首页 > 文献资料
-
荧光原位杂交技术在临床实验室应用的现存问题和对策
FISH的技术在临床的应用日渐广泛,成为快速诊断和确诊官颈癌、乳腺癌、白血病等疾病的一项分子诊断技术.但是,到目前为止国家相关部门尚未出台相应的实验室条件要求、人员培训以及标准的操作流程,同时该技术实验操作和结果判断等环节较多,对临床结果影响较大,鉴于此,我们就目前临床实验中尚未解决和需要关注的地方进行阐述,以便更好地改进和规范实验技术步骤,有效减少临床检验的误诊.
-
荧光原位杂交技术及其临床应用
荧光原位杂交技术是一种非常有用的分子细胞遗传学工具,特别是对一些染色体数目异常和复杂染色体异常的诊断,架起了染色体显带技术和分子遗传学之间的桥梁.本文主要就荧光原位杂交技术的发展历程、探针制备和临床应用做一简单的综述.
-
乳腺癌中HER-2基因的扩增及意义
目的 研究乳腺浸润性导管癌HER-2基因的扩增情况及其与乳腺癌临床病理因素的关系。方法 采用荧光原位杂交法(FISH)检测254例乳腺浸润性导管癌组织中HER-2基因的扩增情况，分析其与乳腺癌的肿瘤大小、组织学分级、腋淋巴结转移情况、病理分期、雌、孕激素受体表达以及该基因蛋白表达等的关系。结果 FISH检测到254例乳腺癌中有175例发生HER-2基因高扩增，该基因高扩增与乳腺癌的肿瘤大小、组织学分级、病理分期、腋淋巴结转移数、雌孕激素受体表达、HER-2蛋白表达均有关(P均＜0.05)，与患者的年龄无关(P＞0.05)。结论 乳腺癌中HER-2基因的高扩增导致其蛋白过度表达，HER-2基因高扩增与乳腺癌的生长、恶性程度有关，是判断乳腺癌生物学行为的重要指标。联合检测HER-2基因扩增情况及其他指标有助于指导临床判断乳腺癌预后并制定治疗方案。
-
肾损伤分子1在鱼胆中毒大鼠尿和肾脏的表达
鱼胆中毒是一种严重的临床急症,可致多器官衰竭,其中急性肾衰竭(ARF)发生率高,也是其主要死因.肾脏病理突出表现为近曲小管损害.肾损伤分子1(KIM-1)是新近发现的一种黏附分子,在近曲小管上皮细胞损伤后的肾组织中高表达并且从尿中排出,而在正常肾组织中几乎不表达[1].本研究通过动物实验观察鱼胆中毒大鼠急性肾损伤(AKI)后尿和肾组织中KIM-1的表达变化特点,旨在为临床应用提供依据.
-
FISH与RQ-PCR监测慢性髓系白血病患者造血干细胞移植后微小残留病
背景与目的:监测慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的微小残留病(minimal residual disease,MRD)的常用方法有间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,FISH)和实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,RQ-PCR).本研究分析用FISH和RO-PCR两种方法在CML造血干细胞移植后不同时间点监测MRD的意义.方法:采用间期FISH和RQ-PCR技术,对31例异基因造血干细胞移植前后的CML患者骨髓细胞进行BCR-ABL融合基因定期监测,随访时间3～48个月.结果:31例患者移植后,前30个月各时间点FISH检测的阳性细胞数及RQ-PCR检测的BCR-ABL/ABL比值均较移植前明显下降,下降>2个对数值(P<0.05);移植30个月后FISH检测结果为0时,RQ-PCR仍然能检测出BCR-ABL/ABL的表达水平,与移植前相比,30个月后各时间点BCR-ABL/ABL比值下降>3个对数值(P<0.05).结论:FISH和RO-PCR方法检测BCR-ABL融合基因有较好的一致性.RQ-PCR连续监测MRD的敏感性更高,MDR的定量分析有利于评估疗效和指导个体化治疗.
