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21三体综合征的快速基因诊断及产前基因诊断
在以智力低下为主要临床表现的常染色体疾病中，21三体综合征是常见的一种。我们将细胞遗传学与基因探针技术结合起来，利用21号染色体特异性探针采用细胞原位杂交的方法对21三体综合征进行基因诊断及产前基因诊断，具有敏感性高、快速准确等优点。 对象 经本室细胞遗传学检定核型诊断的21三体综合征患儿10例；自愿人工流产者10例及产前诊断者1例（其第1胎子代为标准型 21三体综合征）。人工流产者收集妊娠6～10周绒毛进行染色体检查核型均为正常；取1例产前诊断者第2胎子代妊娠11周的绒毛、妊娠22周的羊水及生后外周血，跟踪检测染色体核型。 方法 1．探针及标记：人 21号染色体特异性探针118D12（德国Adinolfi博士惠赠）定位于21号染色体末端（21q22.3），克隆至Cosmid 中。采用整个Cosmid以随机引物法标记地高辛（Dig-11-dUTP）［1］。 2. 所有检测对象取外周血、绒毛或羊水按本室常规方法分离及制备单个核细胞［1］。 3.细胞原位杂交及显色：标本经蛋白酶 K和RNase处理（其中每例标本取1片以DNaseI消化作为阴性对照）及变性后，滴加变性杂交液 60 μl，其中含Dig-DNA探针1～2 μg/ml。50℃杂交过夜。抗原抗体复合物显色反应及镜检均按已报道的方法进行［1］。
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FISH产前诊断一例特殊易位型先天愚型儿
患者女，36岁，结婚10年。第1胎生一先天愚型儿，核型为46，XY，-13,t(21;13)(21pter→21cen→21q22∷13q11→13qter)。因第2次怀孕，妊娠19+1周，要求产前检查就诊。在B超定位下，常规消毒，抽取羊水15 ml，12 ml羊水培养，3 ml做FISH。FISH采用不培养的羊水细胞。探针选用美国VYSIS公司提供的21号染色体特异性探针，荧光染色为桔红色(LSI21 Spectrum orange)。羊水细胞制片及杂交方法按VYSIS提供。杂交结果于24～48 h后用NIKONE-1000型荧光显微镜观察，AI图像分析仪分析结果，激发光滤片使用E×450-490。共统计200个羊水细胞，杂交率为85%，在杂交的羊水细胞中，有3个桔红色杂交信号者占88%，两个杂交信号者占12%，且多数为其中一个杂交信号较大，可能是两个信号重叠在一起。诊断为先天愚型。在FISH检查出结果后15天，羊水培养结果显示胎儿核型为46，XY，-13,t(21;13)(21pter→21cen→21q22∷13q11→13qter)。孕妇即在当地引产，胎儿呈典型先天愚型儿貌。
