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流行性乙型脑炎疫苗纯化工艺的建立
目前我国流行性乙型脑炎(乙脑)疫苗已形成规模化生产,并取得了较好的预防效果[1],但此种疫苗属粗制疫苗,其抗原含量较低,异源蛋白和亚细胞成分较多,临床应用存在一定副反应,因此有必要将疫苗进行浓缩纯化,以提高疫苗的免疫效果和降低副反应.经过几年的探索,我们建立了乙脑疫苗的纯化工艺,并在国内率先通过国家新药评审.现将纯化工艺报告如下.
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磁酶免方法检测甲状腺激素及临床应用
1磁酶免方法简介该方法是磁性微珠(红细胞直径大小)分离技术和酶联免疫技术综合而成的定量测定系统.磁性微珠连接的单克隆抗体(免疫磁珠)与相应的标本抗原结合后,在磁铁磁力的作用下,特异性结合的抗原与其它物质分离,再通过酶联免疫显色反应测定抗原含量,从而克服了放免和普通96孔酶联免疫测定方法的缺点,该方法具有以下优点:
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急性冠状动脉综合征患者的血栓前高凝状态(摘要)
1 资料与方法检测40例急性冠状动脉综合征(ACS)患者的血浆组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)、凝血因子VII(FVII)、纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)、von Willebrand因子(vWF)水平,与正常对照组30例健康人比较.ACS组中15例还检测了常规治疗14天后的各指标水平.常规治疗包括:阿司匹林、硝酸酯类药物、极化液、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)类药物、普通肝素、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂,取血时停用肝素至少5天.TF、TFPI及vWF抗原含量以酶联免疫吸附法检测,FVII活性以凝固法检测,PAI-1活性以发色底物法检测.
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人类白细胞相关抗原B27在免疫相关性血细胞减少患者诊疗中的意义
为探讨人类白细胞相关抗原B27(HLA-B27)基因与免疫相关性血细胞减少(IRH)和全血细胞减少(IRP)发病的相关性,本研究观察了106例IRH/IRP患者血清中HLA-B27基因表达产物HLA-B27抗原含量,分析HLA-B27升高与该类疾病造血细胞损伤的可能关联及其临床意义.
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特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮患者血浆中血管性血友病因子裂解蛋白酶的测定
血管性血友病因子(vWF)裂解蛋白酶(ADAMTS13)是近年发现的调节vWF分子量大小的主要蛋白酶[1].ADAMTS13活性缺乏临床上可导致血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的发生[2,3].Moore等[4]报道特发性血小板减少性紫癜(ITP)、系统性红斑狼疮(SLE)等患者ADAMTS13活性也降低,为进一步明确ADAMTS13在ITP和SLE发病中的意义,我们用新近建立的试剂盒检测了上述患者ADAMTS13及vWF的抗原含量.
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磁性分离酶联免疫测定方法应注意的事项
磁性分离酶标免疫技术是80年代中期Serono(史朗洛)诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,称为磁性抗体免疫技术,它采用标本抗原,酶标单克隆抗体(原),荧光素标单克隆抗体夹心法(竞争法)形成免疫复合物.磁珠联接的抗荧光素抗体与免疫复合物中的荧光素结合,经磁场分离,洗涤,加底物后测定酶促反应成色结果可计算出标本抗原含量.此方法具有操作简便,无放射危害,多波长同时检测,
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神经元特异性烯醇化酶癌胚抗原含量及其比值的测定在小细胞肺癌诊断中的意义
近年来,肺癌的发病率与病死率逐年上升,严重危害人类的健康和生命,一般肺癌首诊时已达中晚期。肺癌的早期诊断显得尤为重要。肺癌相关性肿瘤标志物的测定是一种非侵袭性的检查方法,简便易行。因此,肿瘤标志物的研究与应用为肺癌的早期发现与诊断开辟了新的领域。本研究探讨肿瘤标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA )含量及其比值的测定在小细胞肺癌(SCLC)诊断中的临床意义。
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ELISA法测定香丹注射液中抗原的含量
香丹注射液是由降香和丹参提取加工精制而成的水溶液,能祛瘀止痛、活血通经、清心除烦.现代研究表明,香丹注射液具有改善心肌缺血缺氧、清除自由基、保护肝功能、镇静以及改善血液流变性等药理作用.临床用于胸闷、心绞痛、慢性肾炎和肾功能不全等症.随着临床应用的逐渐增多,其不良反应和安全性备受关注.通过对香丹注射液临床前安全性评价的回顾性分析,发现临床引发不良反应的香丹注射液在临床前安全性评价中多不曾发现有毒副作用,但在临床试验或上市后的应用过程中却出现了不良反应,其中以变态反应为多见(约占不良反应中的60~70%左右).
