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353 紫杉醇生物合成:由红豆杉悬浮培养细胞中细胞色素P450羟化酶催化的紫杉二烯-5α-醇及其乙酸酯的差别转化
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APOBEC家族:介导天然抗病毒免疫的新型宿主细胞因子
天然免疫在机体抵御病毒感染的过程中发挥着重要的功能.近年来,一些介导天然免疫的新型宿主细胞因子陆续被发现,其中APOBEC家族(apolipoprotein B mRNA editing enzyme-catalytic polypeptide family,载脂蛋白B mRNA 编辑酶催化多肽家族)作为一种具有独特抗病毒机制的蛋白质分子,越来越受到人们关注,已成为生命科学研究的热点.它们能够在DNA或RNA水平上改变病毒的遗传信息,这一称为编辑(editing)的修饰和加工过程,可以在多种病毒的基因组或其逆转录产物中引入高频突变, 进而诱导其降解、干扰其复制或者严重影响病毒蛋白的生物学功能.
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精子特异性乳酸脱氢酶研究进展
特异性乳酸脱氢酶( sperm-specific lactatedehydrogenase,LDH-C4)特异地存在于鸟类和哺乳类动物的睾丸和精子中,与体细胞乳酸脱氢酶A4(LDH-A4)和B4(LDH-B4)同属于乳酸脱氢酶家族,它们都以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶催化丙酮酸和乳酸的转化,在能量代谢中发挥重要作用,但LDH-C4 与体细胞LDH 相比又具有一些独特性质.近来,在研制新型避孕药的过程中,免疫避孕疫苗逐渐引起人们的重视[1],免疫法控制生育具有无药物的毒副作用、管理使用方便、低价、作用相对持久且可逆等优势,但找到理想的精子特异性抗原是制备免疫避孕疫苗的关键[2].用不育患者血清中提取的抗精子抗体(AsAb)来寻找睾丸cDNA 文库表达的抗原候选对象,结果发现特征性强且免疫效果可靠的免疫原为LDH-C4[3].本文主要针对近年来LDH-C4 的研究进展及其应用做一综述.
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影响细胞分化相关基因NDRG1作用的相关因素研究进展
N-myc下游调节基因( N-myc downstream regulated gene , NDRG)1属于NDRG家族,α/β水解酶超家族,但没有水解酶催化位点[1]。初是在N-myc敲除的小鼠胚胎组织中发现的,受 N-myc 的抑制而得名。 NDRG1位于人类染色体8q24,全长约60 kb,包括16个外显子和15个内含子,含有一个与第1外显子和第1内含子5′端重叠的CpG岛,C末端包含有3段特有的10个亲水性氨基酸残基( GTRSRSHTSE )串联重复序列。 NDRG1含有磷酸泛酰巯基乙胺序列,在一些多酶复合物中,该序列提供辅基酰基载体蛋白,作为“摆动臂”活化氨基酸和脂肪酸[2]。
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APOBEC3G和HIV-1病毒感染因子Vif研究新进展
固有免疫在机体抵御HIV-1感染过程中发挥重要作用.载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide protein,APOBEC)家族的成员APOBEC3G(A3G)可以通过胞嘧啶脱氨机制抑制HIV-1的复制,发挥固有免疫的作用;病毒感染因子(virus infectivity factor,Vif)能与A3G结合并引发A3G的降解,使HIV-1的感染率增加100倍以上.该研究为以Vif-A3G为靶点的抗HIV-1药物的研究提供了新的思路.因此A3G、Vif及其相互作用机制成为HIV-1研究的热点.
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活化诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)抗病毒作用研究进展
APOBEC ( apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like protein )家族为载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白,具有脱氨酶功能,到目前为止共发现了11种该家族成员:APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3s(A~C,DE,F~H)、APOBEC4、AID[1]。 APOBEC家族成员可以通过固有免疫和适应性免疫作用抑制病毒感染和限制病毒复制[1]。作为APOBEC家族成员之一,活化诱导的胞嘧啶脱氨酶( ac-tivation induced cytidine deaminase , AID)主要通过介导免疫球蛋白基因类别转换( gene class switch DNA recombination , CSR)和体细胞高频突变(somatic hypermutation,SHM)产生高亲和力抗体参与机体的适应性免疫功能[2],近年来研究发现AID可以通过介导病毒感染细胞凋亡或病毒基因组降解等方式发挥抗病毒作用[3-6]。本文主要对AID在抗病毒中发挥作用进行综述。
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D-二聚体的检测及其临床应用
D-二聚体(D-dimer,D-D)是纤维蛋白(原)降解的产物.当体内凝血系统激活后生成凝血酶,凝血酶催化纤维蛋白原生成可溶性纤维蛋白单体,后者在活化凝血因子XⅢ(activated coagulation factor,FXⅢa)的作用下生成稳定的纤维蛋白,使血液发生凝固;在纤溶酶的作用下,纤维蛋白(原)生成一系列的降解产物,而终的产物是D-D.因此,D-D是反映体内凝血系统和纤溶系统激活的特异性指标之一.本文就D-D的检测及其临床应用作一浅述.