-
hTERC基因检测在宫颈上皮内瘤变差异化治疗的应用
目的:探讨hTERC基因检测在宫颈上皮内瘤变差异化治疗的应用.方法:利用荧光原位杂交技术(FISH)观察人类染色体端粒酶基因(hTERC)扩增程度与宫颈上皮内瘤变(CIN)程度关系.检测63例宫颈液基薄层细胞涂片(TCT)和50例宫颈活检石蜡切片hTERC基因的扩增程度.结果:两组结果均显示,随着TBS分级或病理分级的升高,hTERC基因阳性率增加.hTERC基因异常细胞比例与TBS分级或病理分级呈正相关,等级相关系数为0.403/0.612.结论:hTERC基因扩增程度可能为宫颈疾病发展的重要风险预测因子,反映宫颈上皮内瘤变的病变程度,可辅助病理分级的准确判断.
-
乳腺癌17号染色体多体与HER2基因扩增及预后因素的相关性
目的 分析乳腺癌17号染色体多体与HER2基因扩增及预后因素的相关性,探讨其临床意义.方法 采用免疫组化(IHC)技术检测120例浸润性乳腺癌患者HER2蛋白表达情况,选择IHC结果为( + + )及( + + + )的患者92例行荧光原位杂交(FISH)检测其HER2基因扩增及17号染色体多体.结果 58.7%(54/92)的患者出现HER2基因的扩增,免疫组化( + + )、( + + + )的病例所占比例分别为72.8%(67/92)、27.2%(25/92);FISH与免疫组化检测在HER2蛋白( + + )、( + + + )的符合率分别为47.8%(32/67)、88%(22/25);20.7%的患者存在17号染色体多体,HER2基因扩增组出现17号染色体多体的概率比HER2基因无扩增组更高(P<0.01);存在17号染色体多体的患者其淋巴结转移率更高;17号染色体多体与肿瘤大直径及组织学分级无相关性.结论 HER2免疫组化( + + )的患者建议行FISH检测.17号染色体多体与HER2基因扩增相关,且可能是导致HER2基因扩增的原因之一.17号染色体多体可能提示乳腺癌的预后.
-
FISH检测石蜡包埋组织切片的理想消化时间
目的 探讨石蜡包埋组织切片进行荧光原位杂交(FISH)检测前合适的酶消化时间.方法 62例乳腺癌石蜡包埋组织切片,将其中的21张石蜡包埋的组织切片进行间隔5 min的梯度时间酶消化,然后光镜下及加入DAPI后荧光显微镜观察.随后对剩余的41张切片继续杂交过程,对杂交信号进行观察.结果 15～20 min是一个比较理想的消化时间,背景干净,杂交信号理想,能够很好地进行判读.对剩余的41张石蜡包埋切片进行15～20 min的消化后均获得了满意的杂交信号.结论 15～20 min是石蜡包埋切片理想的消化时间.不同组织标本及实验室间略有差异.故建议不同实验室甚至不同批次的标本在进行FISH技术杂交检测之前,应首先对酶消化时间进行调整.
-
ZNF217肿瘤基因在卵巢癌细胞株的表达及临床意义
目的 探讨ZNF217肿瘤基因在卵巢癌细胞株的20号染色体的表达情况及临床意义.方法 应用荧光原位杂交技术(FISH)及LSI ZNF217探针(锌指蛋白217)对卵巢癌细胞株SKOV3,OVCa-R3,HO-8910和正常人外周血细胞进行检测.结果 3种卵巢癌细胞株均出现ZNF217基因扩增,正常外周血细胞未出现基因扩增,卵巢癌细胞株与正常细胞比较,差异有显著性.结论 ZNF217基因可能与卵巢癌发生机制有关,很可能是卵巢癌发生的促进因子之一.
