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Fish检测舌鳞状细胞癌中EGFR基因扩增及临床应用价值初步研究
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)在舌鳞状细胞癌病变中基因扩增及临床意义.方法 选取齐齐哈尔市第一医院2005年1月~12月手术切除并经病理诊断的舌鳞状细胞癌患者156例为研究对象,用荧光原位杂交(FISH)技术检测EGFR基因的扩增情况,并进一步分析EGFR基因扩增与患者临床病理生理特征的关系.结果 FISH结果显示,46.2%(72/156)的舌鳞状细胞癌患者存在EGFR基因扩增,而EGFR基因的扩增与患者的性别、年龄、吸烟状态、饮酒状态及是否存在转移无关,差异无统计学意义(P>0.05).结论 EGFR基因扩增与患者性别、吸烟饮酒状态、等临床特征无明显关系,与患者预后的相关性及舌鳞状细胞癌的临床应用价值有待进一步研究.
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TMPRSS2-ERG及MMP-9基因对前列腺癌侵袭性的影响
目的 探讨TMPRSS2-ERG(T-E)及MMP-9基因在提高前列腺癌侵袭性方面的关联.方法 分别使用FISH和RT-PCR方法检测转移性前列腺癌、局限性前列腺癌及良性前列腺增生患者组织中T-E和MMP-9基因的表达,制备抗ERG及MMP-9的siRNA并转染两种前列腺癌细胞系,采用Transwell实验检测转染siRNA后前列腺癌细胞的侵袭能力.结果 T-E融合基因的阳性率及MMP-9基因的相对表达量在3组间逐渐下降(P＜0.01),转移性前列腺癌组中两基因分别与Gleason评分(P＜0.05)及血清PSA水平(P＜0.05)呈正相关.转移性前列腺癌组T-E基因融合阳性的患者MMP-9基因表达显著高于T-E基因融合阴性者(P＜0.05),且两基因间表达呈正相关(r=0.875,P＜0.05).下调ERG及MMP-9基因的表达分别能显著降低VCAP细胞(T-E融合基因阳性)和LNCaP细胞(T-E融合基因阴性)的侵袭性.结论 T-E融合基因和MMP-9基因在提高前列腺癌侵袭性方面有协同作用,但MMP-9可能不是T-E融合基因的关键靶基因.
关键词： 前列腺癌 侵袭性 TMPRSS2-ERG MMP-9 FISH -
t(6;11)(p21;q12)转录因子EB基因融合相关性肾细胞癌临床病理观察
目的 探讨t(6;11) (p21;q12)转录因子EB(TFEB)基因融合相关性肾细胞癌临床病理学特点、诊断与鉴别诊断.方法 应用组织学、免疫组化和分子遗传学对1例t(6;11) (p21;q12) TFEB基因融合相关性肾癌进行研究,并复习相关文献.结果 肿瘤边界清楚,切面灰黄、灰红色伴出血囊性变.镜下肿瘤由大、小两种细胞构成,大细胞呈巢状、腺泡样,乳头状排列;小细胞围绕透明基质呈特征的“玫瑰花环”样结构,瘤细胞胞质透明,部分嗜酸.免疫组化:TFEB、HMB45和melanA(+).鉴别诊断主要有TFE3基因融合相关性肾细胞癌及腺泡状软组织肉瘤等.结论 t(6;11) (p21;q12) TFEB基因融合相关性肾细胞癌是一种罕见肿瘤,明确诊断需结合组织学形态、免疫表型及分子生物学检测.
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ALK融合蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)中的ALK融合蛋白表达及其基因异常情况.方法 运用Ventana免疫组化方法对193例TNBC及20例非三阴性乳腺癌(NTNBC)进行染色,对蛋白阳性表达者再行FISH及RT-PCR检测.结果 TNBC中有1.04％ (2/193)ALK融合蛋白弥漫性颗粒样阳性,5.7％(11/193) ALK融合蛋白部分均质样着色,11.4％ (22/193) ALK融合蛋白部分胞核/胞质着色.ALK融合蛋白阳性的2例TNBC经RT-PCR和FISH法均未检测出ALK基因重排,而FISH显示ALK基因拷贝数获得(CNG).结论 TNBC中极少数病例有ALK融合蛋白表达和基因拷贝数获得,两者的相关性尚不清楚.
