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地高辛标记炭疽杆菌DNA探针的研究
本文介绍了试用地高辛标记,将炭疽芽孢杆菌的PXD1和PXD2两质粒上分别扩增到290bp和288bp基因片断制成非放射性标记探针,利用菌落原位杂交方法进行检测,表明两探针的敏感性、特异性均良好,提示该两探针将能为基层工作提供更准确、快速的炭疽杆菌检验技术.
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简析生物技术在食品安全检测中的新应用
本文首先介绍了生物技术的概念及特点,表明生物技术已经被广泛应用于食品的安全检测中,并结合现阶段的生物技术发展,阐述了不同的生物技术在食品安全检测中的价值体现,旨在强调生物技术已经逐渐成为了食品安全检测新技术中的重要组成部分.
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应用DNA探针技术快速检测食品中产气荚膜梭菌产肠毒素基因的研究
产气荚膜梭菌是引起食物中毒的病原菌,其为G-厌氧菌.有芽胞,常存在于自然界、健康人和动物肠道内.产气荚膜梭菌食物中毒的起因物质是该菌在形成芽胞时产生的A型肠毒素.因此,检测产气荚膜梭菌的产肠毒素株是非常必要的.本实验建立一种基因探针方法,能快速准确地检出产气荚膜梭菌的产毒株.我们于1999年5月~10月间,共检测样品180份,结果报告如下.
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聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病毒检测中的应用
利用半抗原地高辛配基(digixigenin)制备非同位素标记探针技术,分别标记乙型肝炎病毒全基因探针(DIG-HBVDNA)及乙型肝炎病毒PCR产物C区探针[DIG-HBV(C/preC)],经斑点杂交检测血清HBVDNA及血清聚合酶链反应(PCR)产物,与PCR平行检测122份血清标本.
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荧光探针定量聚合酶链反应检测结核分支杆菌比较研究
关于结核病的实验室诊断,近年来报道了一些新的快速诊断方法:如荧光探针定量聚合酶链反应,连接酶链反应,基因探针扩增检测结核分支杆菌复合物等新技术方法,提高了结核分支杆菌(MTB)的检出率.
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K562细胞株表达基因探针制作的探讨
目的研究基因芯片探针的制备方法,为K562细胞基因表达谱芯片的制作及其在基因表达研究中应用打下基础. 方法以人红白血病K562细胞株为材料,应用一种分离显示基因的新方法即限制性显示(RD-PCR)技术,分离DNA片段,作为基因芯片探针. 结果分离到近千个大小在200~500bp的基因片段,认为该方法可以克服DD-PCR中出现的假阳性较多的缺点,简单易操作,且利用该方法分离的基因探针,制备D NA微集芯片,同全长cDNA探针制作芯片相比,其探针长度小且相对均一,杂交动力学易于控制. 结论限制性显示技术为基因芯片探针的制备提供了一个全新的思路, 并将大大加速基因芯片技术及其应用研究.
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疾病基因克隆的策略及主要方法
目录一、定位克隆 (positional cloning) 策略 (一)家系连锁分析法 (二)等位基因共占法 (三)人群相关分析法 (四)cDNA筛选二、消减杂交 (subtractive hybridization) 策略 (一)消减杂交法和抑制性消减杂交法 (二)差示反转录PGR法和差异消减显示法 (三)代表性差异分析法和Sl核酸酶介导的缺失基因探针富集法 (四)基因组错配扫描法 (五)比较基因组杂交法 (六)DNA微阵列杂交系统三、两类策略的联系
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石蜡切片FISH技术应用于肿瘤组织的探讨
荧光原位杂交(FISH)是80年代初期发展起来的非同位素杂交技术之一.FISH是DNA片断物理定位的主要方法,是绘制人类基因组物理图谱的主要手段.此外,FISH也可作为传统细胞遗传学的补充,在中期染色体片上检测出难以确定的染色体易位、微小缺失等,即使在分裂象少、分散质量差的玻片上,也能得到良好结果.因此,FISH是一种重要的分子细胞遗传学方法.1986年细胞遗传学概念提出后,FISH技术的应用领域大为扩展,可以在细胞系、分离细胞核、印片以及石蜡切片等标本中检查染色体数目和结构畸变,使细胞遗传学成为真正的全周期细胞遗传学,从而也引起了肿瘤学家的关注.利用此项技术的有关报道国内时常可见,但是用于石蜡切片者几乎没有,主要是方法上还存在一定难度,结果也不太好分析等.将FISH技术用于肿瘤石蜡切片,可以在病理形态尚正常时对肿瘤进行早期的分子水平的诊断,具有非常诱人的应用前景.我们采用一个染色体着丝粒探针和一个单拷贝基因探针,利用鼻咽癌和口腔癌石蜡切片,经过反复摸索,建立了石蜡切片FISH技术.
