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从单个细胞扩增靶基因片段的技术
目的建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术.方法利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞,各置于0.2 ml簿壁反应管的裂解液中,合成针对抑癌基因P53第5~9外显子(e)的引物,运用15mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应(PCR)扩增P53基因第e5~9的1 900 bp片段及含第5,6外显子的580 bp片段.并用ABI-377测序仪测定其序列.结果运用稀释至0.01 ng的基因组DNA扩增1 900 bp片段,优化PCR的条件.分别从30个单个纤维母细胞扩增上述1 900 bp片段,10个获得1 900 bp片段,成功率为33%.扩增580 bp片段,则阳性率可达60%.序列分析证明确为人P53基因第5,6外显子序列.结论运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段,并测定其序列,作出基因诊断.
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微量免疫荧光法检测mimivirus抗体的方法学建立
Mimivirus是2003年被发现的一种新的双链DNA病毒,寄生在水生单细胞动物阿米巴变形虫中.因其体积巨大,专家们初认为发现了一种细菌,因此将其命名为Mimivirus("酷似细菌的病毒")[1].在医院获得性肺炎患者的支气管肺泡灌洗液中已发现Mimivirus DNA,推测该病毒可能会导致人肺部疾病[2].国内目前尚鲜见Mimivirus检测方法的报道,为探讨Mimivirus与人体肺病的关系,亟待建立一种Mimivirus血清学检测方法.
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肺泡灌洗液内发现蠊缨滴虫一例
蠊缨滴虫寄生于白蚁、蟑螂肠道内,属于超鞭毛目,缨滴虫砸目,缨滴虫属的单细胞原虫,属于非人畜共患的动物寄生虫.
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T型钙通道阻断剂对肥厚心肌L型钙通道电流及单细胞mRNA表达的影响
钙通道阻断剂咪拉地尔对T型钙通道有较高的选择性,在整体模型中对L型钙通道的作用尚不明确.本研究联合运用膜片钳技术及单细胞RT-PCR方法,研究二肾一夹肥厚心肌L型钙通道电流及mRNA表达以及药物的影响.
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胚胎单个卵裂球人类白细胞抗原基因的检测及意义
单细胞PCR技术用于胚胎植入前单基因遗传疾病的诊断已经取得成功,并且应用于对单个卵裂球人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)基因的检测[1,2].本研究探讨单个卵裂球HLA基因的检测方法及意义.
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卡氏肺孢子虫肺炎研究进展
卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)是真核单细胞生物,现在认为它是一种真菌,而不是寄生虫.它广泛存在于人和其他哺乳动物的肺组织内,健康人受感染多为隐性感染,当宿主免疫力低下时,处于潜伏状态的病原体即进行大量增殖,并在肺组织内扩散导致间质性浆细胞性肺炎,即卡氏肺孢子虫肺炎(Pnoumocystis carinii pneumonia, PCP ) .
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多食海洋蔬菜
所谓海洋蔬菜,植物学上称之为海藻.它是生长在海洋里的低等植物,它不象高等植物那样有根、茎、叶的分化,更不会开花结果.海藻个体为单细胞,群体为多细胞,所以一般形状都很怪异.现已知有70多种可供人类食用,如海带、紫菜、石莼、裙带菜、鹿角菜等等.由于它们营养丰富和含有多种特异成分,近世以来被人们奉为餐桌上的健康食品,尤其对防癌抗癌有不可低估的作用.
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单细胞水平分析中耳粘膜免疫
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细胞的密度感应现象与生态信息传递
生物膜内的细菌之间通过复杂的信号传递系统进行着信息交流。细菌的密度感应现象(quorum sensing)是这一信号系统的重要组成部分,细菌通过释放,发现接受信号分子向其他个体表明它的存在而实现这一信息交流途径。细菌的密度感应现象使真核生物与原核生物之间的界限变得模糊,使细菌这一单细胞生物可以像多细胞生物一样拥有许多作为个体细胞生命所不可能拥有的特性,细菌的许多行为都受到密度感应机制的调控。随着对密度感应现象研究的深入,研究者们发现密度感应AI-2系统的编码基因luxS被证实为高度保守并广泛存在于革兰氏阳性及阴性细菌中,因此认为可能存在着种属间的密度感应调控。
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球形细胞和椭球形红细胞在极低频电磁场中的微剂量计算
目的:计算极低频电磁场中球形细胞和椭球形红细胞( RBC)的电场强度和跨膜电压,为极低频电磁场与生物体相互作用靶点和机制的探寻提供参考依据。方法针对球形细胞模型和椭球形RBC模型,利用有限元法进行数值计算。结果两种细胞模型细胞膜电场强度大值均明显高于外加电场强度,且细胞膜电场强度和跨膜电压随电场方向成周期性变化。结论较之细胞电磁参数,细胞形状及外电场方向对细胞膜电场强度和跨膜电压的影响并不大,细胞膜电场强度和跨膜电压的分布与外加电场方向有关。
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真菌及致病性真菌浅议
1 真菌真菌是指具有真正的细胞核,产生孢子和不含叶绿素,以寄生或腐生等方式吸取碳源、能源和其他营养物质,一般都有分支或不分支的丝状体,仅少数类群为单细胞(酵母菌和类酵母菌),能进行有性和(或)无性繁殖,具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体.