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用FISH法检测胃癌组织HER-2基因扩增的临床意义及其与预后的关系
目的 探讨胃癌组织中HER-2基因的扩增与胃癌患者临床病理特征及预后之间的关系.方法 采用荧光原位杂交技术(FISH)检测119例胃癌组织中的HER-2基因扩增状态,分析HER-2基因与胃癌临床病理参数及预后的相关性.结果 119例胃癌组织中,HER-2阳性19例(16％),阴性100例(84％).HER-2基因扩增与肿瘤部位、lauren分型、脉管浸润、淋巴结转移有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度无关(P＞0.05).HER-2阳性和阴性患者的总体生存率差异不显著(P＞0.05).结论 胃癌HER-2基因与患者的部分临床病理特征有关,可作为判断胃癌生物学行为的重要指标,但HER-2基因的扩增不能作为胃癌的独立预后指标,其与预后的关系还需进一步研究.
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骨外黏液性软骨肉瘤28例临床病理分析
分析骨外黏液性软骨肉瘤(EMC)的临床特征、病理学形态及免疫学表型,探讨其鉴别诊断.方法对28例骨外黏液性软骨肉瘤的临床病理学资料、免疫表型和基因测序进行回顾性复习.结果28例中男性16例,女性12例;年龄16 ～ 72岁.11例发生于大腿,4例发生在臀部,前臂、腹股沟区、肩部各2例,会阴部、小腿、骶尾部、胸部、背部、腹壁和腮腺部各1例.肿瘤大径1 ～ 19 cm,切面呈灰白色,黏冻样,境界不清.镜下肿瘤细胞由纤维组织分割排列成结节状,瘤细胞体积中等大小,胞质丰富,间质富含黏液,部分病例可见出血、坏死.免疫组化:瘤细胞vimentin(+),8例S-100、9例Syn、3例EMA和2例NSE(+).Ki-67阳性指数大部分＜10％,只有2例富细胞型为30％.结论骨外黏液性软骨肉瘤是一种低～中度恶性的软组织肿瘤,其分化来源未定,常好发于中老年人,以肢体近端为好发部位,特别是大腿和臀部.
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28例子宫内膜间质肉瘤免疫表型及分子遗传学特征研究
目的 总结子宫内膜间质肉瘤(ESS)的病理学特点及免疫表型,并探讨YWHAE-NUTM2A/B(YWHAE-FAM22 A/B)融合基因的表达对ESS病理诊断的意义.方法 收集病理的ESS病例28例,其中低级别ESS(LG-ESS)21例、高级别ESS (HG-ESS)7例.采用免疫组织化学法检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CD10、cyclin D1、desmin和caldesmon蛋白在28例ESS中的表达情况.用荧光原位杂交(FISH)方法分别检测7例HG-ESS YWHAE-NUTM2/B融合基因的表达.结果 21例LG-ESS的ER、PR、CD10、cyclin D1、desmin和caldesmon阳性表达比例分别为19/21、20/21、21/21、0/21、7/21和13/21.7例HG-ESS的ER、PR、CD10、cyclin D1、desmin和caldesmon阳性表达比例分别为2/7、2/7、5/7、7/7、0/7、1/7.FISH结果:HG-ESS基因融合率(3/7).结论 LG-ESS具有特殊的形态学特征,并与子宫内膜间质肉瘤的相关免疫标记均呈阳性表达,HG-ESS在组织形态及免疫组化表达上与LG-ESS具有差异,部分病例呈现特异的YWHAE-NUTM2A/B融合基因,对于诊断疑难病例具有帮助.