-
贲门胃底癌中CIP2A mRNA表达与HER-2基因的扩增及其意义
目的 检测贲门胃底癌中CIP2A mRNA表达与HER-2基因的扩增并探讨其相关性和临床意义.方法 采用半定量RT-PCR法检测47例贲门胃底癌石蜡包埋组织中CIP2A mRNA的转录水平,荧光原位杂交方法(FISH)检测HER-2基因的扩增情况,统计分析CIP2A mRNA与HER-2扩增情况的相关性,同时了解二者与贲门胃底癌患者临床病理参数的关系.另选取47例对应的癌旁组织纳入半定量RT-PCR方法检测,并统计分析CIP2A mRNA在癌和癌旁组织中转录水平的差异.结果 CIP2A mRNA高水平转录与肠型胃癌、较高的分化程度、较大的肿瘤浸润深度、较高的TNM分期、血管癌栓、神经侵犯等临床病理参数相关(P<0.05);HER-2扩增与肠型胃癌、较高的分化程度、神经侵犯等临床病理参数相关(P<0.05).CIP2A mRNA高水平转录与HER-2扩增呈正相关.贲门胃底癌组织中CIP2A mRNA的转录水平显著高于其对应的癌旁组织(P<0.05).结论 CIP2A基因在贲门胃底癌组织中高表达,与患者的恶性临床病理参数密切相关.CIP2A基因可能成为贲门胃底癌患者新的分子标志物和治疗靶点,其可受到HER-2正调节.
-
FISH检测hTERC基因在不同级别宫颈病变中的表达及意义
目的:应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测宫颈脱落细胞中hTERC(human telomerase gene)的表达,探讨其临床意义.方法:搜集宫颈脱落细胞104例,其中正常20例,CIN Ⅰ 23例,CINⅡ14例,CINⅢ26例,宫颈癌21例.采用FISH检测hTERC基因表达,以正常标本建立阈值,同时进行液基细胞学(TCT)及第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)检测.结果:hTERC阈值为5.91％,hTERC扩增:CIN Ⅰ 3例(13.04％)、CINⅡ7例(50.00％)、CINⅢ20例(76.92％)、宫颈癌21例(100.00％),各组间比较差异具有统计学意义(x2=45.66,P＜0.001)；67例HPV阳性者,hTERC阳性率为65.67％ (44/67),37例HPV阴性者,hTERC阳性率为18.92％(7/37),两组比较差异有统计学意义(x2=7.5,P＜ 0.01),hTERC扩增与HPV感染正相关(r=0.592);hTERC扩增率在HSIL及以上病变中高于LSIL及以下病变(x2=28.69,P＜0.005).结论:hTERC有可能作为辅助宫颈癌筛查指标之一.
-
双色荧光原位杂交技术检测乳腺癌石蜡切片人类表皮生长因子受体2基因扩增
目的:应用荧光原位杂交技术检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)基因扩增情况.并对操作方法进行优化.方法:收集2008年4月至2008年10月期间我院乳甲科进行手术治疗的乳腺癌患者的癌组织病理切片,采用荧光原位杂交(FISH)技术检测Her-2基因扩增情况,并与免疫组化结果相比较,分析两者的相关性,同时优化操作方法.结果:收集的40例乳腺癌石蜡切片中,免疫组化检测Her-2蛋白表达(+++)有6例,(++)有22例,(+)有7例,(-)有5例.其中Her-2蛋白表达(+++)的标本FISH检测结果均为阳性,基因扩增与蛋白表达的符合率为100%;Her-2蛋白表达(++)的标本FISH结果有6例阳性,16例阴性,基因扩增与蛋白表达的符合率为27.3%.Her-2蛋白表达(+)及(-)的标本FISH结果均为阴性.Her-2蛋白表达(++)及以上的标本基因扩增与蛋白表达的符合率达到42.9%(r=0.584,P＜0.01).结论:FISH检测乳腺癌Her-2基因扩增的结果与IHC检测的蛋白表达结果符合率较好,可作为乳腺癌Her-2基因检测的一项新技术;在具体操作时,应注意严格控制切片厚度、消化时间及变性杂交温度等因素.
