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肾综合征出血热疫苗柱层析方法比较
我们用几种不同柱层析系统对出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗进行纯化,建立适合出血热病毒抗原的纯化方法.
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三种人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞)纯化方法的比较研究
狂犬病是由狂犬病毒引起的人兽共患疾病,人和所有温血动物对狂犬病毒都易感.该病在全世界广泛分布,我国是高发区之一.
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肠道病毒71型2C蛋白的异源表达及纯化
目的 获得高纯度、性状均一的可溶蛋白肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)2C. 方法 截取2C蛋白的6个包含ATPase/解旋酶等核心结构域的基因片段,分别使用含有His标签和MBP促溶标签的表达载体在大肠埃希菌中进行异源表达,分子筛层析纯化2C蛋白,SDS-PAGE电泳检测表达产物和纯化蛋白. 结果 成功将EV71 2C蛋白的6个片段进行了克隆表达并纯化,获得了高纯度、性状稳定的可溶蛋白MBP-2C 91aa-256aa和MBP-2C 118aa-256aa.SDS-PAGE检测2C蛋白纯度达97%以上,分子质量与预期结果一致.纯化的2C蛋白浓度为8.8 mg/ml. 结论 91aa-256aa和118aa-256aa片段的MBP-2C截短蛋白比包含其他片段的截短蛋白性状稳定、均一,MBP标签提高了2C的6个截短蛋白的可溶性.高纯度可溶蛋白的制备为其晶体结构和功能研究奠定了基础.
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人甲状旁腺激素多肽抗体制备及纯化方法研究
人甲状旁腺激素(hPTH)是维持机体钙磷平衡等生命活动的重要激素, hPTH 1-84、1-34、1-37、44-68、54-84是人体中重要的免疫活性片段[1].HPTH 1-84的分子量为9 500,介于完全抗原和半抗原之间.由于抗hPTH 1-84抗体可测定任何具有免疫活性的hPTH片段, 因此具有重要应用价值.本研究用基因工程表达hPTH 1-84制成3种免疫原,分别免疫家兔后制备抗体,并对特异抗hPTH 1-84抗体和载体BSA抗体的效价进行比较.同时,分别用盐析、Q膜、蛋白A和免疫亲和层析纯化方法对抗hPTH 1-84抗体的纯度、活性和回收率进行研究.
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硫酸铵反抽提法在纯化β内酰胺酶中的应用
硫酸铵价廉,不易导致蛋白质变性,常用于蛋白的分离和纯化.但硫酸铵抽提的分离纯化作用较弱,主要用于蛋白的浓缩.硫酸铵反抽提是根据在硫酸铵溶液中析出的蛋白质再次溶解有较高的选择性原理而建立的纯化方法.本研究采用配对设计对硫酸铵反抽提和抽提两法在纯化超广谱β内酰胺酶(ESBL)中的作用进行了比较,旨在为临床检验科室纯化ESBL提供简便易行的方法.
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蛋白酶3抗原的提取纯化及鉴定
蛋白酶3(PR3)是抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的主要靶抗原之一,抗PR3抗体检测对韦格纳肉芽肿(WG)的诊断治疗、判断活动程度和复发具重要意义[1-3].常规方法从大量血白细胞中提取天然PR3,但血标本来源困难、纯化难度大、成本高,因其他微量自身抗原的存在限制其广泛开展.本研究用血液分离血小板后废弃的富含中性粒细胞白膜,摸索一种高纯度、高产量中性粒细胞分离及PR3抗原提取纯化方法,并为抗PR3抗体检测及相关研究提供试验基础.
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乳鼠心肌细胞培养及纯化方法的改良
目的:改良乳鼠心肌肉细胞培养的方法,提高心肌细胞的单细胞收获率、存活率及搏动率.方法:在Simpson培养法的基础上探讨一种新的改良法,并将两种方法进行比较.结果:单细胞收获率1.60×106个/心脏;分离、消化后即刻、第5日及第8日的细胞布活率分别平均为(76.08±25.48)%、(93.32±28.67)%及(91.89±26.94)%;第5日及第8日的细胞搏动率分别平均是(91.63±25.33)%及(90.69±20.61)%,上述各项指标均高于Simpson法.结论:用改良法培养乳鼠心肌细胞时,单细胞收获率高、细胞存活率、心肌细胞和非心肌细胞分离彻底、心肌细胞纯度高.
