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膦甲酸钠治疗慢性乙型病毒性肝炎临床疗效观察
我国是乙型病毒性肝炎发病率较高的国家,受感染者高达1.2亿,目前尚缺乏有效的治疗方法,积极寻找新的有效的药物非常重要.膦甲酸是一种广谱抗病毒药,它可以抑制DNA和RNA聚合酶从而抑制反转录病毒和RNA病毒.1991年用于治疗艾滋病,近来研究发现具有抗乙型肝炎病毒的作用,为此我们从1999年10月至2000年10月用膦甲酸钠(foscarmet sodium)治疗慢性乙型肝炎32例,现将结果报告如下.
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现代分子生物学技术在食品和药品微生物检测中的应用
在我国药品、食品行业急速发展的社会形势下,食品、药品的质量与人们生命健康息息相关,然而我国当前使用的食品、药品检测手段还不够先进,因此,发展一项新的食品、药品检测技术具有现实性。本文首先详细分析了聚合酶链式反应技术的原理、应用及前景,接着简要介绍了变性梯度凝胶电泳技术、基因芯片和现代免疫技术。
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尼克酰胺对芥子气诱导的细胞毒保护作用评价
目的评价尼克酰胺(nicotinamide,NAM)对芥子气诱导的细胞毒的保护作用.芥子气(HD)是一种典型的双功能烷化剂,目前仍是外军列装的重要化学战剂之一.HD皮肤染毒后,可迅速与细胞内DNA、RNA和蛋白质等起反应形成稳定的烷化产物,至今尚无有效的治疗措施.皮肤组织是芥子气中毒的主要途径和损伤的重要部位,因此皮肤的起疱机理和防治研究一直是芥子气研究的重点.过去芥子气毒理学研究大部分都集中在DNA烷化后多聚合酶(PADPRP)的活化上.
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DNA聚合酶β对苯并[a]芘致DNA损伤修复的影响
目的 揭示聚合酶β(pol β)的表达水平与苯并[a]芘(BaP)诱导的DNA损伤效应的关系.方法 采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞pol β野生型(polβ+/+)、pol β缺陷型(pol β-/-)和野生型pol β高表达型(pol β oe)作为模型细胞.首先用RT-PcR和western bolt鉴定3种细胞中pol β在mRNA和蛋白质水平的表达情况,然后通过MTT试验和单细胞凝胶电泳(彗星试验)观察BaP作用下3种细胞的存活率及DNA损伤和修复效应.结果 3种细胞在pol β mRNA和蛋白表达水平上存在明显差异,polβ-/-细胞中pol β基因缺失,而pol β oe细胞中pol β基因则较野生型pol β+/+细胞高出2倍以上;BaP能诱导3种细胞DNA的损伤以及细胞存活率的降低;与pol β+/+细胞相比,pol β-/-细胞的IC_(50)更低,DNA损伤更严重且更加不易修复;反之,pol β oe细胞的IC_(50)更高,DNA损伤效应更弱,DNA修复速率加快.结论 pol β在修复外源性致癌物BaP导致的DNA损伤中发挥着重要的作用,pol β基因缺陷使细胞DNA修复能力降低,而pol β基因的高表迭则能帮助细胞应对DNA损伤,在一定程度上对细胞的存活起到了保护作用.
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蓝谱环介导等温扩增试剂盒(通用型)
环介导等温扩增(LAMP?)方法采用4条引物来识别目的基因上的6个特异区域,利用具有链置换特性的DNA聚合酶,在恒温(60~65?C)条件下进行扩增,15~60m i n内的扩增效率可达109~1010倍,对仪器设备要求低,水浴锅或恒温箱即可,反应结果可通过肉眼直接观察。DNA样本或RNA样本均可直接使用试剂盒进行反应。
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血管紧张素转换酶基因多态性与心肌梗死、脑梗死、肾小球肾病的关系探讨
应用聚合酶链式反应技术,扩增心肌梗死、脑梗死、肾小球肾病病人外周血血管紧张素转换酶(ACE)基因第16内含子目的片段,琼脂糖凝胶电泳确认等位基因,计算各组的基因频率,作为预测心肌梗死、脑梗死、肾小球肾病发病和预后.
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054藏药对病毒聚合酶的抑制作用
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哈萨克斯坦植物抑制DNA聚合酶的活性成分
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孤啡肽对创伤应激大鼠下丘脑组织中IL-1β mRNA水平的影响
孤啡肽(Orphanin FQ,OFQ)是1995年底新发现的神经肽,是阿片受体样受体的内源性配体.本室已往的研究结果表明侧脑室注射(icv)OFQ可阻断创伤应激介导的免疫抑制效应,本实验采用以单碱基突变模板作为内标的逆转录-聚合酶链式反应技术,观察icv OFQ对创伤应激大鼠下丘脑组织IL-1β mRNA水平的影响.