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心包滑膜肉瘤临床病理观察
目的 探讨心包滑膜肉瘤的临床病理学特征及其鉴别诊断,提高对该病的认识和诊治水平.方法 对1例心包滑膜肉瘤进行光镜观察、免疫组化染色和荧光原位杂交(FISH)检测,并结合文献分析讨论.结果 肿瘤由单一的梭形细胞组成,呈交织的束状,向上皮样细胞分化.免疫组化:calponin(+),p53和vimentin(+),bcl-2和EMA散在(+).FISH检测显示18号染色体基因位点断裂及易位.结论 心包单相纤维型滑膜肉瘤诊断较为困难,容易误诊,在掌握组织学特征和临床病史的同时,必须结合免疫组化及分子生物学检测综合分析,才能作出正确诊断.
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宫颈原发性腺泡状软组织肉瘤2例临床病理观察
目的 探讨宫颈腺泡状软组织肉瘤(ASPS)的临床病理学特点、免疫表型、分子遗传学特征和鉴别诊断.方法 对2例宫颈腺泡状软组织肉瘤进行常规HE染色和光镜观察,并用免疫组化MaxVision法对包括TFE3在内的10余个免疫标记物的表达进行研究,运用FISH方法检测肿瘤细胞TFE3-ASPL基因的融合,并对患者进行了随访.结果 ASPS多表现为局部缓慢生长的肿块.镜下具有纤维血管分隔的假腺泡结构特征,细胞较大,胞质丰富,内含嗜酸性细颗粒状物.免疫组化示肿瘤细胞TFE3均(+)；FISH检测证实肿瘤细胞有TFE3-ASPL基因融合.结论 发生在宫颈的腺泡状软组织肉瘤极少见,组织形态与其他部位的同类肿瘤相似,TFE3是该肿瘤较特异的免疫标记物,遗传学上表现为TFE3-ASPL基因融合.
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EGFR和Her-2蛋白表达及基因扩增的应用研究
目的 对比分析EGFR与Her-2蛋白的表达及基因扩增情况.方法 应用免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)技术对89例肺腺癌和335例乳腺癌分别进行EGFR和Her-2蛋白表达及基因扩增检测.结果 89例肺腺癌:原位腺癌EGFR的蛋白表达和基因扩增病例明显少于以贴壁生长方式为主和以非贴壁生长方式为主的浸润性腺癌(P＜0.05),EGFR蛋白表达与基因扩增之间呈显著的正相关(P＜0.05).335例乳腺癌:IHC法Her-2蛋白(卅)109例(32.54％),与FISH法一致率为90.83％(99/109);Her-2(++)96例(28.66％),与FISH法一致率为53.13％(51/96);Her-2(+)55例(16.42％),与FISH法一致率为10.91％ (6/55).Her-2蛋白表达与扩增之间呈显著正相关(P＜0.01),并且156例Her-2基因扩增病例中,全部为浸润性导管癌.结论 利用IHC方法对蛋白表达进行初步筛选,进而行FISH基因扩增检测,可为临床进一步筛选病例、选择治疗方案、评估预后提供可靠的依据.
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比较全自动与半自动免疫组化技术检测乳腺癌Her-2蛋白表达状态的可靠性
目前,Her-2的检测主要有两种方法:荧光原位杂交(FISH)和免疫组化(IHC).FISH被普遍作为检测HER-2状态的一个重要参考指标,但因其费用高、结果不易保存和需用荧光显微镜才能观察等,不利于广泛开展工作;免疫组化技术以简洁、快速、低费用、易保存,且同一切片保存了细胞形态等优点,已在大多数病理实验室得到广泛应用.本文应用全自动与半自动免疫组化技术检测Her-2蛋白的表达,并比较二者的检测结果,以及与FISH的一致性,从而评价其检测乳腺癌Her-2状态的可靠性.