-
受体三阴性乳腺癌中CK14和EGFR的检测及临床意义
目的 研究三阴性乳腺癌中CK14和EGFK蛋白的表达及意义.方法 免疫组化法检测95例三阴性及50例非三阴性浸润性乳腺癌中CK14和EGFR蛋白的表达,运用荧光原位杂交(FISH)检测4例EGFR基因扩增情况.结果 所有三阴性乳腺癌病例显示为高级别癌,核分裂像易见.肿瘤组织具有推进式的边缘,周围伴淋巴细胞浸润.瘤细胞呈合体细胞样,通常见坏死,免疫组化示ER、PR和HER2均阴性,CK14和EGFR在三阴性乳腺癌中的表达率分别为83.2%和65.3%,在非三阴性乳腺癌中的表达率分别为2.0%和20.0%(P<0.01).4例FISH检测见EGFR基因扩增.结论 三阴性乳腺癌具有独特的组织学与基底样细胞表型,EGFR常过度表达,对于EGFR分子靶向治疗可能有效.
-
皮肤MALT淋巴瘤缺乏t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1和t(14;18)(q34;q21)/IGH-MALT1
目的:探讨黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤中常见的两个染色体易位t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1和t(14;18)(q34;q21)/IGH-MALT1在皮肤MALT淋巴瘤中的发生率.方法:采用MALT1及IGH双色分离探针,对19例皮肤MALT淋巴瘤标本进行间期荧光原位杂交(FISH).结果:19例皮肤MALT淋巴瘤中均未检测到涉及MALT1基因的染色体易位,但发现2例(2/19,11%)存在MALT1基因的3个拷贝现象.结论:涉及MALT1基因的染色体易位,即t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1和t(14;18)(q34;q21)/IGH-MALT1在皮肤MALT淋巴瘤罕见或不见.
-
525例肺癌中ALK阳性病例临床病理特征研究及检测方法探讨
背景与目的间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase, ALK）融合基因的产生对肺癌的发生、发展起重要作用。ALK酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors, TKIs）对ALK阳性肺癌患者具有较好的疗效。提高ALK阳性病例的检出率对患者有重要意义。本研究旨在探讨ALK阳性病例的临床病理特征、免疫组化（immuno-histochemistry, IHC）方法在筛查ALK阳性病例中的意义，以及荧光原位杂交（lfuorescence in situ hybridization, FISH）在检测流程中的作用。方法应用IHC方法检测525例肺癌患者组织标本中ALK的表达，并对其中34例进行FISH验证。结果肺癌病例中ALK IHC阳性率为5.14%（27/525）。ALK阳性组中年轻患者、女性患者比例高于ALK阴性组（P<0.05）；实体型肺腺癌在ALK阳性组中比例明显增高，而腺泡型与贴壁型比例明显降低，与阴性组相比有差异（P<0.05）。34例病例进行FISH验证，IHC与FISH符合率随IHC阳性程度的增加递增。伴或不伴有EGFR突变的ALK IHC阳性病例，都必须进行ALK FISH验证。结论 IHC可以作为可靠的ALK筛查手段，提高ALK的检出率。FISH检测对确诊ALK阳性肺癌具有重要意义。
-
细支气管肺泡癌和肺腺癌EGFR基因扩增的研究
背景与目的 分子靶向治疗药物表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)可提高肺腺癌病人的生存率,不同组织类型疗效不同.本研究对细支气管肺泡癌和经典型肺腺癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因扩增情况进行比较分析,为临床预后治疗提供依据.方法 根据2004年WHO新肺肿瘤分类标准选取2004年1月-2006年12月期间中国人民解放军总医院病理科病理档案中细支气管肺泡癌(BAC)27例(男13例、女14例)、经典型肺腺癌23例(男11例、女12例),具有BAC成分的混合亚型肺腺癌39例(男18例,女21例),总计89例.应用组织芯片和荧光原位杂交技术(FISH)进行EGFR基因扩增的检测.结果 在经典型肺腺癌病例中EGFR基因的扩增率为45.45%,BAC病例中的EGFR基因的扩增率为14.81%,混合亚型肺腺癌为22.58%.经典型肺腺癌的扩增病例明显多于BAC和混合亚型肺腺癌,三组之间χ2=11.632,P<0.05.三组病例中EGFR基因扩增多以散在信号存在.结论 EGFR基因在肺腺癌的扩增率高于BAC.
