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高效毛细管电泳仪在临床微生物学检验中的应用
高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE)技术是一种新型高效液相分离技术,具有快速、高效、高灵敏度、重复性好、易定量、非同位素操作、可实时监测及全自动化等优点[1],广泛应用于化学、生物学、医学、环境卫生等各个方面,尤其是用于生物医学,如甄别人类遗传性基因缺陷、对基因进行定量分析、微生物学和病毒学分析、法医分析、基因治疗[2]等.目前,在临床检验中HPCE主要用于检测糖、蛋白质、核酸等.
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标记免疫分析技术进展
1959年Berson和Yalow报道放射免疫分析测定血浆胰岛素,由此开创了放射免疫分析(RIA)技术检测微量物质的新纪元,四十余年RIA已成为成熟的技术,在临床检测和科学研究中产生重要影响.我国自二十世纪六十年代起的三十余年,经历了几个发展阶段取得了瞩目的进展和广泛应用.近十余年,应用相关的放射免疫原理,以非同位素物质替代放射性核素标记抗原或抗体,相继出现了一些新的非同位素标记免疫分析技术如酶、化学发光、酶放大和荧光免疫分析等技术,与放射免疫分析技术一起统称为标记免疫分析技术.现就标记免疫分析技术的现状和发展作如下综述.
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石蜡切片FISH技术应用于肿瘤组织的探讨
荧光原位杂交(FISH)是80年代初期发展起来的非同位素杂交技术之一.FISH是DNA片断物理定位的主要方法,是绘制人类基因组物理图谱的主要手段.此外,FISH也可作为传统细胞遗传学的补充,在中期染色体片上检测出难以确定的染色体易位、微小缺失等,即使在分裂象少、分散质量差的玻片上,也能得到良好结果.因此,FISH是一种重要的分子细胞遗传学方法.1986年细胞遗传学概念提出后,FISH技术的应用领域大为扩展,可以在细胞系、分离细胞核、印片以及石蜡切片等标本中检查染色体数目和结构畸变,使细胞遗传学成为真正的全周期细胞遗传学,从而也引起了肿瘤学家的关注.利用此项技术的有关报道国内时常可见,但是用于石蜡切片者几乎没有,主要是方法上还存在一定难度,结果也不太好分析等.将FISH技术用于肿瘤石蜡切片,可以在病理形态尚正常时对肿瘤进行早期的分子水平的诊断,具有非常诱人的应用前景.我们采用一个染色体着丝粒探针和一个单拷贝基因探针,利用鼻咽癌和口腔癌石蜡切片,经过反复摸索,建立了石蜡切片FISH技术.
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时间分辨荧光免疫分析技术研究
时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种全新的国际上公认的有发展前途的非同位素免疫分析技术.镧系元素(Eu、Tb、Sm、Dy等)螯合物有突出的固有特点:激发大波长到发射大波长之间的Stokes位移很大,前者对后者无干扰.激发光谱段较宽,可增加激发能;发射光谱带窄,50%发射谱带宽度不足10nm,本底荧光很小;荧光衰变时间很长,有的达1ms.
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磁性分离酶联免疫测定方法应注意的事项
磁性分离酶标免疫技术是80年代中期Serono(史朗洛)诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,称为磁性抗体免疫技术,它采用标本抗原,酶标单克隆抗体(原),荧光素标单克隆抗体夹心法(竞争法)形成免疫复合物.磁珠联接的抗荧光素抗体与免疫复合物中的荧光素结合,经磁场分离,洗涤,加底物后测定酶促反应成色结果可计算出标本抗原含量.此方法具有操作简便,无放射危害,多波长同时检测,
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量子点技术在生物医学领域的应用进展
生命科学的高速发展对我们提出了大量新的课题,目前集中在核酸、多肽、蛋白质等生物大分子的分析中.在生物医学领域里,研究和应用高灵敏度的非同位素检测方法一直是各国学者共同努力的方向.生物大分子检测的主要方法之一是标记分析法,由于大多数生物大分子自身可分析的特性较弱,要获得高灵敏度的检测,必须借助于外来标记物获得可分析的信号.常用的非同位素检测方法主要有:酶联免疫法、化学发光法、电化学发光法及荧光分析法等.其中发光标记是主要的方法之一,其检测灵敏度很大程度上取决于标记物的发光强度和稳定性.
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磁分离酶联免疫技术检测血清甲状腺激素的临床应用
磁分离酶联免疫技术(MAIA)是近年来国外应用较为广泛的一种非同位素免疫检测的先进技术,具有高灵敏度、高特异性、快速稳定、无放射污染等优点,其测定结果与放射免疫(RIA)分析结果一致,结果符合率达92.7%,呈高度相关,r=0.974,P<0.001.我们自1998年以来对1890人次进行了血清甲状腺激素五项(T3、T4、FT3、FT4、TSH)联合测定,结果准确可靠,对临床诊治甲状腺疾病有较高的指导意义,现将测定方法及结果报告如下.
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非核素标记检测端粒酶活性的研究
Kim[1]于1994年借助PCR技术建立了灵敏的端粒酶检测方法--端粒重复片段扩增(telomerase repeat amplification protocol,TRAP).我们对Kim的方法加以改进,建立了简便、非同位素的银染检测法,检测了脑瘤、肠癌、食管癌中端粒酶的活性.
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磁性分离技术检测T3、T4的应用探讨
磁性分离酶联免疫技术是SERONO公司发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,它将免疫磁性微珠分离技术引入酶联免疫测定领域.磁性微珠连接的单克隆抗体与相应的标本抗原结合后,在磁力的作用下,特异性结合的抗原与其它物质分离,再通过酶联免疫显色反应,测定其含量,我们用这一方法对不同浓度的T3、T4进行检测,现报告如下.
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磁性分离酶标技术检测T3、T4、TSH、FT3、FT4
磁性分离酶标免疫技术是80年代中期Serono诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,称为磁性抗体免疫技术(MAIA).使双抗体夹心酶联免疫技术在游离型标记抗体和标记抗原--抗体复合物分离中具有分离完全和快速的优点.我们采用Seroeyme酶联免疫双抗体夹心检测系统,分析测定T3、T4、TSH、FT3、FT4,现将检测结果报告如下.
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应用微机处理聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色图像结果
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是核酸研究中的重要实验技术.以PAGE为基础的聚合酶链反应结合单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术已成为筛查基因突变的基本方法[1-3],特别是以硝酸银染色显示结果的非同位素PCR-SSCP技术受到国内科研工作者的喜爱[4,5].银染色使凝胶中的DNA条带肉眼可见,因此银染凝胶片是重要的原始资料,常用吸水纸[4]将凝胶制成干胶片后保存,拍照记录结果,但较为麻烦.近我们在采用银染色PCR-SSCP技术筛检胃癌组织p53基因突变时,直接应用微机对PAGE银染色图象结果进行处理和保存,简便易行,特介绍如下.