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PE、EV71及CoxA16基因探针的制备
目的 制备地高辛标记基因探针,利用分子杂交试验同时检测手足口病患者粪便标本中的肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Enterovirs 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16). 方法 根据GenBank已发表的基因序列,分别在PE、EV71、CoxA16保守区设计3对特异性寡核苷酸引物,进行实时荧光定量PCR检测.从PE、EV71、Co xA 16阳性标本中分离病毒,提取RNA,以RT-PCR扩增产物作为基因探针的目的基因,采用随机引物法进行Digxigenin-11-dUTP标记,采用分子杂交试验检测3种基因探针的灵敏性和特异性. 结果 RT-PCR分别扩增出116、226、208 bp目的基因片段,经标记后作为检测PE、EV71、CoxA16的3种高纯度的基因探针,对相应病毒RNA的低检出限均为1 pg,可分别与PE(+)、EV71(+)、CoxA16(+)标本提取的RNA发生特异性杂交,与乙型脑炎病毒、诺如病毒、轮状病毒、H3N2、甲型H1N1流感病毒的核酸无杂交反应. 结论 制备的PE、EV71及CoxA16基因探针灵敏、特异,操作简单,适用于手足口病病原的实验室检测.
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Au纳米颗粒HBV DNA基因探针的制备及其在目视化检测HBV DNA中的应用
制备金(gold,Au)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在目视化检测HBV DNA中的应用.Au纳米颗粒通过金-硫(Au-S)共价键结合烷氢硫醇修饰的寡核苷酸,制备检测探针.用荧光标记法检测Au纳米颗粒表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率.检测探针与固定在尼龙膜上的捕捉探针构成双探针,用斑点杂交法检测HBV DNA,加入银离子(Ag+)-对苯二酚液染色观察结果.制备的Au纳米颗粒粒径为(12±5)nm,分散良好,在520nm有大吸收峰,经寡核苷酸修饰后,大吸收峰改变为524nm.Au纳米颗粒表面寡核苷酸的大覆盖率为(132±10)条,大杂交效率为(22±3)%.在尼龙膜上用斑点杂交法可检出低至10fmol的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物.Au纳米颗粒HBV DNA基因探针可用于目视化检测HBV DNA,此方法具有敏感性高、特异性好、简单、价廉的特点,可望在许多领域,尤其是在多基因检测芯片上有潜在的应用价值.
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电子基因微芯片在医学研究中的应用
基因芯片(DNA microchip)也称 DNA 微阵列(DNAmicroarray),是把大量基因探针或基因片段按特定的排列方式固定在芯片载体上,形成致密有序的 DNA 分子点阵,按碱基互补配对原则与样品 DNA 杂交,然后通过计算机进行解读和分析获取大量信息,实现对生物样品高效、平行地检测或医学诊断.由于具有高通量、快捷、便宜等优点,基因芯片在各个领域起着越来越重要的作用.
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HIV-1G亚型基因芯片的制备与杂交分析
基因芯片技术是一种高效、敏感、平行化的基因检测分析新技术[1],对临床疾病的诊断技术将产生革命性的影响,目前主要集中在感染性病原基因的检测方面.我们尝试将该技术应用于人免疫缺陷病毒(HIV)基因的检测与分型.首先制备HIV基因组探针并分别进行分析,实验中我们采用一种基因显示新技术:限制性显示(restriction display,RD-PCR)[2,3],制备HIV-1G亚型基因探针,并用基因芯片荧光标记杂交的方法对这些探针进行了杂交分析,为基因芯片技术在HIV感染检测的应用中奠定了基础.
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HBV整合的致癌性研究
HBV的4个亚基因产物中,HBx具有反式激活、介导细胞凋亡作用,HBs具有反式激活因子的作用.肝细胞癌(HCC)的发生与HBV的整合及整合后染色体重排有关.为探讨HBV整合及HBx、HBs亚基因在HCC发生中的可能作用,我们制备了HBV亚基因探针,并以此对肝细胞癌中HBV整合及亚基因转录进行了研究,以期为阐明HBV感染后HCC发生机制提供一定的实验资料和依据.
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应用增强化学发光法分型检测肠毒素大肠埃希菌
肠毒素大肠埃希菌(ETEC)是引起人畜急性感染性腹泻的重要病原体.与人类腹泻密切相关的是不耐热肠毒素h(LTh)、耐热肠毒素Ⅰb(STⅠb)及耐热肠毒素Ⅰa(STⅠa)三种肠毒素菌株.我们利用一种新型的核酸探针标记和检测技术,建立了用辣根过氧化物酶(HRP)标记ETEC三种基因探针及通过增强化学发光法检测三种肠毒素基因并分型的方法,取得较好结果.
