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建立引物双标记的聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测军团菌mip基因
建立一种新的检测嗜肺军团菌mip基因的引物双标记聚合酶链反应-酶联免疫吸附(PCR-ELISA)法,应用于豚鼠军团菌感染的早期检测和诊断.其方法是将一对嗜肺军团菌引物分别标记有生物素和异硫氰酸荧光素,经PCR扩增后,将标记有生物素的PCR扩增产物加入链酶亲和素包被的微孔板中,洗去未结合物后直接加入碱性磷酸酶标记的抗荧光素抗体,待与荧光素结合后,再加入底物产生显色反应,ELISA仪测得A值.
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双硫腙水相直接光度法测定食品中铅
铅是一种对人体有害的金属元素,也是食品卫生检测中的一项重要指标.食品中铅的测定方法有双硫腙分光光度法[1]、原子吸收光谱法[2]、离子光谱法[3]和电位溶出法[4]等.双硫腙分光光度法是测定食品中铅含量的国标方法之一.由于双硫腙与铅在水相中显色反应的灵敏度较差,反应生成的有色络合物在水相中的稳定性较低,因此采用双硫腙分光光度法测定食品样品中铅时,必须将有色络合物萃取至三氯甲烷等有机溶剂中[5],操作繁琐,容易增加操作误差.此外,目前所采用的双硫腙分光光度法中,需使用剧毒物质氰化钾作为掩蔽剂消除样品中的铜、锌、银等共存离子对测定结果的干扰,容易引起操作安全性问题.我们在前文研究的基础上[6],利用表面活性剂Tween20的胶束增溶作用,建立了以双硫腙水相反应体系直接比色测定食品中铅的新方法.该方法中不需要使用有机溶剂萃取,同时又避免了使用氰化钾等有毒物质.用本法测定了多种食品样品中铅的含量,取得了满意结果.
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苯胺蓝结合染色测定脑脊液蛋白质方法的探讨
脑脊液(CSF)蛋白质测定的方法目前常用的有邻苯三酚红钼络合显色法、比浊法及散射浊度法等~([1-2]).但苯胺蓝结合染色测定CSF蛋白质含量的方法,尚未见有报道.苯胺蓝是一种重要的酸性染料,其在酸性条件下与蛋白质结合成复合物并发生显色反应,用于人血清样品中总蛋白的测定,与澳甲酚绿方法一致~([3]).
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亳芍生物碱提取及含量测定
目的探讨亳芍生物碱提取、定性鉴别及含量测定方法。方法95%乙醇提取亳芍干粉,总提物回收乙醇后盐酸酸化,二氯甲烷萃取除杂,加氨水中和至弱碱性后氯仿萃取获总生物碱提物,薄层色谱检测,改良碘化铋钾等显色,酸碱滴定法测定总生物碱含量。结果总生物碱提取物经薄层色谱展开后,改良碘化铋钾显色,可检测到4个橙红色斑点;浓硫酸显色,其中2个斑点呈紫红色;甲醛浓硫酸显色,可见4个紫黑色斑点;以浓硝酸及茚三酮显色未见明显色斑。亳芍总生物碱含量约为0.079%。结论亳芍中含有生物碱,其中可能包含乌头碱类生物碱。
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一种蒽醌类色素的提取分离和结构分析
竹黄菌Shiraia bambusicola P.Hennigs是一种药用真菌[1],主要寄生在箭竹属Fargesia Franch和短穗竹属Brachystachyum[2].野生竹黄的提取物中具有许多活性成分,具有很大的药用价值.文献已报道的活性成分有:竹红菌素甲、乙,脂肪酸及其酯,甘露醇[3],六孢素[4]和羟基蒽醌[5]等化合物.笔者通过竹黄菌的深层培养后得到发酵液[6],利用有机溶剂萃取、硅胶和反相C18柱色谱等方法进行分离纯化,得到1个色素组分,利用化学试剂显色反应以及波谱学方法对分离得到的色素进行结构鉴定.
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标记免疫分析的质量控制和标准化(二)
二 标记免疫分析的标准化问题几十年来,免疫学从多克隆抗体发展到单克隆抗体的应用,标记方法从放射性核素、酶、胶体金标记的显色反应到荧光、化学发光标记测量荧光或化学发光等,形成了"标记免疫分析"这一独立学科.在应用方面,不断更新的商业化试剂盒,同时由于标记免疫分析的局限性所在,给标记免疫分析质量控制和标准化工作带来了一定困难.
