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内参照基因表达检测在宫颈石蜡组织原位杂交中的运用及意义
原位核酸杂交目前已广泛运用于组织和细胞基因表达定位和水平测定.但在实际运用中存在两个主要问题:(1)标本间的定量比较,缺乏比较的基准;(2)对于阴性结果,如何区别杂交失败的阴性结果和由于RNA的降解而出现的阴性结果.3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β-肌动蛋白为细胞的看家基因,其表达水平在不同活动中相对稳定,被广泛运用于基因表达水平检测的内参照基因[1-3],但尚未在原位杂交中作为内参照基因运用.我们通过制备GAPDH和β-肌动蛋白探针,对存档的正常和病理宫颈石蜡组织做了原位杂交检测,并与抑癌基因p53、癌基因c-myc的表达改变相比较,探讨其表达检测是否可作为组织和细胞原位杂交的阳性对照或基准.
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哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞IL-5和GM-CSF mRNA的表达及药物治疗的影响
哮喘肺组织嗜酸粒细胞(Eos)存活依赖于细胞因子IL-3、IL-5、GM-CSF的刺激.通常认为,Eos的存活因子主要来源于激活的T淋巴细胞.近年来研究表明,一些过敏性疾病和变态反应性疾病Eos亦能表达IL-3、IL-5、GM-CSF等多种细胞因子[1].本研究采用过敏性哮喘豚鼠模型和组织细胞原位杂交(ISSH)方法,对哮喘肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)Eos IL-5、GM-CSF mRNA的表达及其与凋亡的关系进行了研究.
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21三体综合征的快速基因诊断及产前基因诊断
在以智力低下为主要临床表现的常染色体疾病中,21三体综合征是常见的一种。我们将细胞遗传学与基因探针技术结合起来,利用21号染色体特异性探针采用细胞原位杂交的方法对21三体综合征进行基因诊断及产前基因诊断,具有敏感性高、快速准确等优点。 对象 经本室细胞遗传学检定核型诊断的21三体综合征患儿10例;自愿人工流产者10例及产前诊断者1例(其第1胎子代为标准型 21三体综合征)。人工流产者收集妊娠6~10周绒毛进行染色体检查核型均为正常;取1例产前诊断者第2胎子代妊娠11周的绒毛、妊娠22周的羊水及生后外周血,跟踪检测染色体核型。 方法 1.探针及标记:人 21号染色体特异性探针118D12(德国Adinolfi博士惠赠)定位于21号染色体末端(21q22.3),克隆至Cosmid 中。采用整个Cosmid以随机引物法标记地高辛(Dig-11-dUTP)[1]。 2. 所有检测对象取外周血、绒毛或羊水按本室常规方法分离及制备单个核细胞[1]。 3.细胞原位杂交及显色:标本经蛋白酶 K和RNase处理(其中每例标本取1片以DNaseI消化作为阴性对照)及变性后,滴加变性杂交液 60 μl,其中含Dig-DNA探针1~2 μg/ml。50℃杂交过夜。抗原抗体复合物显色反应及镜检均按已报道的方法进行[1]。
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低剂量辐射对大鼠血管平滑肌细胞RAD6基因的表达及细胞周期的影响
自80年代初,Luckey提出低剂量辐射兴奋效应概念后,人们对这方面的研究日益深入,已进入分子水平,对其机制和调控的研究已成为放射生物学研究的热点之一.我们以大鼠血管平滑肌细胞(WKY-1)为实验对象,用细胞原位杂交和流式细胞术研究了低剂量辐射时DNA 修复基因RAD6的表达和细胞周期的变化.