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原位杂交检测腋淋巴结阴性的乳腺癌组织nm23 mRNA表达及其意义
我们应用Digoxigenin(DIG)标记非放射性原位杂交技术检测nm23 在96例腋淋巴结阴性(ANN)及48例腋淋巴结阳性(ANP)乳腺癌中的表达并分析其意义.
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内参照基因表达检测在宫颈石蜡组织原位杂交中的运用及意义
原位核酸杂交目前已广泛运用于组织和细胞基因表达定位和水平测定.但在实际运用中存在两个主要问题:(1)标本间的定量比较,缺乏比较的基准;(2)对于阴性结果,如何区别杂交失败的阴性结果和由于RNA的降解而出现的阴性结果.3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β-肌动蛋白为细胞的看家基因,其表达水平在不同活动中相对稳定,被广泛运用于基因表达水平检测的内参照基因[1-3],但尚未在原位杂交中作为内参照基因运用.我们通过制备GAPDH和β-肌动蛋白探针,对存档的正常和病理宫颈石蜡组织做了原位杂交检测,并与抑癌基因p53、癌基因c-myc的表达改变相比较,探讨其表达检测是否可作为组织和细胞原位杂交的阳性对照或基准.
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微滴式数字PCR技术与免疫组织化学联合荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因扩增的比较
人类表皮生长因子受体2( HER2)基因扩增使肿瘤细胞表面HER2蛋白表达增加,导致HER2主导的生长信号通路过度活跃,引起肿瘤细胞恶性分化。 Moelans等[1]研究结果表明,15%~25%的乳腺癌患者存在HER2基因扩增,相比无HER2基因扩增的乳腺癌患者,肿瘤的恶性程度更高、进展迅速、易复发转移、生存期缩短。
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荧光原位杂交检测精子细胞膨胀成功的改良方法
近些年,在研究精子非整倍体与流产、畸形、不育及环境化学物质对人类生殖功能等影响时,荧光原位杂交(FISH)方法因适合大量间期核精子的检测得到广泛应用.因为精细胞变形成蝌蚪状时,核组蛋白被精蛋白替代,DNA以一种特殊方式被压缩、凝聚,正常情况下很难实现杂交,因此DNA去凝聚是精子杂交前期处理的关键步骤.
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荧光原位杂交检测HER2的一些优点
2006年,美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理学医师学院(CAP)联合发布了乳腺痛HEB2临床榆测指南(以下简称ASCO/CAP指南)[1],对HER2检测所涉及的相关问题进行了定义和规范.该指南中指出目前没有评价HER2水平的金标准,对免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)两种检测方法尤意推荐哪一种更好.
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细胞周期蛋白D1表达、聚合酶链反应及荧光原位杂交检测t(11;14)(q13;q32)易位在套细胞淋巴瘤诊断中的应用
细胞遗传学和分子遗传学的研究证实,70%~80% 套细胞淋巴瘤(MCL)中可以检测到t(11;14)(q13;q32) [1-3],易位使位于11q13上的bcl-1癌基因(也称为PRAD1,parathyroid adenomatosis,甲状旁腺腺瘤病或CCND1)处于14q32上IgH基因增强子的调控下,从而被激活,使其编码的细胞周期蛋白(cyclin) D1过度表达.这种易位在其他小B细胞淋巴瘤中极其罕见,所以通过免疫学和分子遗传学方法检测cyclin D1表达和t(11;14)(q13;q32)可作为区别MCL和其他小B细胞性淋巴瘤的重要手段.我们采用免疫组织化学检测cyclin D1蛋白表达,用聚合酶链反应(PCR)和荧光原位杂交(FISH)分别检测t(11;14)(q13;q32),以比较三种方法的敏感性和优劣点,探讨如何合理应用组织学、免疫组织化学和分子遗传学方法为日常病理诊断MCL提供帮助.