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前列回春对实验性大鼠前列腺组织PCNA表达的影响
前列回春是用于治疗慢性前列腺炎的中药复方制剂,在临床上已使用多年.据笔者临床观察,该药不仅对慢性前列腺炎有确切疗效,而且用于前列腺增生症(BPH)的治疗也有较好效果[1].迄今为止,对BPH的发病机理尚未完全阐明,而细胞凋亡在BPH的发生发展中的作用已为人们初步认识,并发现了很多相关的基因.同样,有的学者则在细胞增殖方面做了研究,如Kyprianou等[2]及邓方明等[3]研究都发现BPH的增殖活性较正常前列腺(NP)明显升高,而细胞凋亡率则较NP明显减少,认为细胞增殖增加和凋亡减少均参与了BPH的发生.增殖细胞核抗原(PCNA)作为DNA聚合酶的辅酶参与细胞增殖过程中DNA的合成[4,5],本研究用前列回春对实验性前列腺增生大鼠进行观察,通过检测大鼠前列腺组织中PCNA的表达,进而阐明其抗前列腺增生作用.现报道如下.
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RNA病毒RNA依赖的RNA聚合酶的结构与功能
RNA病毒一般传播迅速,给人类和自然造成巨大危害和威胁.许多RNA病毒的结构蛋白在基础研究和应用方面已日趋完善.相比之下,就非结构蛋白(NS)所做的研究较少,存在许多未知问题.在这些非结构蛋白中,病毒自身编码的RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)对病毒的复制起关键作用.对RdRP的研究不仅使对病毒RNA复制的机制更精细明了,且有可能提供新的抗病毒靶标和诊断试剂.本文对RdRP特别是动物RNA病毒RdRP的结果与功能作一综述.
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人乳头瘤病毒的环介导等温扩增检测法
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是引起尖锐湿疣甚至癌变的病原体.PCR技术检测病毒DNA序列具有特异、敏感等特点,但对仪器设备及检测人员技术要求较高,不适合于基层医疗单位临床实验室的常规诊断方法.环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术针对靶基因6个区域设计4条特异引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温条件下完成扩增,扩增效果可用凝胶电泳、比浊、染色等多种方法检测,具有反应时间短、肉眼可判断结果和不需要PCR仪等优点.国内外利用LAMP技术检测HPV的方法研究偶有报道[1-2],但针对HPV-6和HPV-11成功的方法研究未见文献报道.
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UvrD解旋酶通过牵动RNA聚合酶反向运动促进DNA修复
以往的研究表明,UvrD解旋酶与核苷酸的切除修复功能相关,但其机制并不明确。美国纽约大学的Epshtein等人在近期的研究中揭示了大肠杆菌UvrD解旋酶在核苷酸切除与修复中所扮演的具体角色。
大肠杆菌UvrD解旋酶与RNA聚合酶在转录延长过程相结合,利用其解旋/延长活性,强制使RNA聚合酶沿DNA链反向滑动。通过诱导RNA聚合酶的反向运动,UvrD使DNA原先被遮盖住的损伤区域暴露,从而使核苷酸切除修复的相关酶能够顺利结合到损伤区域上。实验结果表明,UvrD解旋酶是对基因完整性起到极大正面意义的转录延长因子。 -
抗菌药物新靶位
近年来,由于过度使用抗生素,特别是滥用抗生素,病原菌日益广泛的耐药性已成为药物治疗中越来越常见的问题[1].为了克服细菌的耐药性,特别是多重耐药性问题,人们需要运用新的思路去发掘新的抗生素,因此,探索新型抗菌机制已成为目前的迫切需要.本文综述了近几年发现的抗菌药物的新靶位,分别从作用于细菌(真菌)细胞壁、细胞膜、RNA 聚合酶、胞内代谢及调控等 4 方面来谈抗菌药物的新作用靶位.
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立夫特谷热的实验室早期诊断
立夫特谷热(rift valley fever,RVF)是流行于非洲次撒哈拉地区的急性病毒性人畜共患病,病原体为立夫特谷热病毒(RVFV),由节肢动物传播.RVFV属于布尼亚病毒科白蛉病毒属,基因组为单股负链RNA,由大(L)、中(M)、小(S)3个节段构成,每个节段包裹在单独的核衣壳中.L节段编码L蛋白即病毒RNA聚合酶;M节段编码包膜糖蛋白G1和G2及两个非结构蛋白;S节段则利用双义链策略编码N和NSs蛋白[1].
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dinB基因表达对大肠杆菌的作用
dinB基因编码的Pol IV是一种错误趋向性(error-prone)DNA聚合酶.利用超表达(overexpression)方法对dinB基因的生物学意义进行了初步的探索.