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高水平耐环丙沙星淋病奈瑟菌gyrA和parC基因突变研究
国外对以环丙沙星为代表的喹诺酮类药物的耐药菌株研究发现,淋病奈瑟菌(淋菌)除了在低水平耐药株的基因突变位点较为稳定外,在不同国家和地区,高水平耐药株突变位点和突变方式差异巨大,研究各个地区的耐药基因突变情况,可以设计针对本地区的耐药基因探针和采用其他方法,对本地区耐药菌株作出快速诊断.
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基因探针与表达序列标签微阵列技术在心血管疾病分子研究中的应用
DNA微阵列(DNA microarray)是近20年来发展起来的一项多学科交叉、应用杂交原理进行分子分析的生物检测技术.虽然历史较短,但在生命科学的诸多领域已显示出巨大的潜力和诱人的前景[1,2].
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脑缺血后脑组织内皮素-1基因的表达及意义
近年来的研究结果显示,脑缺血后脑组织内皮素-1(ET-1)含量增加,并可能参与了脑血管病的病理过程.我们旨在通过原位杂交和点杂交的方法观察脑缺血后脑组织ET-1基因表达的变化,以证实脑缺血后ET-1含量增加是由于其基因表达增强所致.材料和方法:雄性SD大鼠30只,体重250~300 g,随机分为10组.参照Longa等的大鼠中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型.用于做点杂交的大鼠分别于缺血时和缺血后0.5、1.5、3、6、12、24、48和72h断头取脑,分离中动脉分布区的皮层和尾壳核;用于做原位杂交的大鼠于缺血后24h断头取脑.ET-1基因探针为合成的寡核苷酸探针,由27个核苷酸组成.
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OLIG1对人少突胶质细胞瘤鉴别诊断意义的研究
一、临床资料和方法30例患者的手术标本,病理由两位病理专家共同进行诊断,以全部相同的诊断结果为纳入病例.其中少突胶质细胞瘤13例,星形胶质细胞瘤12例,胶质母细胞瘤3例和正常脑组织2例.每例标本离体后,立即固定,石蜡包埋;制成切片后,对切片进行脱蜡、脱水、super blocker处理、胃蛋白酶消化、杂交缓冲液孵育、探针原位杂交、漂洗、探针标记、DAB显色、苏木精染核等处理后,树脂封片,显微镜下观察结果;并根据阳性细胞数的多少将结果分为6个等级.OLIG1基因探针自行设计,由Invitrogen公司合成并提供原位杂交试剂盒.
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基因芯片技术及其在医学检验中的应用
基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上,借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析.美国1998年启动"生物芯片计划"以来,英、德、加、俄、意、日、港台也相继开始加大投入,以生物芯片为主的相关产业正在全球兴起.基因芯片技术在人类疾病检测治疗和预防领域具有广泛的应用价值.
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HSV1-tk乳腺癌移植瘤裸鼠模型PET-CT报告基因显像
目的 对~(18)F-FHBG体外摄取、体内分布及荷瘤裸鼠PET-CT显像等方面进行研究.方法 利用γ井型计数器测定体外肿瘤细胞T47D和T47D-tk对~(18)F-FHBG的摄取、正常昆明小鼠和移植瘤裸鼠~(18)F-FHBG体内分布;并进行荷皮下移植瘤裸鼠~(18)F-FHBG PET-CT显像.结果 体外肿瘤细胞摄取实验显示T47D-tk细胞摄取~(18)F-FHBG的程度明显高于正常的T47D细胞,120 min时T47D-tk细胞对~(18)F-FHBG的摄取为T47D细胞的64倍(P<0.001).正常小鼠注射~(18)F-FHBG后,主要分布于肝脏、肠道、肾脏和膀胱,而脑部未见明显放射性分布.荷皮下移植瘤裸鼠PET-CT显像显示,T47D-tk肿瘤浓聚~(18)F-FHBG的程度明显高于T47D肿瘤,且2 h显像效果较好.结论 体外T47D-tk细胞摄取~(18)F-FHBG的程度明显高于正常的T47D细胞;在小鼠体内~(18)F-FHBG主要经肠道和泌尿系统排泄.~(18)F-FHBG报告基因探针可以有效的定位于HSV1-tk基因表达的部位且与移植瘤裸鼠体内分布研究结果一致.这可为进一步开展~(18)F-FHBG报告基因显像与肿瘤基因治疗的监测提供有效手段和科学依据.
关键词: 基因探针 ~(18)F-FHBG PET-CT显像 HSV1-tk基因 乳腺癌