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培训对乳腺癌HER-2基因免疫组化结果判读的影响
目前乳腺癌HER-2检测一般采用免疫组化(IHC)法,也可以应用荧光原位杂交法.不同的检测方法判读的准确性都会影响HER-2检测的结果.《乳腺癌HER-2检测指南》旨在使HER-2检测的操作程序和对结果判读的标准化,提高HER-2检测的准确性.本文对我科医师经《乳腺癌HER-2检测指南》培训前后免疫组化的判读水平进行评价,再与FISH结果进行对比研究,探讨免疫组化标准化培训的意义.1 材料与方法
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FISH检测尿路上皮癌漏诊分析
FISH检测是尿路上皮癌诊断的一种辅助手段,但尚需完善,还不能作为肿瘤确诊的依据,本文通过2例漏诊病例,探讨其诊断价值.1 材料与方法1.1 材料2013-01-2013-06期间经我院收治的尿路疾病患者中,有10例行FISH技术检测,但其中2例结果为阴性,与组织活检结果不符.患者以反复肉眼血尿并腰痛之主诉入院.逆行输尿管肾盂造影提示输尿管中段充盈缺损,考虑占位性病变.脱落细胞学检查提示见可疑肿瘤细胞,但尿FISH结果阴性.家属要求行手术探查,遂行输尿管探查术.术中冷冻病理提示泌尿上皮癌.遂行输尿管癌根治术.病理诊断:低级别乳头状尿路上皮癌.
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应用Photoshop软件合成FISH HER-2多色荧光图像
人类表皮生长因子受体-2(HER-2/neu,erbB-2)是一种相对分子质量185 kDa的跨膜受体,在25％～30％的原发性乳腺癌中HER-2/neu基因过表达.赫塞丁(Herceptin)是一种重组DNA衍生的人源化抗p185HER2嵌合抗体,可特异性结合p185HER2.由于赫塞丁治疗是以HER-2为靶点的靶向性治疗,因此只有HER-2过表达的患者应用该药才可能有效[1-3].目前,检测HER-2过表达的方法主要有检测HER-2基因扩增的荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)或检测HER-2蛋白表达的免疫组化法[4-7].采用FISH技术检测HER-2基因扩增时,往往要采用不同荧光标记物分别标记扩增的基因和染色质DNA.
关键词： photoshop软件 合成 FISH 多色荧光图像 -
MALT淋巴瘤的分子遗传学进展及其在诊断中的价值
黏膜相关淋巴组织结外边缘带B细胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)具有独特的病因学机制和分子遗传学改变,是继弥漫性大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤,发病率排在第3位的非霍奇金B细胞性淋巴瘤.日常临床病理工作中,根治性标本结合形态学和免疫组化染色,诊断并不困难；但是,小活检标本却易造成漏诊和误诊.深入了解MALT淋巴瘤发生、发展过程中的病因学基础和特征性的分子遗传学异常,将分子病理学诊断技术应用到临床病理实践中,对于疾病的诊断和鉴别诊断,以及后续治疗具有重要意义.
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探讨不同预处理方法对HER2基因荧光原位杂交效果的影响
人类表皮生长因子受体2基因(HER2)定位于17号染色体,编码一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜生长因子受体.研究表明,乳腺癌HER2基因扩增或蛋白过表达与疾病进展和不良预后相关,且是靶向治疗的靶点[1].目前指南推荐通过免疫组化技术(IHC)检测HER2蛋白的表达,或通过原位杂交技术(ISH)检测HER2基因[2,3].原位杂交技术分为显色原位杂交(CISH)和荧光原位杂交(FISH)[4].文献对FISH检测技术中蛋白酶消化时间和消化程度方面的讨论比较多[5],但关于预处理方法对杂交效果影响的研究比较少.笔者结合文献和实际工作,对比分析了高温高压水煮法[6]、柠檬酸微波炉法[7]和商品化的预处理试剂盒3种方法,对FISH检测浸润性乳腺癌石蜡包埋组织切片的细胞形态、红绿信号强弱和背景及HER2信号数和红绿比值的影响.