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橄榄苦苷提取工艺的专利汇总
对专利中现有的橄榄苦苷的提取工艺进行了综述,并从提取效率、成本、能耗等方面对不同方法进行了分析比较,各种方法都有其优缺点,应根据具体情况选择合适的提取方法。
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体外培养雪旺氏细胞纯化方法的探讨
本文比较了雪旺氏细胞体外培养的主要纯化方法,单纯酶消化法、阿糖胞苷抑制法、差速贴壁分离法、低浓度酶传代法、综合纯化法,以寻找有效的纯化方法.结果显示,综合纯化法获得的SCs纯度高.
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大黄素提取纯化及金丝桃素的合成研究
目的 考察大黄素的提取和纯化方法,并使用纯化的大黄素进行中药有效成分金丝桃素的合成.方法 采用95%乙醇加热回流提取大黄素;采用乙醚萃取pH值梯度碱液萃取法纯化大黄素并合成金丝桃素.结果 以大黄素为原料经催化合成了金丝桃素,利用红外、紫外等手段,对合成产品进行定性定量分析和结构表征.结论 本试验改进了金丝桃素的合成条件,缩短了合成时间,降低了合成成本,研究结果具有重要理论意义和实际应用价值.
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嗅鞘细胞的不同纯化方法及结果
培养的嗅鞘细胞的终纯度受到多种因素的影响,如嗅鞘细胞的取材来源、分离方法等等;对培养的嗅鞘细胞进行纯化可获得高纯度的嗅鞘细胞.纯化嗅鞘细胞的方法有许多种,主要有单纯差速贴壁法、免疫吸附法、化学药物抑制法、无血清饥饿法等,现在的实验研究更趋向于以上2-3种方法联合应用对嗅鞘细胞进行纯化,这些联合纯化方案主要是在采用单纯差速贴壁方法的基础上再次运用其他一种或几种方法进行嗅鞘细胞的纯化.就获取的嗅鞘细胞的终纯度而言,许多方法取得了可观的效果.但不同的纯化方法各有利弊,除了价格不同外,不同的纯化方法对嗅鞘细胞的生物活性造成不同程度的影响.因此在选择纯化方法时,应综合考虑各方面因素,根据研究目的和实际需要选择合理的方案进行纯化.本文通过查阅各数据库中与嗅鞘细胞的分离培养及纯化有关的文献和其他相关书籍,来探讨纯化嗅鞘细胞的不同方法以及这些纯化方法对嗅鞘细胞终纯度的影响.
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小鼠胰岛分离纯化方法的比较
胰岛移植已成为治疗Ⅰ型糖尿病的一种新型手段,而增加胰岛收获量,提高胰岛纯度一直是胰岛移植中面临的重要问题.足够数量、活性良好的胰岛细胞植入受体后,可逆转糖尿病的高血糖状态,并可防止严重并发症的出现[1,2].为了推进临床应用,在动物身上摸索较好的提取方法十分必要.虽然啮齿类动物胰岛分离方法早已建立,但胰岛的纯度和收获量仍不理想[3].所以本实验拟通过对几种胰岛分离、纯化方法的比较,得出一种简便、高效、实用的胰岛提取方法.
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成年大鼠嗅黏膜嗅成鞘细胞的纯化
嗅成鞘细胞(OECs)是一种独特的中枢神经胶质细胞,分布于嗅球和鼻腔嗅黏膜,可分泌多种生物活性物质,现已证明来自嗅球的OECs与来自鼻腔嗅黏膜的OECs形态学特征与免疫组织化学性质是一致的,且都具有促进中枢神经系统轴突再生的作用\[1\].目前用于移植的OECs多数取材于嗅球,由于嗅黏膜OECs在自体取材上有着方便、快捷和安全性的特点,故我们对成年大鼠鼻腔嗅黏膜的OECs进行了不同方法的纯化,经过长期摸索建立了一种简便易行、经济实惠的培养纯化方法.现将不同方法的优缺点总结如下,以期能更早的应用于临床,造福患者.