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白介素6和白介素8对单核细胞组织因子表达的影响
白介素6(IL-6)是一种多功能的细胞因子,除涉及感染、炎症等急性期反应外,对T、B细胞的发育、骨髓造血细胞增殖均有很重要的作用[1]。自多发性骨髓瘤患者血浆IL-6水平增高被发现后,又发现IL-6血浆水平增高还见于弥散性血管内凝血(DIC),并且与DIC的严重程度、治疗反应和DIC是否伴有脏器损伤有关。IL-8属于α型趋化因子,在其多种生物特性中,有一种趋化中性粒细胞的功能。在整合素参与下,作用于血小板和内皮细胞,使CD16和CD18的表达和IL-6一样卷入凝血和血栓形成的过程。近又证实单核细胞表面可表达白介素6受体(IL-6R),单核细胞也可能受到IL-8的趋化作用。单核细胞是血液细胞中重要的组织因子(TF)来源的细胞,TF在DIC和其他血栓形成病变中的作用是不容置疑的[2]。本文就IL-6和IL-8对外周血单核细胞体外培养中TF表达的影响,研究IL-6、IL-8与单核细胞、TF在血栓形成中的相互关系。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 外周血单核细胞(PBMC) 取自10名正常健康志愿者外周血。1.1.2 试剂 rhIL-6、hIL-6 MoAb和rhIL-8、IL-8 Mo-Ab购自STAGO公司。TF ELISA检测试剂盒购自Immunotech公司。Ficoll液、Hypague液购于Sigma公司。RPMI1640培养液、NCS购于Sigma公司。1.2 方法1.2.1 外周血单核细胞分离 采用密度梯度离心法。1.2.2 外周血单核细胞原代培养 将2×105ml-1的外周血单核细胞悬浮于20%的NCS RPMI1640培养液中,以5%CO2 37℃培养24h。将PBMC培养液用水平离心机以3 000 r/min,离心10 min,取上清液待测。1.2.3 上清液TF抗原含量检测 以ELISA方法测定外周血单核细胞培养(加或不加rhII-6、hIL-6 MoAb和rhIL-8、IL-8 MoAb)上清液中的TF抗原含量。
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血管性血友病因子抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用
目的 建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方法;用VWF国际标准品(NIBSC07/316)标定内控标准品(无FⅧ的VWF),确定VWF∶Ag的国际单位(Ag/ml)与质量单位(μg/ml)的关系;对建立的方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性验证;将验证后的该方法用于FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析.结果 捕获抗体和检测抗体稀释度均为1∶200;VWF∶Ag的1 Ag/ml对应16 μg/ml;标准曲线的线性范围为160~10 ng/ml,各浓度回收率在95.8%~103.2%之间,变异系数(CV)<5%,R2≥0.99;不同浓度样品检测结果的批内回收率在93.0%~ 113.9%之间,批间回收率在95.1%~105.5%之间;批内CV在0.7% ~ 8.2%之间,批间CV在3.8% ~ 9.6%之间;样品添加试验的回收率在96.9%~114.7%之间.具有生物学活性的样品应-80℃冻存,复融1次后立即检测;国药集团武汉血液制品有限公司FⅧ纯化工艺中PEG沉淀和离子交换层析去除了95%以上的VWF,工艺稳定性较好,成品具有与血浆接近的FⅧ∶Ag/VWF∶Ag比值.结论 建立的人VWF抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的线性、准确度和精密度.用该方法进行VWF的抗原含量检测可作为FⅧ纯化工艺内部质量控制的一个指标.
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062 IELISA法检测片吸虫病病人血清中E/S循环抗原含量:血清诊断及疗效评估工具
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结直肠癌局部淋巴结癌胚抗原含量判断淋巴结转移的价值
局部淋巴结转移状况是判断结直肠癌预后和选择辅助治疗方案的重要因素之一.常规淋巴结病理学检查工作量大、费时,因而需要找到一种简便、迅捷、准确的方法来判定淋巴结转移状况[1].我们用电发光法测定结直肠癌局部淋巴结浸出液癌胚抗原(CEA)浓度,分析其对判断有无淋巴结转移的价值.
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10例造血系恶性肿瘤组织因子途径抑制物检测
组织因子途径抑制物(TFPI)是血液中新确定的一种外源途径抗凝物质,其主要功能是调节组织因子(TF)诱导的凝血过程[1].现已发现其含量变化与某些恶性肿瘤,血栓性疾病,及弥散性血管内凝血(DIC)等相关.本科近期测定了部分造血系恶性肿瘤患者血浆中TFPI抗原含量与活性,现报道如下.
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在AU2700生化分析仪上测定IgG限额参数MaxOD的设置
对基于抗原抗体反应的免疫透射比浊反应当抗原过量(出现等价带及后带反应)时,其浊度大小与抗原含量的正比关系即不存在,可能导致错误结果.现以科华公司IgG测定为例,在AU2700生化分析仪上通过设定限额参数MaxOD,来自动识别抗原过量.