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Ventana免疫组化与FISH两种方法检测肺癌ALK的对比
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)术后往往采取放、化疗,但其疗效达到平台期,获益似乎已经大化.“个体化治疗”的观念逐渐被人们认可,靶向治疗成为个体化治疗的重要组成部分.间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)阳性的NSCLC,尤其是肺腺癌,若能及时检测出,并接受ALK抑制剂治疗后往往能够生存获益[1].目前肺癌ALK的检测方法主要有罗氏公司开发的免疫组化法(Ventana IHC)和美国雅培公司的荧光原位杂交法(FISH).本文旨在探讨这两种检测方法的一致性以及存在的差异.
关键词： 肺癌 ALK Ventana免疫组化 FISH -
FISH技术检测乳腺癌HER-2基因的探讨
FISH技术采用荧光标记的DNA探针,根据探针与被测样本中的DNA序列的互补性,在探针与样本DNA杂交后,在荧光显微镜下检测荧光信号而得出结果,该技术操作简单,有较高的稳定性和灵敏性,重复性好[1].1 材料与方法1.1 材料 2009-10-2011-10间的外科手术标本70例,HE染色证实为乳腺癌,IHC检测cerBb-2(++)以上的病例做FISH基因检测.患者年龄26 ～ 72岁,平均年龄49岁.所用HER-2 DNA探针试剂盒为ZytoVision公司产品.
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30例慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常的FISH检测的意义
为探讨间期荧光原位杂交(FISH)在检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)+12、del(13q14)、p53基因缺失、arm基因缺失情况中的意叉,采用组合探针(CEP 12、LSl D13S319、LSI p53、LSI atm)对30例CLL患者进行FISH检测,分析分子遗传学异常与患者外周血淋巴细胞绝对计数、Binet分期、血清乳酸脱氢酶(LDH)和13:微球蛋白(β2-MG)水平、ZAP-70和CD38表达之间的相关性.结果发现,30例CLL患者中,19例(63.3%)存在1种及1种以上细胞遗传学异常,7例(23.3%)同时检测出2种及2种以上的异常,其中常见为del(13q14)(43.3%),其他依次为+12(23.3%),atm基因缺失(13.3%),p53基因缺失(10.0%).各分子遗传学异常与性别、年龄、Binet分期、外周血淋巴细胞绝对计数、血清LDH和β2-MG水平、ZAP-70表达水平无明显相关性(p＞0.05),在CD38高表达组中,atm基因缺失的发生率均明显高于CD38低表达组,且差异有统计学意义(p=0.035).结论:FISH是一种检测CLL患者分子遗传异常快速、准确及敏感的方法,其在CLL患者中的预后预测价值有待进一步的深入研究.
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慢性粒细胞白血病患者Ph染色体变异易位的细胞遗传学特征与荧光原位杂交研究
本研究探讨慢性粒细胞白血病(CML)中变异Ph染色体易位的细胞遗传学特征并比较双色单融合(DC-SF)与双色双融合(DC-DF)bcr/abl探针荧光原位杂交技术(FISH)在变异易位CML中的应用价值.应用常规细胞遗传学方法分析我院42例CML变异Ph易位患者,其中9例进行DC-SF-FISH和11例进行DC-DF-FISH研究.结果表明:在642例Ph阳性CML中变异易位42例(6.5%),简单变异易位42.9%(18/42),复杂变异易位54.8%(23/42),遮蔽的或隐匿的Ph易位1例.除4,6号染色体外,其余染色体均被累及.4种类型变异易位分别出现于至少2个病例中.变异易住伴附加异常15例(35.7%).FISH检测bcr/abl阳性19例(95%),阴性1例.DC-DF-FISH显示除1例患者部分细胞(8.8%)能检测到abl/bcr融合信号外,其他患者皆缺乏该融合信号.但在易位后的9号和参与变异易位的另外染色体上分别可以见到abl和bcr基因信号.DC-SF-FISH不能观察到信号的变异特征.结论:CML变异Ph易住广泛累及除9,22外其他染色体,部分类型属重现性异常;FISH检测能给予精确的分子诊断,而DC-DF-FISH可提供直观的、准确的分子变异特征分析.
关键词： 慢性粒细胞白血病 Ph染色体 变异易位 FISH Bcr/abl融合基因