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人输卵管粘膜上皮细胞的培养、纯化及生长特性
早期胚胎的发育过程在输卵管中进行,与输卵管微环境相互作用,并按其特定的程序逐渐发生[1,2].因此,输卵管在人类生殖过程中占有重要的地位.目前,输卵管上皮细胞的形态及功能研究已成为生殖医学领域的一个研究热点[3~5],但对妊娠早期输卵管的功能的研究尚不完全[6],在体的研究又受到较大的限制,而人输卵管上皮细胞体外培养是一种理想的研究模型[7~9].本实验建立输卵管上皮细胞的培养及纯化方法,并进行形态学观察及免疫组化鉴定,为输卵管上皮细胞的功能及输卵管性疾病的研究提供良好的基础.
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大鼠背根神经节神经元原代培养中纯化方法的改良
目的:改进大鼠背根神经节神经元原代培养中的纯化方法以提高细胞纯度.方法:常规取材并酶解消化大鼠背根神经节神经元,应用牛血清白蛋白溶液对细胞进行密度梯度离心初步分离细胞,再应用差速贴壁法去除非神经元细胞,后应用阿糖胞苷进一步纯化细胞.纯化后应用显微镜观察细胞形态,采用β-tubulin Ⅲ免疫细胞化学染色方法进行纯度鉴定,应用CCK-8检测细胞活力.结果:未改良组获得纯化的背根神经节神经元的培养周期长达10 d,而改良组缩短为5d.相差显微镜可见改良组神经胶质细胞明显减少.改良组的β-tubulin Ⅲ免疫细胞化学染色阳性细胞比例显著增加,计数结果显示改良组神经元纯度达到93%,未改良组纯度仅达到68%,差异有统计学意义(P<0.05).CCK-8检测结果显示改良组的细胞活力高于未改良组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:纯化方法改良后可以在更短的培养周期内获得纯度更高、细胞活力更好的大鼠原代背根节神经元.
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柴胡总皂苷纯化方法研究
目的 以柴胡皂苷A和柴胡皂苷D含量为指标,考察柴胡总皂苷佳纯化方法.方法 采用正丁醇萃取、D-101及AB-8大孔吸附树脂法分离纯化柴胡总皂苷,采用HPLC法测定不同纯化方法所得的总皂苷中柴胡皂苷A和柴胡皂苷D的含量.结果 正丁醇萃取、D-101及AB-8大孔吸附树脂法纯化柴胡总皂苷中胡皂苷A+D的含量分别为5.93 mg/g、5.04 mg/g和10.81 mg/g,胡皂苷A+D的重量分别为26.81 mg、19.22 mg和38.70 mg.结论 在本实验所用的方法中,AB-8大孔树脂法是分离精制柴胡总皂苷的佳方法,且树脂可重复利用,具有良好的应用前景.
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马粪海胆生殖腺中多糖的纯化方法及其抗肿瘤作用研究
目的 优化马粪海胆生殖腺中多糖的纯化方法,并评价其体外对肿瘤细胞的生长抑制作用.方法 马粪海胆生殖腺经水提取、木瓜蛋白酶结合Sevage法除蛋白、透析后醇沉、干燥制得马粪海胆总多糖,总多糖应用Sephacryl S-300凝胶柱色谱分离纯化;采用苯酚-硫酸法测定多糖含量;通过噻唑蓝(MTT)法测试多糖的体外抗肿瘤作用.结果 马粪海胆生殖腺的水提液应用木瓜蛋白酶结合Sevage法除蛋白效果佳,木瓜蛋白酶佳用量为100∶6(海胆脱脂粉与酶质量比),制得总多糖的纯度达90%;总多糖及分离得到的2个多糖体外对人肝癌Bel7402细胞表现出生长抑制作用.结论 该纯化方法步骤简单、易操作,所得多糖理化性质好、易溶于水,适用于马粪海胆生殖腺多糖的纯化.