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ELISA检测错误原因分析
ELISA即酶联免疫吸附试验,是一种常用的固相酶免疫测定方法.ELISA的基本原理是:①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例;再加入酶反应底物后,底物被酶催化后变为有色产物,根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析,以了解被测标本中抗体或抗原含量.
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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒规模化生产培养工艺的建立
目的:通过对发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(简称“新布尼亚病毒”)进行规模化生产培养工艺研究,为新布尼亚病毒规模化生产提供有力支持。方法采用细胞工厂培养Vero细胞,待其长成致密单层后,取工作种子批新布尼亚病毒毒种接种细胞,采用连续收获或细胞病变充分时收获培养液上清的方法收获病毒,并以病毒滴度、抗原含量作为评价指标选择基础培养基、培养基pH、人血白蛋白添加浓度、接种细胞日龄、接种病毒MOI以及病毒培养温度。结果按0.01~0.001 MOI接种3~4日龄Vero细胞,病毒培养液选择含0.3%人血白蛋白pH 7.6~7.8的DMEM溶液,35℃培养7 d收获,病毒收获液病毒滴度7.87 LgCCID50/mL、抗原含量170.1μg/mL。结论初步建立了新布尼亚病毒规模化生产培养工艺,为后续工业化生产提供了数据支持。
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检测狂犬病疫苗抗原含量的竞争ELISA的建立及初步应用
为满足狂犬病疫苗生产质量控制的需要,建立了竞争ELISA检测法,通过标准曲线的确定来计算病毒抗原的相对含量,并与ELISA间接法和双抗体夹心法结果进行比较.该方法方便准确,可对培养中的病毒抗原相对含量进行全程监测,是一种有效的辅助检测手段.
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不同狂犬病毒株在地鼠肾细胞上培养的病毒滴度与免疫原性比较
三个狂犬病毒株,分别经地鼠肾细胞培养,将其抗原含量,病毒滴度和免疫原性进行比较.结果显示,三个病毒株的抗原含量有差异,但差异无显著性;CTN-V10M3的毒力高,CTN-BHK3的毒力低,aG株的毒力虽然居中,但免疫原性好,它仍是适于地鼠肾细胞上培养的毒株.
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我国柯萨奇病毒A组16型抗原标准品的协作标定和适用性研究
目的 建立第一代国家柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)抗原标准品,用于CV-A16疫苗的抗原含量检测.方法 由中国食品药品检定研究院(中检院)牵头,联合我国主要的CV-A16灭活疫苗研发单位,共计6个实验室,采用协标试剂盒,分别对两个相同、编盲设置的候选CV-A16抗原标准品(A、B)进行CV-A16抗原含量协作标定.并且分别采用各实验室建立的CV-A16抗原检测试剂盒和各自工艺制备的CV-A16疫苗原液,以候选标准品为标准进行适用性研究.结果 各实验室A/B相对抗原含量比为0.978~1.082 (CV:6.2%~12.4%),表明各实验室检测结果准确、可靠.故将A、B结果合并分析.候选标准品(A、B)的几何均值为2 194.5 kU/ml,几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为11.0%,且协标结果呈正态分布,符合标准品研制要求.将候选标准品的抗原含量暂定为2 000 U/ml进行适用性研究,共3家实验室完成该研究,结果显示3个采用各自工艺制备的CV-A16原液,在各自建立的CV-A16检测试剂盒上均与候选标准品具有良好的线性和平行性,适用性良好.结论 建立的候选标准品可作为CV-A16抗原标准品,赋值为2 000 U/ml,用于CV-A16疫苗的抗原含量检测.
关键词: 手足口病 柯萨奇病毒A组16型 抗原含量 标准品 -
重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法的建立
目的 建立重组肠道病毒71型疫苗(EV-A71)(汉逊酵母)抗原含量测定方法,用于重组EV-A71(汉逊酵母)疫苗的质量控制.方法 以抗EV-A71(汉逊酵母)多克隆抗体为包被抗体,经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),确定定量限度及佳定量范围,并对该方法的准确度、精密度和特异性进行方法学验证.结果 线性范围为5~80 U/ml,线性和平行性良好.定量下限为5 U/ml,检测不同浓度的EV-A71国家抗原标准品,回收率在88%~115%,准确度良好;重复性和中间精密度测定,其变异系数均小于15%;与重组柯萨奇病毒A16、甲型肝炎灭活疫苗(HAV)、冻干水痘减毒活疫苗(VZV)、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)、五价口服轮状病毒减毒活疫苗(RV)等疫苗、Tris缓冲液、PBS缓冲液、破碎液、汉逊酵母宿主蛋白(HCP)均无交叉反应,其专属性良好.结论 建立了重组EV-A71疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法并进行了初步验证,为疫苗研制中抗原含量的质控提供了可靠的检测手段.
关键词: 肠道病毒71型(EV-A71) 疫苗 汉逊酵母 抗原含量 方法建立