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碘与甲状腺的“碘碘滴滴”
生命在地球上已存在38亿年之久,自其诞生之日起就不停息地进化.从太古宙早期的单细胞生物,直到400万年前逐步演化为今天的人类,虽然生命的形态不断发生变化,但是,生命的本质却一直没有改变,其核心就是生存和繁衍.
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人类卵母细胞及植入前胚胎中印迹基因Snrpn mRNA的表达
基因印迹是指亲源依赖性单等位基因表达, 即只有一个父源性或母源性等位基因表达,印迹基因的表达不符合经典的孟德尔遗传.基因印迹正常发生于配子形成过程中,可影响胚胎形成、发育、胎儿生长及胎盘分化, 若印迹异常则导致畸型和智力障碍.在卵泡成熟和早期胚胎发育过程中,印迹基因Snrpn起着重要作用,Snrpn基因异常可导致帕德维利综合征(Prader-Willi syndrome,PWS)[1]和安吉尔曼综合征(Angelman syndrome,AS)[2]等先天性遗传病发生.本实验用单细胞巢式逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测Snrpn在人类卵母细胞生发泡(GV)、MI、MII和植入前胚胎2、4、6、8细胞的表达情况,探讨Snrpn对人类胚胎发育的影响和印迹基因的调控机制.
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1-09 间接致癌物对肝细胞DNA的损伤
目的二甲基亚硝胺(NDMA)和氯乙烯(VC)这两种间接致癌物需经肝实质性细胞(PC)活化后才具有致DNA损伤作用.为验证经肝PC活化代谢的NDMA物中间活性产物能否"传递”给肝非实质性细胞(NPC),引起后者DNA损伤.方法应用单细胞微量凝胶电泳技术对NDMA和VC的DNA损伤作用进行了研究.实验程序:(1)程序1:NPC和PC分别暴露不同浓度的NDMA或VC中,然后作DNA测试;(2)程序2:先将NPC装入透析袋中,浸没于含不同浓度NDMA或VC的PC悬液中,混合培养后,作DNA测试.结果 NDMA和VC对肝PC的DNA损伤作用具有明显的剂量-效应关系.NPC单独暴露NDMA或VC中无明显的DNA损伤作用,但NPC与PC混合培养并暴露NDMA或VC中时,均出现DNA损伤作用.结论经过PC活化代谢后的NDMA或VC的中间活性产物可进入透析袋内作用于NPC,引起后者DNA损伤.本实验结果有助于解释起源于肝内皮细胞的肝血管肉瘤的产物机制.
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单细胞五重巢式PCR检测DMD基因
目的:探索建立单细胞多重巢式PCR检测杜氏肌营养不良症(DMD)基因外显子17、19、44、45、48的技术,及应用于植入前遗传学诊断(PGD)的前景.方法:获取正常男性单个淋巴细胞和无DMD家族史的单个胚胎细胞,行DMD基因外显子17、19、44、45、48的五重巢式PCR,分析扩增成功率、假阳性率和假阴性率.结果:20个单个淋巴细胞5个外显子扩增成功率为97%(97/100)、假阳性率为4%(1/25)、假阴性率为0%(0/25),20个单个胚胎细胞5个外显子扩增成功率为80%(80/100)、假阳性率为0%(0/25).结论:本文建立的单细胞DMD基因外显子17、19、44、45、48的五重巢式PCR技术具有较高扩增成功率和特异性,应用于DMD的PGD具有现实的可能性.
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生命体的感觉功能服务于临床工作
感觉是物质的基本属性,感觉足物质运动和变化的前提,是信息传递的保证.如分子可以感觉温度和压力的变化而发生运动速度和性质的变化,原子可以感觉温度和压力的变化而发生聚变和裂变,而生命世界中更有感觉功能,感觉显得更重要,从单细胞生命体开始就有感觉功能,细胞膜上聚集了各种各样的感觉受体,感觉是生命体基本的功能,是其他功能的基础,可以讲没有感觉功能生命体就没有一切活动和功能,如:运动功能和新陈代谢功能.