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不同纯化方法提纯囊虫抗原效果对比
目的:寻找适合实验室和大量纯化囊虫抗原的佳载体和方法.方法:应用(1)AlfGa10作为载体,常规洗涤、装柱、包被、过柱、洗涤、脱洗、透洗.(2)33%过硫酸氨纯化、透洗.(3)特异抗体致敏医用磁粉球,置含有0.85%Nacl容器内,37℃lh、洗涤、脱洗、透洗.取三种不同方式纯化的抗原,测其含量;电泳分析其纯度;检测已知囊虫和其他寄生虫病患者,了解其特异性和敏感性.结果:用AlfGa10载体纯化囊虫抗原,单次纯化量为117mg,后两种方法无限量;用AlfGa10和医用磁粉球纯化的囊虫抗原,电泳结果显示出两条清晰的蛋白带,而过硫酸氨纯化的囊虫抗原电泳结果显示出多条不清晰的蛋白带,三种不同抗原ELISA方法检测囊虫患者血清,检出低抗原量均在0.1-0.2ug/ml,用AlfGa10和医用磁粉球纯化的囊虫抗原检测囊虫和其他寄生虫患者血清,无假阳性结果,而用过硫酸氨纯化的囊虫抗原的检测结果,假阳性率较高,包虫患者假阳性率达83%.结论:应用医用磁粉球纯化蛋白,方法简便,纯度高,易于批量纯化,是一种理想的载体.
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全血基因组DNA的提取和纯化方法比较
目的探讨全血基因组DNA的快速纯化方法.方法分别采用表面活性剂裂解法、传统酚抽提法、加热法分别制备DNA,分析各种方法提取DNA的产量、纯度,以及方法本身的优缺点、费用等,同时我们进行RAPD标记实验以比较纯化的DNA在PCR上应用的效果.结果表面活性剂裂解法简单快速,其制备的DNA产率、纯度明显高于传统酚抽提法,但其完整性不如后者.加热法快速制备的全血基因组DNA作为模板虽然纯度差,但仍可用于PCB,并得到满意的检测结果.同一份标本采用不同方法提取的DNA作为模板进行的RAPD标记实验,其多重PCR产物进行分离产生的DNA图谱基本一致.结论3种全血DNA纯化方法均可满足不同的实验要求.
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吸附澄清剂在纯化中药制剂中的应用
中药水提液中常含有淀粉、多糖、蛋白质、粘液质、鞣质、色素、树脂、果胶等杂质,使制得的固体制剂服用剂量大,液体制剂(如口服液、注射剂)的澄明度不好.为克服这一弊端,制药时采用了纯化技术.传统的纯化方法为水醇法,但醇沉时中药总固体物及有效成分损失严重,难以保证制剂的有效性,药液经醇沉后,一些对免疫功能有重要作用的多糖类也全部被除去,其总固体损失至少在50%以上,甚至高达80%.且生产周期长、劳动强度大、设备要求高、产品稳定性差,因而人们力求寻找能代替醇沉的纯化方法.近年来出现了大孔树脂吸附法、吸附澄清法、超滤法、高速离心法等纯化方法,其中吸附澄清法是在中药的提取液或提取浓缩液中加入一种絮凝剂(澄清剂),通过电中和、吸附及网捕和卷扫作用,将体系中的悬浮物及胶体粒子进行去除,使体系的澄明度得以提高的一项高新技术[1].近10年来,医药工作者用蛋清、101果汁澄清剂、明胶-丹宁、ZTC-1+1澄清剂、壳聚糖(甲壳素)等吸附澄清剂用于中药制剂的纯化研究,取得了可喜的成功,预示了吸附澄清法代替醇沉法的可能性.