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磁酶免方法检测甲状腺激素及临床应用
1磁酶免方法简介该方法是磁性微珠(红细胞直径大小)分离技术和酶联免疫技术综合而成的定量测定系统.磁性微珠连接的单克隆抗体(免疫磁珠)与相应的标本抗原结合后,在磁铁磁力的作用下,特异性结合的抗原与其它物质分离,再通过酶联免疫显色反应测定抗原含量,从而克服了放免和普通96孔酶联免疫测定方法的缺点,该方法具有以下优点:
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21三体综合征的快速基因诊断及产前基因诊断
在以智力低下为主要临床表现的常染色体疾病中,21三体综合征是常见的一种。我们将细胞遗传学与基因探针技术结合起来,利用21号染色体特异性探针采用细胞原位杂交的方法对21三体综合征进行基因诊断及产前基因诊断,具有敏感性高、快速准确等优点。 对象 经本室细胞遗传学检定核型诊断的21三体综合征患儿10例;自愿人工流产者10例及产前诊断者1例(其第1胎子代为标准型 21三体综合征)。人工流产者收集妊娠6~10周绒毛进行染色体检查核型均为正常;取1例产前诊断者第2胎子代妊娠11周的绒毛、妊娠22周的羊水及生后外周血,跟踪检测染色体核型。 方法 1.探针及标记:人 21号染色体特异性探针118D12(德国Adinolfi博士惠赠)定位于21号染色体末端(21q22.3),克隆至Cosmid 中。采用整个Cosmid以随机引物法标记地高辛(Dig-11-dUTP)[1]。 2. 所有检测对象取外周血、绒毛或羊水按本室常规方法分离及制备单个核细胞[1]。 3.细胞原位杂交及显色:标本经蛋白酶 K和RNase处理(其中每例标本取1片以DNaseI消化作为阴性对照)及变性后,滴加变性杂交液 60 μl,其中含Dig-DNA探针1~2 μg/ml。50℃杂交过夜。抗原抗体复合物显色反应及镜检均按已报道的方法进行[1]。
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第38届国际药品信息年会情况介绍
应国际药品信息协会(DLA)的邀请,我于2002年6月参加了在美国芝加哥举行的第38届年会,作为国际药品质量和GMP监督检查专题分会场的报告者,作了"快速检验在中国农村药品质量监督中的作用"的专题报告,讲述了我国药品监督管理部门在WHO的支持和帮助下长期坚持开展快速检验的普及和培训工作,并根据中国农村常用药品的实际情况,由中检所组织建立了红霉素、诺氟沙星等9种药品23种制剂的快速检验方法;研制了便携式快速检验箱;十几年来举办了50多期培训班,为全国培养了1000多名基层药品监督人员;同时还介绍了这些学员在农村第一线应用内外包装材料的外观检查、简单的化学显色反应及简易的薄层色谱法(TLC),监测到了不少可疑的假劣药品的典型实例,为打击伪劣药品在农村的流通,保护广大农民用药安全有效做出了重要的贡献.
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新显色剂2-羟基-3-甲氧基-5-硝基苯基重氮氨基偶氮苯与汞显色反应研究
本文探讨了2-羟基-3-甲氧基-5-硝基苯基重氮氨基偶氮苯(HMeONDAA)与汞的显色反应.在Triton X-100存在下,于pH 9.0的NH4Cl-NH3·H2O缓冲介质中,汞(Ⅱ)与试剂形成1:2的稳定红色络合物,其大吸收波长位于525nm处,表观摩尔吸光系数为1.06×105L·mol-1·cm-1,汞质量浓度在0~30 ug/25ml范围内符合比耳定律.重金属离子中仅镉有干扰,可用氨三乙酸掩蔽.本法用于废水中汞的测定,结果满意.
关键词: 分光光度法 2-羟基-3-甲氧基-5-硝基苯基重氮氨基偶氮苯 显色反应 汞 废水 -
高胆红素对临床检测结果的影响及消除方法
高胆红素血影响许多临床检测结果的准确性,在生化检测中使Trinder显色反应的检测项目结果偏低,呈负干扰.因此在检测中应尽可能消除胆红素的干扰作用,目前可用化学方法氧化分解胆红素后再进行测定,另外还可以特异性胆红素吸附剂吸附胆红素来减少对测定结果的影响,但尚未用于检验界.胆红素的特异性吸附现已广泛被临床应用于高胆红素血症的治疗.本文就高胆红素对生化检测结果的影响及消除方法做一简单概述.
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评估中药煎液络合铁离子能力的分析方法研究
目的 建立体外筛选分析的方法来确定临床所用治疗阿尔茨海默病、帕金森综合症以及骨质疏松症的中药中哪种中药以及哪些成分是与铁离子(Fe3+)络合的主要成分,并评估其络合强度.方法 基于Fe3+对螺环罗丹明B酰肼衍生物开环显色反应的催化作用,建立了催化光度法测定中药煎液中游离态Fe3+的方法,进而通过加入一定量Fe3+测定被络合的程度来评估中药成分与铁络合的强度.结果 补肾中药对Fe3+的络合率较高;采用催化光度法测定中药煎液中游离Fe3+的量,线性范围1.68~22.4 mg/L,r=0.999 0;平均加标回收率在90.45%~104.11%,RSD< 5%.结论 该方法可应用于评估中药络合游离Fe3+强度.