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自由生活阿米巴是许多病原菌的传播媒介和贮存宿主
在自然界的水体中,包括淡水和海水.存在着许多种以细菌为食的单细胞原虫[1].例如原生动物中的三大类:鞭毛虫、肉足虫、纤毛虫,它们中都有一些专门吃细菌的种类:如波豆虫属、屋滴虫属、鼻吻滴虫属、领鞭毛虫属、阿米巴变形虫属、四膜虫属、钟虫属和旋口虫属等.在医学领域与人类疾病关系为密切者,当推阿米巴原虫属,因为它可寄生或共生多种病原体,因此亦被研究得为深入.本文就其与人类疾病传播的关系方面作一综述.
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中西医结合治疗骨髓增生异常综合征研究
骨髓增生异常综合征(MDS)是一类克隆性病变综合征.法、美、英协作组(FAB)1982年将MDS分类为难治性贫血(RA)、环形铁粒幼细胞性难治性贫血(RARS)、难治性贫血伴有原始细胞增多(RAEB)、转变中的RAEB(RAEB-t)、慢性粒-单细胞白血病(CMML).WHO 2000年MDS新分类为红系RA、多系RA,红系RARS、多系RARS,RAEBⅠ、RAEBⅡ,5q-综合征.MDS又可分为原发性MDS和继发性MDS,继发性MDS有化疗、放疗、细胞毒(BMT)或接触毒物史,染色体改变多为多个染色体改变;原发性MDS多为单个染色体改变.MDS染色体改变以缺失多见,由于病因、病机的异质性,治疗方法也不同,疗效均不满意.
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利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达
目的 建立一组灵敏的检测时钟基因(clock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况.方法 培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系.利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况.结果 确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数.证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子.利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整.结论 巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整.时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用.
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小鼠合子对常用人体外受精培养液敏感性较高
培养液的质量在体外受精(in vitro fertilization IVF)、胚胎培养过程中至关重要,检测培养液和实验用品中是否存在胚胎毒性物质是确保IVF成功的关键.小鼠2-细胞期胚胎培养实验是人类IVF实验室用于检测培养液质量的方法之一,其结果能较好地反映培养液的优劣,而单细胞期合子胚胎培养实验是对IVF使用培养液进行质量检测的一种更灵敏的方法.与2-细胞期比较,小鼠合子有更严格的生长条件.本实验分别使用小鼠2-细胞期胚胎和合子胚胎培养对IVF不同批号培养液进行质量检测,并对实验结果进行比较分析,为更好地选用实验室培养液质控方法提供参考.
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2.122豚鼠结肠平滑肌细胞L型钙通道特性研究
目的全细胞式膜片钳技术研究豚鼠结肠平滑肌细胞的L型钙通道特性,以加深对胃肠动力调控的认识及有利于胃肠动力药物的开发.方法豚鼠,200~400g,木瓜蛋白酶酶消化法分离结肠纵肌细胞.全细胞膜片钳法记录单细胞的钙通道电流.
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生物体研究的新方向--细胞外基质和细胞粘附因子
多年来细胞一直是生物界的研究重点.而近年来研究者们开始关注将细胞连在一起的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)[1~5],并提出单细胞动物的进化论虽未统一,但进化中ECM是必不可少的论点却是一致的.
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常用基因表达系统的特点及其在寄生虫抗原制备中的应用
寄生虫病仍然是威胁人类健康的重要疾病.与细菌及病毒不同,大多数寄生虫为多细胞生物,其抗原成分复杂,抗原结构随着寄生虫的生长发育而不断变化.即使是单细胞寄生虫如原虫,抗原结构也随着虫期的转换而发生变异.由于寄生虫抗原构成的复杂性、多变性及大多数寄生虫尚未建立人工体外培养技术,通过基因工程技术大量制备寄生虫重组抗原对寄生虫病的诊断与防治就显得尤为重要.如何根据基因表达系统的特点选择合适的体系获得高效表达,是研究中常常面临的重要问题.
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弓形虫分子水平研究进展
弓形虫和其它顶复亚门原虫不同,生活史复杂,宿主类型多,组织寄生性广泛,病程长而隐匿,确诊十分不易.弓形虫对全世界的畜牧业造成很大的经济损失,也给人类健康带来了严重威胁.生物大分子研究新方法的建立和水平的逐渐提高,使人们从分子水平上对这种专性细胞内寄生的单细胞原虫的认识越来越深入,特别是在一些热点问题上不断有新进展.