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原位杂交检测豚鼠巨细胞病毒mRNA方法的建立
人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染对子代的影响越来越引起人们的重视[1],但是,HCMV宫内感染机制尚不明确.由于CMV具有严格的种属特异性,其动物模型中,豚鼠巨细胞病毒(guinea pig cytomegalovirus,GPCMV)感染的表现与HCMV感染极为接近,且可经胎盘垂直传播导致宫内感染,有研究者已经建立GPCMV宫内感染动物模型探讨HCMV的宫内感染机制[2,3].本研究采用地高辛标记的三相寡核苷酸探针进行原位杂交,从病毒基因转录水平检测豚鼠亲代和子代标本中GPCMV晚期mRNA,在基因水平上建立一种稳定、快速、敏感、特异、安全且易于操作的分子杂交试验方法,为GPCMV宫内感染模型的全面、深入研究提供有价值的试验手段.
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苦参素对实验性大鼠肝纤维化防治作用的研究
目的:探讨苦参素对实验性大鼠肝纤维化的预防与治疗作用.方法:采用人血清白蛋白免疫损伤Wistar大鼠造成肝纤维化模型,60只Wister大鼠,分为5组:造模组、秋水仙碱治疗组、试验组Ⅰ(苦参素预防组)、试验组Ⅱ(苦参素治疗组),另设正常对照组.动态观察大鼠肝组织病例变化,采用HE染色观察肝组织改变及Von-Gieson胶原纤维特殊染色观察肝纤维化程度,并采用免疫组织化学染色及肝组织原位杂交检测Ⅰ型、Ⅲ胶原含量及Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果:试验组肝组织结构明显好转,纤维组织增生程度明显低于肝纤维化模型组;Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ型、Ⅲ型胶原的mRNA表达均低于模型组免疫诱导型肝纤维化大鼠,其效果为试验组Ⅰ(苦参素预防组)效果好,试验组Ⅱ(苦参素治疗组)次之,秋水仙碱治疗组再次之,三组均优于造模组.结论:苦参素可减轻肝脏炎症活动、抑制肝内胶原合成,对实验性大鼠肝纤维化具有防治作用.
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正常及实验性肝纤维化大鼠肝脏中的金属蛋白酶组织抑制因子-1
目的:了解金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在正常及实验性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态.方法:用人血白蛋白免疫攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型,以正常大鼠为对照.采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中TIMP-1 mRNA和相关抗原表达,同时用PCR技术检测肝脏中TIMP-1基因水平.结果:实验组肝脏中TIMP-1相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达.原位杂交检测结果也展示了上述相同的分布和定位.正常大鼠肝组织中可见TIMP-1基因表达,但表达水平极低.实验组肝组织中TIMP-1呈高水平表达.结论:在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP表达的主要细胞.随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重,TIMP-1基因表达水平随之增高.
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人乳头状瘤病毒感染与宫颈癌病变相关性研究
目的:探讨宫颈癌与人乳头状瘤病毒(HPV)16/18感染患者的相关性,为临床预防和治疗宫颈癌提供理论依据。方法选取2013年2月-2014年2月于医院就诊的35例宫颈细胞学检查异常患者为研究对象作为试验组,并纳入25名细胞学正常的志愿者为对照组,收集组织活检的石蜡切片进行原位杂交 HPV16/18检测,比较两组受试者 HPV16/18感染的阳性率。结果试验组患者 HPV16/18‐DNA 阳性率为31.4%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组中宫颈鳞癌患者的 HPV16/18‐DNA 阳性率高为54.5%,均高于 CINⅠ、Ⅱ及 CIN Ⅲ患者的18.2%及23.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌病变与 HPV16/18感染有显著性相关性,HPV16/18感染是宫颈癌发病的危险因素。
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多色探针荧光原位杂交检测未受精卵18、21、X、Y染色体非整倍体
多色探针荧光原位杂交技术已广泛应用于临床助孕.应用间期细胞行原位杂交是检测染色体异常的新技术.我们应用多色探针荧光原位杂交(fluorescence in situ hybrid- ization,FISH)检测未受精卵X/Y、18、21等染色体的非整倍体,以分析未受精卵与染色体非整倍体之间的关系.