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离子对RP-HPLC法测定不同产地莲子心中甲基莲心碱的含量
莲子心为睡莲科植物睡莲Nelumbo nuciferaGaertn的成熟种子中的干燥幼叶及胚根,具有清心安神、交通心肾、涩精止血之功效[1].<中华人民共和国药典>2000年版,莲子心项下只有显微鉴别和一个生物碱的显色反应.莲子心中主要成分为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱.
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ELISA检测HBsAg"后带现象"的探讨
近年来,免疫方法的不断更新,检测HBsAg已普遍采用ELISA法替代反问间接血凝法(RPHA).随之又由一步法替代二步法.无疑给操作者带来省时、简捷、快速等方便.然而被检抗原过剩,导致显色反应过淡或不显色的假阴性结果不可避免.本文对HBsAg中出现的"后带现象"做一些探讨,仅供参考.
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固相萃取光度法测定环境样品中镉
镉是重要的环境元素,环境样品中镉含量的测定具有重要意义[1,2],目前用杂环偶氮类试剂光度法测定镉有很多报道[3~6],但杂环偶氮类试剂对镉选择性较差,且对于一些镉含量低的样品(如环境水样和生物样品)普通光度法灵敏度也不能满足测定的要求.我们研究了2-(2-喹啉偶氮)-1,3-二羟基苯(QADHB)与镉的显色反应及用强阴离子交换固相萃取柱预分离和富集样品中的镉,建立了一种测定水样和生物样品中镉含量的新方法.
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氟乙酰胺农药的快速检定方法
氟乙酰胺是一种具有内吸作用的高效有机氟杀虫剂,能防制多种农林害虫和鼠害,因其对人的毒性很大,现已被禁止使用.但仍有人将其加入某些杀鼠药中投入市场,致氟乙酰胺中毒的事件时有发生.在抢救中毒病人过程中,快速准确地检定出毒物成分对于临床用药和采取抢救措施至关重要.鉴别氟乙酰胺的方法有奈氏试剂显色反应、异羟肟酸铁显色反应、硫靛显色反应、薄层层析法、纸层析法等.其中,显色反应特异性稍差;常用的薄层层析法定性准确可靠,但由于在显色过程中残留的氯气不易除尽,常形成深色的背景而影响氟乙酰胺斑点的观察.我们在实验过程中,对传统的薄层色谱法进行了改进,使其形成了很易观察的氟乙酰胺斑点,减少了操作过程,节省了时间,并避免了背景干扰,使实验过程快速简便,检定方法灵敏,定性结果准确.现报道如下.
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地奥心血康胶囊鉴别方法改进及与伪品比较
地奥心血康胶囊,为常见有效的治疗心血管疾病的中成药.但近年来,假地奥心血康屡禁不止.为此,快速的定性鉴别显得尤为重要,但原标准的定性鉴别①为皂甙的泡沫反应,专属性差;鉴别②为取含量测定项下的溶液经显色反应定性,专属性不强,且因含量测定为重量法,故鉴别②需在含量测定繁琐操作基础上方可进行,为此,笔者对正品,伪品地奥心血康的乙醇提取物进行上图谱扫描并进行比较,通过大吸收波长的确定以达到快速定性的目的;并将含量测定②改为直接取样显色测定,方便快速,效果满意.
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氧氟沙星与茜素红的显色反应及应用
氧氟沙星属喹诺酮类药物,为DNA螺旋酶抑制剂,对革兰氏阴性菌、阳性菌和部分厌氧菌均有较强的抗菌作用.已报道的分析方法有HPLC法[1]、电分析法[2]、荧光分光光度法[3]及非水滴定法[4]等.利用氧氟沙星与茜素红的显色反应测定其含量的方法尚未见报道.
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公共场所空气甲醛检测方法影响因素分析
目的 通过分析检测方法的影响因素,建立快速稳定测定公共场所空气中甲醛的方法.方法 酚试剂分光光度法测定公共场所空气中的甲醛含量.结果 采样环境温度对酚试剂稳定性有较大影响,改进吸收液后试剂空白干扰明显降低,且平行样品稳定性和精密度较好;显色环境温度直接影响显色反应程度,用40℃恒温水浴加热可缩短显色反应时间.结论 改进后的方法有效的解决了温度对吸收液稳定性和显色反应的影响,大大提高了检测方法的精密度和准确度.
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水砷浓度快速检测法的研究
目的研究分析水砷浓度快速检测法中各反应物的反应剂量比.方法将待测水样中的元素砷通过H+作用全部转化为砷化氢(AsH3)气体,以氢气为载体载出后与显色试剂条上的显色物质溴化汞(HgBr2)发生显色反应,生成黄色络合物H(HgBr)2As及棕色络合物(HgBr)3As.结果由生成络合物颜色的深浅,即可对水样中的砷含量进行半定量测定.络合物的颜色越深,其水砷浓度越大,二者成正相关.结论方法可对水样中的总砷(正3价及正5价)的含量进行半定量测定,具有简便易携、经济实用、快速可靠的特点,适用于病区的水井普查工作.