-
非小细胞肺癌中EGFR基因状态的检测对EGFR-TKIs疗效的预测价值
近几年,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是肿瘤学药物研发的一个重要靶点.EGFR的小分子抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)成为目前非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)靶向治疗的热点.临床研究表明,EGFR-TKIs的临床疗效存在明显的个体差异,EGFR 分子的存在状态影响TKI的疗效.EGFR 外显子突变、EGFR拷贝数增加的患者TKI的疗效较好,而存在KRAS突变患者提示对TKI耐药.
-
258例慢性粒细胞性白血病的临床和实验研究
目的 运用细胞遗传学和分子遗传学方法,对本院258例慢性粒细胞性白血病(CML)患者进行分析,探讨CML中Ph染色体的有关特点及临床意义.方法 采用骨髓直接法和短期培养法制备染色体,应用R显带技术对258例CML患者进行核型分析;对其中22例患者运用双色双融合探针(DC-DF-bcr/abl)进行FISH检测Ph易位信号特征.结果 11例(4.26%)为Ph(-);247例(95.74%)为Ph(+),其中15例(6.07%)为Ph染色体变异易住.结论 染色体核型分析有助于慢粒的诊断和鉴别诊断、判断疗效;FISH检测能给予精确的分子诊断.CML变异性Ph易位广泛累及除9,22外多条染色体.
-
荧光原位杂交在膀胱癌诊断中的应用进展
膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势[1].多数膀胱癌恶性程度高、术后易复发,导致治疗效果差和预后不良[2].因此,提高膀胱癌早期诊断和监测复发是急需解决的问题.膀胱镜检查和尿脱落细胞分析是目前膀胱癌诊断和复发监测的主要方法.膀胱镜检查的创伤性与尿脱落细胞分析低敏感度不能满足早期诊断和监测复发的需要.研究表明染色体畸变存在于膀胱癌发生、发展过程中,荧光原位杂交( Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是近年来研究染色体数目和结构畸变的方法,也是肿瘤早期诊断与复发监测研究的热点[3]本文就FISH技术、膀胱癌的遗传学改变及FISH在膀胱癌诊断中的应用进行综述.
-
多级梯度离心后X/Y精子浓度分析
目的 在辅助生殖中,利用多层密度梯度离心的方法来分选X/Y精子,以检验常规IVF-ET中,X/Y精子比例是否失衡.方法 使用SpermGradTM (Vitrolife,Sweden)与SpermRinseTM (Vitrolife,Sweden)配制10层梯度液,分别为100％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％.在离心管中制成多层梯度后,每层梯度间分界明显.选择液化正常、浓度约50×106/mL、活动率约50％,畸形率正常的5人精液混合后,去除个体差异取3 mL进行梯度离心.分别收集每层梯度底部精子,利用双色X/Y FISH探针(Vysis)进行FISH检测,统计X/Y精子比例.结果 100％、95％、90％、85％、80％五层梯度中X精子含量比例分别为:51.41％、51.41％、52.19％、50.99％、54.10％.结论 每层梯度液中X/Y精子含量比例虽有不同,但差异并不明显.现在辅助生殖技术中,利用商品化精子梯度分离液,即使使用多层梯度进行离心分离,也不会造成性别比例失衡.