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c-met原癌基因mRNA在睑板腺癌中的表达
c-met原癌基因是1984年Cooper等首先发现的基因,其编码生成的c-met蛋白为肝细胞生长因子和离散因子的受体,后者具有很强的有丝分裂原作用。c-met原癌基因的激活与多种人类肿瘤的形成有关,为探讨其与睑板腺癌的生物学行为关系,我们采用原位杂交技术,对c-met原癌基因在睑板腺癌中的表达进行研究,以期探讨其与睑板腺癌的关系。现将结果报告如下。 一、材料与方法 1.对象:收集本院1985年10月至1998年3月睑板腺癌石蜡包埋组织标本32例,男性12例,女性20例。年龄51~73岁,平均56.4岁。左侧15例,右侧17例。根据肿瘤的浸润程度进行临床分度[1]:Ⅰ度11例,Ⅱ度16例,Ⅲ度5例。根据肿瘤细胞分化程度进行分类:高分化10例,中分化15例,低分化7例。其中行肿瘤切除术27例,并眶内容物摘出术5例。癌旁正常睑板石蜡包埋组织标本16例。 2.试剂:地高辛标记的c-met基因寡核苷酸探针、原位杂交试剂盒(小鼠抗地高辛IgG,生物素化羊抗小鼠IgG,SABC-POD,蛋白酶K,封闭液)购于武汉博士德公司;DAB显色系统购于北京中山生物技术公司。 3.方法:c-met基因mRNA原位杂交检测严格按试剂说明书操作。用不加探针杂交液作为空白对照;已知c-met染色阳性输尿管癌标本作为阳性对照。 光镜观察:c-met基因表达阳性:肿瘤细胞的胞浆、胞膜染成棕黄色;大多为混杂着色,以中等着色所占比例分为-~+ + +。其中0为-,≤25%为+,26%~50%为+ +,>50%为+ + +。各组间比较采用χ2检验。 二、结果 32例睑板腺癌标本中,17例(53%)c-met基因mRNA表达阳性;16例癌旁正常睑板组织中3例(19%)表达阳性,两者比较差异有显著性(χ2=4.9,P<0.05)。c-met基因mRNA表达与睑板腺癌的临床分度及细胞分化程度间关系见表1。 c-met基因表达与肿瘤细胞的分化程度相关(r=0.269,χ2=7.52,P<0.01)。c-met基因表达与肿瘤临床分度相关(r=0.308,χ2=11.34,P<0.01)。 三、讨论 c-met基因定位于人染色体7q31,其相对分子质量为100 000,c-met基因编码生成的跨膜蛋白,由细胞外配体结合
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荧光原位杂交检测染色体易位畸变对人大肠癌细胞的放射敏感性
预测肿瘤组织的放射敏感性是提高肿瘤放疗疗效和减少放射损伤的关键.近年来,国内外研究多采用FISH技术对细胞内在放射敏感性预测进行了可行性探讨,但有关大肠癌方面的研究不多.笔者应用FISH技术检测两株大肠癌细胞照射后的染色体易位畸变,分析其与细胞存活率的相关性,探讨该技术预测人大肠癌细胞内在放射敏感性的可行性.
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肝细胞生长因子及葡萄糖对人胰腺干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响/妊娠合并慢性骨髓增殖性疾病11例例临床分析/人端粒酶RNA基因荧光原位杂交检测在宫颈细胞学检查中的应用
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免疫组化、原位杂交及PCR法检测霍奇金淋巴瘤石蜡组织中EB病毒
霍奇金淋巴瘤(HL)与EB病毒(EBV)密切相关[1,2].然而,不同作者所报道HL中EBV的检出率为20%~95%[1,2].为探讨造成差异的原因,我们选取广东地区39例HL蜡块组织,采用3种常用的EBV测定方法--PCR检测EBV的DNA、免疫组织化学检测EBV潜伏膜蛋白1(Latent membrane proteins,LMP1)、原位杂交检测EBV编码的mRNA(Epstein-stein-Barr Encoded RNAs1,EBER1),进行了比较研究.