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血清酶学测定标准化进展
血清酶学测定是临床化学检验的重要组成部分,在肝脏功能评价、心肌损伤判断、胰腺炎鉴别诊断以及在其他方面的应用中起着重要的作用,是现代临床化学中频繁测定的项目之一.在酶学定量测定中,几乎都是通过检测酶催化化学反应的转换速率来测量的.但是酶催化活性浓度的测定受到很多因素的干扰,如:催化反应的方向、起始物的种类和浓度、底物、辅因子、活化剂、变构剂的种类和浓度、指示酶和辅助酶的种类和浓度、指示剂和相应的波长、pH、缓冲液的性质和离子强度、激活或抑制因子、杂酶、样品在反应体积中的比例、检测周期长短、温度以及不同的测定程序等,都会引起结果的差异.因此实验室间的测定结果可比性很差.
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脱氢表雄酮抗骨质疏松作用的研究进展
脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)由肾上腺皮质网状带中的细胞色素P450c17为主酶催化胆固醇合成,主要以DHEA-S的形式进入血循环,在相关外周组织中转化为雄激素或雌激素发挥间接生物学效应.DHEA于出生后随年龄增长而分泌增加,至20岁达峰值,之后随年龄的增长而减少.DHEA-S不仅与衰老及老年病有关,还具有抗动脉硬化、抗糖尿病、抗痴呆和抗炎症作用,其抗骨质疏松作用直到上世纪末才日益受到重视.
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环氧合酶和白三烯C4合成酶在阿司匹林性哮喘患者中的基因表达
针对阿司匹林性哮喘(AIA)的发病机制,既往曾提出阿司匹林等解热镇痛药物抑制了环氧合酶(COX),阻断了花生四烯酸生成前列腺素(PG)这一代谢途径,于是花生四烯酸的另一代谢途径[经5-脂氧合酶催化生成白三烯(LT)C4]便异常活跃,使LT合成增加,进而诱发哮喘.但这一理论并不能解释为什么只有部分哮喘患者存在对阿司匹林的不耐受.本研究通过检测阿司匹林性哮喘和非阿司匹林性哮喘患者外周血中COX-1、COX-2及LTC4合成酶的基因表达水平,来对这一问题进行探讨.
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高密度脂蛋白与青少年血脂监测
分析高密度脂蛋白在检验中的作用,对于防止儿童及成人患病均有意义。当今社会,经济发展速度很快,人们生活水平明显提高以及部分人缺乏正确合理的营养学知识,使脂肪及热量摄入远远超过营养学会推荐的脂类摄入标准。多余的脂类代谢不出去,囤积在体内,大量研究表明动脉粥样硬化过程及心血管病的主要危险因素就是高脂血症。血脂水平异常是动脉粥样硬化的生化基础,是公认的心血管病危险因素之一。脂蛋白按其来源不同可分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)指的是高密度脂蛋白所携带的胆固醇,它可反映血浆中高密度脂蛋白的多少,高密度脂蛋白从细胞膜上摄取胆固醇,经卵磷脂胆固醇酰基转移酶催化而成胆固醇酯,然后再将携带的胆固醇酯转移到极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白上,因此被称为“好胆固醇”。而且高密度脂蛋白的数量不仅决定的血液中血脂代谢是否平衡,而且还起到消退或减轻动脉硬化斑块的重要作用。
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FACTT 一种新的抗原检测系统
免疫学方法检测抗原的灵敏度受到抗原浓度及抗原与所使用抗体的亲和力的限制,ELISA是目前常用的抗原检测方法,其检测极限在0.01~50 ng/ml之间.不能满足于一些低丰度蛋白或微量标本中的蛋白的检测.T7RNA聚合酶具有在体外结合T7启动子后高效转录产生RNA的功能.据此特点,美国华裔学者Zhang等发明了一种抗原检测系统(fluorescent amplification catalyzed by T7 polymerase technique FACTT),即:T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术.该技术比传统的ELISA的敏感度至少提高几个数量级.而且该方法是在等温条件下进行,所以实验具有较好的重复性而且易如操作,显示了良好的应用前景[1].