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蚂蚁与人类寄生虫病
寄生虫病的许多病原,包括许多单细胞原虫类、全部吸虫类、绦虫类及一些线虫类,它们全程生活史中除有成虫期寄生的终期宿主(Final host)外,还需要有中间宿主(Intermediate host)供幼虫期寄生和发育,有的种类其幼虫期还需要到第二中间宿主(Secondary intermediate host)体内继续发育才能成熟达到可感染终宿主的阶段.
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光寻址单细胞传感器的设计及药物检测的研究
本研究提出了一种基于光寻址电位传感器(Light-Addressable Potentiometric Sensor,LAPS)的新型单细胞传感器.该传感器可以通过移动激发对作为敏感元件的单个细胞进行寻址测量,克服了基于场效应管和微电极阵列的细胞传感器中测量位点固定、细胞定位培养困难等缺欠,探索了这种光寻址单细胞传感器的结构设计和检测活细胞电生理特性的可行性.后分析了该传感器在药物检测方面的应用.实验结果表明了该细胞传感器在单细胞电生理研究和药物分析中是可行的.
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单个人造血干细胞体外培养体系用于小分子化合物筛选
目的:探索一种高效且稳定验证小分子化合物对人造血干细胞(hHSC)调控作用的体系和方法.方法:用流式细胞术结合目前对hHSC表面标记的研究,优化hHSC分选过程,将干细胞培养精确至单个细胞水平,进而研究小分子化合物对细胞干性的影响.用已发表的对人HSC有扩增作用的小分子化合物SR1及UM171处理单个hHSC,14 d后进行细胞表型流式细胞术检测以及细胞涂片观察形态,同时利用CFC和CAFC验证培养后细胞造血功能的变化.结果:多细胞培养中2种小分子化合物及其组合作用与已知研究相符,并由此获得化合物使用浓度.多参数单细胞分选(CD34+ CD38-CD45RA-CD90+ CD49f+)及体外培养结果与多细胞培养结果一致,细胞形态分析结果与流式细胞术检测结果一致.此外,CFC和CAFC体外造血功能实验中,处理组细胞集落形成能力显著高于对照组(P<0.05).结论:建立了一个周期短且扩增作用稳定的单个hHSC体外培养体系和验证小分子化合物作用的方法,为小分子化合物筛选建立了可靠的平台并为以后的hHSC扩增研究打下基础.
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激光捕获单细胞PCR在细胞克隆性起源研究中的应用
关于普通腺癌伴神经内分泌(neuroendocrine,NE)分化的发生机制存在许多不同的假说.目前多数认为NE细胞和上皮细胞均来源于内胚层多潜能干细胞[1].
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单细胞测序研究淋巴细胞免疫球蛋白基因重排
淋巴结生发中心的研究有其特殊性,即细胞组成相当复杂,采用常规的全组织研究往往不能针对所需要的细胞。1993年Hansmann等[1]建立了一种从组织切片上提取单个淋巴细胞并进行聚合酶链反应(PCR)的研究方法。该方法的大优点在于能够针对所需细胞进行相应的分子生物学研究,主要被应用于霍奇金病中R-S细胞的起源研究[2]。近,该技术又有了进一步的发展,即出现了单个细胞的DNA测序技术。应用该技术能够获得有关体细胞超突变、克隆相关性,克隆内差异(interclonal diversity)和延续性突变(ongoing mutation)的信息。我们对1例滤泡反应性增生性淋巴结进行了单个细胞PCR和单细胞测序研究,以探讨这些技术在淋巴结研究中的价值。
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对ELISPOT室间质控及其检测样品要求的初步探讨
目前检测细胞免疫常用的方法是ELISPOT方法,ELISPOT方法结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术,能够在特异性细胞免疫应答过程中检测产生细胞因子的细胞数目,在单细胞水平分析细胞因子的分泌情况,具有灵敏度高、操作简便以及可检测活细胞功能等优点[1].
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神经干单细胞获得的一种方法
目的 寻找一种有效获得神经干细胞单细胞的方法.方法 运用胰蛋白酶,EDTA和不同浓度酵素对人胚神经干细胞球进行消化,免疫细胞化学染色鉴定及其分化.结果 运用一定浓度的酵素可以获得大量成活的单个神经干细胞.而运用胰蛋白酶,EDTA消化后成活细胞少.结论 运用一定浓度的diapase消化神经干细胞球是可获得大量成活的神经干细胞单个细胞的方法.