靠、洗涤效果好的优点,并可对酶联免疫实验中各种规格的微孔板进行全自动清洗.然而,如果在日常工作中不能对常见故障及时处理和维护保养,必将直接影响医生对酶联免疫实验结果的判断,并可能造成严重的后果.为了使iW0-960全自动洗板机在实验室检测中发挥更好的作用,现将我们工作中一些常见的故障和处理方法及维护保养经验介绍如下.