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用化学平衡移动原理建立癌症新的控制点
癌细胞的生长和代谢是通过一系列的生化反应才实现的,这些反应的绝大多数是属于酶催化下的可逆反应,无论反应过程多么复杂,它始终遵循着多体系化学平衡的基本规律,即化学平衡移动原理.
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力竭性游泳对小鼠红细胞腺苷脱氨酶及超氧化物歧化酶活性的影响
腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase,ADA)是核酸代谢中的关键酶之一,它催化腺苷脱氨形成次黄嘌呤核苷,后者在嘌呤核苷磷酸化酶催化下经磷酸化生成次黄嘌呤和1-磷酸核糖:
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泊沙康唑的合成
目的:研究和改进泊沙康唑的合成工艺.方法:以1-[1-(溴甲基)乙烯基]-2,4-二氟苯为起始原料,经酯化、还原、在脂肪酶(novozyme 435)催化下立体选择性乙酰化、碘加成、水解、对氯苯磺酰化等一系列反应得到泊沙康唑.结果:总收率27.7%.结论:本路线操作简便,收率高,适合工业化生产.
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基质金属蛋白酶及其抑制物与肿瘤转移研究进展
基质金属蛋白酶是一个大家族,因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子而得名,其家族成员具有相似的结构,一般由5个功能不同的结构域组成:①疏水信号肽序列;②前肽区,主要作用是保持酶原的稳定.当该区域被外源性酶切断后,MMPs酶原被激活;③催化活性区,有锌离子结合位点,对酶催化作用的发挥至关重要;④富含脯氨酸的铰链区;⑤羧基末端区,与酶的底物特异性有关.其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性.金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)是基质金属蛋白酶的天然抑制物.
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糖尿血红蛋白(HbA1)和果糖胺的测定
葡萄糖与体内许多蛋白质中的氨基呈无需酶催化、不可逆地以共价键结合的过程,该过程称为蛋白质非酶糖化,被糖化的蛋白称为糖化蛋白.
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黄柏酮微生物转化研究
微生物转化是指利用微生物代谢过程中产生的酶催化底物发生化学反应,又称为微生物酶法转化,可直接应用微生物,也可用从微生物中提取的酶作为催化剂.目前微生物转化已应用于多种药物如抗生素、维生素、甾体激素、氨基酸、芳基丙酸和前列腺素等的合成[1].
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有机相脂肪酶催化合成脂质体修饰物胆固醇癸二酸单烯酯
目的 在非水相中利用酶法合成胆固醇癸二酸单烯酯,并对其优合成工艺条件进行研究.方法 利用TLC、MS和NMR法对合成产物进行结构鉴定;通过正交试验对合成处方工艺进行优化.结果 佳反应条件为胆固醇与癸二酸二乙烯酯物质的量之比为1:6,Candida rugosa Lipase 10 mg/mL,异辛烷5mL,温度35℃,反应时间24 h.结论 该条件下酯化率可达95%以上.
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酶促合成3种半乳糖-胆固醇配体及其与肝靶向性的构效关系研究
目的 酶促法构建3种不同类型的半乳糖-胆固醇配体修饰的阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体,研究其在小鼠体内的药动学及组织分布特征.方法 利用脂肪酶在非水相中合成了3种不同结构的半乳糖-胆固醇配体:CHS-C8-GalNAc、CHS-C8-GAL、CHS-C8-LA;利用MS、NMR鉴定产物结构;采用薄膜分散-梯度载药法制备DOX脂质体并对其理化性质进行表征;以小鼠为实验对象,采用尾iv给药,通过比较3种配体修饰的DOX脂质体在小鼠体内的药动学与组织分布特征来阐明配体中半乳糖基的结构与去唾液酸糖蛋白受体之间的构效关系.结果 产物经MS、NMR鉴定均为目标产物,产率均>90%;采用薄膜分散-梯度载药法制备的DOX脂质体粒径<90 nm,PDI<0.1,包封率>99%,24 h渗漏率<5%,Zeta 电位接近于0;3种配体分子对肝脏亲和力大小依次为CHS-C8-GalNAc> CHS-C8-LA >CHS-C8-Ga1;肝脏对CHS-C8-GalNAc修饰的脂质体的摄取几乎完全被预注射的asialofetuin所抑制(P<0.01),而对CHS-C8-Gal及CHS-C8-LA修饰的脂质体无显著的抑制效果(P>0.05).结论 含有N-乙酰半乳糖胺基(N-acetylgalactosamine,GalNAc)为末端的配体分子能被去唾液酸糖蛋白受体高效识别,而含有D-半乳糖基(D-galactose,Gal)或乳糖醇基(lactitol,LA)为末端的配体分子易被肝枯否细胞上的半乳糖粒子受体所竞争性结合.