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以单引物同时扩增新疆出血热病毒M和S基因
克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF)的病原是经蜱传播的克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV),曾于1945年在前苏联的克里米亚半岛导致首次病例.该病在中国称新疆出血热(XHF),于1965年首次诊断于南部新疆,后在北疆及新疆以外的地区,如青海、云南等地的人群和动物中查出抗体.由于病毒的生态圈既包括蜱之间的垂直传播又包括蜱与脊椎动物(野生动物、家畜及鸟类)之间的水平传播,CCHFV现已呈世界范围分布.病毒的人-人之间的传播曾引起多次牧场散发和医院内暴发流行.CCHFV属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)内罗病毒属(Nairovirus).基因组有小(S)、中(M)、大(L)3个负链RNA片段,分别编码核蛋白(NP)、糖蛋白(GP)及RNA聚合酶(RNA-dependentpolymerase)[1,2].目前尚未见到M基因研究报道(只是在GenBank中有CCHFV原型株10200的序列).为研究M基因的结构及其编码GP的功能,本文报道一种改进的RT-PCR方法,使用单一引物准确地同时扩增出XHFV近5.4kb的M基因和约1.7kb长的S基因.
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HCV准种的结构蛋白在真核表达系统中的表达
本实验从1份HCV持续性感染者血标本中随机筛选的8个C/E1/E2克隆序列亚克隆入真核表达载体pCI-neo,并转染大肠杆菌DH5α,经氨苄青霉筛选、酶切鉴定及DNA测序,构建为插入C/E1/E2的重组质粒.将1μg重组质粒、0.36 mCi/ml H3-亮氨酸加入TNT/T7 Couple Reticulocyte Lysate Systems (含有25μl TNT Lysate、4U T7 RNA聚合酶、20μmol/L不含亮氨酸的氨基酸混合物、40U RNA酶抑制剂),总反应体积50μl.取5μl反应液进行12% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,抽干凝胶,-70℃放射自显影3 d.
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PARP在急性心肌梗死心肌细胞DNA修复与凋亡中的作用
多聚ADP核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)Polymerase,PARP]是一种DNA修复蛋白,仅存在于真核细胞中.PARP在DNA的修复中起着重要的作用,PARP被激活的始动因素是DNA单链的断裂.
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端粒酶与恶性血液病
肿瘤是一种体细胞遗传病,与遗传物质的改变密切相关,表现为细胞生长失控。因此,人们注意到遗传物质的载体—染色体在肿瘤形成中的改变。而端粒、着丝粒和DNA复制原点是染色体DNA复制的结构三要素。近年来不少学者发现人恶性肿瘤细胞的端粒酶活性不同于正常细胞,揭示端粒酶可能是一广泛的肿瘤标志,在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。1 端粒的结构和功能 早在本世纪30年代~40年代,Muller首先提出端粒这一概念,随后Mclinto研究表明,染色体的断端十分活跃而极不稳定,易同其他断端发生断断融合,形成双着丝粒染色体、环状染色体等不稳定形式的染色体。相反,染色体的末端却相当稳定,极少发生端端融合,表明染色体末端具有某种特殊结构将染色体末端封住,使之不能与其他断端融合,这种结构被称为端粒1,2]。端粒是真核细胞线状染色体末端的DNA-蛋白质复合物。端粒的结构特点:①由富含鸟嘌呤碱基G/胞嘧啶碱基C的简单串联重复序列组成,长达数kb(碱基对),人的端粒DNA重复序列为TTAGGG3];②端粒的末端并非为平端的双螺旋结构,而是由一条富含G12-16碱基的单链3'端突出[4,5]。端粒的功能:①防止DNA末端降解[6];②保证染色体的稳定性和功能。2 端粒酶的发现和功能 DNA聚合酶必须在RNA引物参与下按5'-3'方向合成DNA,当RNA引物去除后,即会在新合成的DNA链5'末端留下一个空隙,使端粒缩短,这样势必会导致端粒越来越短,DNA双螺旋结构模型的提出者之一Waston于1972年将其称为末段复制问题提了出来[7]。总之,正常情况下随着细胞的不断分裂,其端粒应该逐渐缩短。但Larson和Spangler等在四膜虫的研究中发现其端粒不见缩短,甚至有所延长,针对这一矛盾,Greider1985年撰文指出,四膜虫DNA端粒的延长不可能是常规DNA聚合酶作用的结果,一定另有原因。后来果然在四膜虫的细胞提取液中发现了一种酶的活性成份,能往富含G的合成寡核苷酸上添加重复序列TTAGGG。这种酶称为末端转移酶或端粒酶[8]。现在我们知道端粒酶是负责染色体末端(端粒)复制,是由RNA和蛋白质组成的核糖蛋白,其中的RNA成份是端粒复制的模板,因此端粒酶又是逆转录酶。人端粒其RNA成份已克隆成功,约含450个核苷酸,模板区为5'-CUAACCCUAAC-3'能指导端粒的合成[9]。端粒酶的功能:①维持端粒长度;②端粒长度、端粒酶活性与细胞生理状态(衰老、恶性生长)有关。