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VEGF-D,VEGFR-3在乳腺癌中的表达及其意义
乳腺癌是严重危害妇女健康的常见肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势,乳腺癌易发生腋窝淋巴结转移,术后的转移复发术是其主要死亡原因,乳腺癌经过血道和淋巴道转移,但其分子机制尚未充分阐明.已有报道在结肠癌、黑色素瘤、肺癌中VEGF-D被确立为独立的预后因素[1~3],但VEGF-D在乳腺癌中的作用报道的很少.本研究通过免疫组化和原位杂交检测VEGF-D及VEGFR-3在乳腺癌中的表达,及VEGF-D与微血管密度、淋巴管密度、淋巴结转移以及同临床病理特征的关系.
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结膜尖锐湿疣
患者男性 45岁双眼角发现赘生物3个月.开始时双眼角有米粒大小肉质赘生物,逐渐增大为菜花状,闭眼时异物感明显,时有出血.双眼内眦角泪阜处可见多叶状乳头状瘤(约5×6mm大小),有蒂,活动度好,表面光滑,色淡红,质脆,触之易出血.裂隙灯下见分叶清晰,每一分叶都有一个中央血管.双跟球结膜不充血,角膜透明.1998年9月12日在局麻下行赘生物切除.病理报告为:鳞状上皮乳头瘤样增生.3个月后复诊,双眼内眦角赘生物又复发,左眼赘生物较第1次术前增大(约6×7mm),形态同前.眼睑闭合时,赘生物暴露于睑裂之外,出血增多.1998年12月23日再次行赘生物切除,行普通病理检查加原位杂交检测.病理检查:镜下见表皮呈乳头瘤样增生,表皮突增宽并向下延伸(加页图1),角质层轻度增厚,弥漫性角化不全.棘层明显增厚,粒层和棘层上部细胞有明显空泡形成,空泡化细胞比正常大1~2倍,胞核位于中央,核圆而深染,有异型,核周可见空晕(图2),真皮乳头及乳头下方内毛细血管扭曲、增生、扩张.病理报告:鳞状上皮乳头瘤样增生,原位杂交HPV6B/11(+)(图3).符合病毒感染所致疣(病理号98-5912).皮肤科会诊,检查生殖器部位未发现赘生物.
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荧光原位杂交检测乳腺癌中Her-2基因的可行性研究
目前,临床上常使用的检测乳腺癌中Her-2基因的方法是免疫组织化学染色(IHC),这种方法操作简单,费用低廉,适合初筛,但是影响其检测准确性的因素较多,且无法进行准确的定量.随着FISH技术越来越多地应用于各种癌基因的检测,在发达国家,它不仅成为检测Her-2的一线技术,更是作为金标准.本实验严格按照美国临床肿瘤协会(ASCO)及美国病理家协会(CAP)于2007年联合公布发行的乳腺癌HER-2临床检测指南进行实验设计和质量控制,应用IHC及FISH技术两种方法进行浸润性乳腺癌Her-2检测,比较两种方法的一致性,同时探索其与乳腺癌的临床病理联系,为我国将FISH技术推广应用于乳腺癌Her-2基因的检测提供更加科学的依据.
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原位杂交检测B细胞淋巴瘤免疫球蛋白轻链限制性
B细胞淋巴瘤在非何杰金氏淋巴瘤约占70%~80%,包括弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(TCL)、Burkitt's 淋巴瘤(BL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、其他类包括B-小淋巴细胞性淋巴瘤/慢性淋巴细胞性白血病(B-SLL/CLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)以及粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤(MALT)[1].诊断淋巴瘤除了常规组织形态学镜下诊断外还常常必须借助免疫组织化学技术(Immunohischemical,IHC)、原位杂交(in suit hybridization,ISH)、PCR等辅助方法.
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原位杂交检测子宫内膜癌中金黄色葡萄球菌L型DNA