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阿柔比星与米托蒽醌联合应用对HeLa细胞凋亡及拓扑异构酶Ⅱ表达的影响
目的探讨拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)催化抑制剂阿柔比星(ACR)对TopoⅡ毒性抑制剂米托蒽醌(MIT)杀伤HeLa细胞的影响.方法应用MTT方法检测药物单用和联合应用对HeLa细胞的抑制作用;采用单细胞凝胶电泳方法检测药物对DNA链断裂的影响;双荧光方法检测细胞凋亡率;免疫细胞化学方法观察TopoⅡ表达变化.结果 MTT法检测表明,ACR能够减低MIT对HeLa细胞的抑制作用.单细胞凝胶电泳显示,MIT 在1,10,100 nmol·L-1浓度作用下,细胞DNA断裂长度分别为(3.0±0.3),(6.8±0.4),(10.8±1.0)μm.上述浓度MIT与0.2 μmol·L-1的ACR共同作用后,DNA断裂长度依次减低为(1.0±0.3),(3.9±0.4),(6.1±0.3)μm.两者相比差别明显(P<0.01).细胞凋亡检测表明,MIT在1,10,100 nmol·L-1浓度作用下,细胞凋亡分别为(9.9±1.7)%,(55.4±3.9)%,(98.0±7.1)%.上述浓度MIT与0.2 μmol·L-1的ACR共同作用后细胞凋亡依次降低为(3.9±0.3)%,(25.5±3.5)%,(79.2±5.3)%.两者相比差别明显(P<0.01).进一步采用免疫组织化学方法检测表明,ACR与MIT合用组较MIT单用组TopoⅡ的表达显著减少.结论 ACR可拮抗MIT对HeLa细胞的杀伤作用.
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反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
目的 建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nested reverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系.方法 选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对.以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度.体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度.使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因.应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较.结果 巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA.反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板.利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义.结论 建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异.
关键词: 反转录巢式多重聚合酶链式反应 时钟基因 单细胞 NIH/3T3 -
群体感应系统在病原菌中的作用
长久以来,人们一直认为细胞与细胞间的信息交流一般只在多细胞生物中发生.20世纪90年代以来,大量的研究工作表明,单细胞的细菌中普遍存在着细菌与细菌之间的信息交流,并介导着一系列生理行为的调节.这种信息交流就是细菌的群体感应.
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群体感应系统在病原菌中的作用
长久以来,人们一直认为细胞与细胞间的信息交流一般只在多细胞生物中发生.20世纪90年代以来,大量的研究工作表明,单细胞的细菌中普遍存在着细菌与细菌之间的信息交流,并介导着一系列生理行为的调节.这种信息交流就是细菌的群体感应.
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乳鼠窦房结细胞分离纯化及鉴定研究进展
窦房结(sinoatrial node,SAN)是心脏的正常起搏点,是心脏传导系统的重要组成部分,正常的窦房结功能是心脏泵功能得以实现的先决条件.对窦房结进行基础研究,尤其从细胞水平进行研究,可进一步了解窦房结功能损伤的机制,为治疗提供更好的手段.在初SAN形态与功能的研究中,所用材料主要是在体组织、立体小标本及微小标本,相继有细胞团或单细胞,窦房结细胞数量有限,也不能传代,且传代后细胞活力大大减弱[1].在对窦房结单细胞作直接电生理和药理学研究时,体外培养的窦房结单细胞被认为是较前述更为理想的材料.
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孕期生殖道感染对母婴影响
●念珠菌外阴阴道炎 念珠菌为革兰阳性单细胞真菌,为条件致病菌.10%~20%正常妇女阴道内有少量念珠菌寄生,妊娠后可增加到20%~30%.70%妇女一生中至少患过一次念珠菌性阴道炎,40%~50%妇女在5年内感染过1~2次.5%~10%妇女患有复发性念珠菌性外阴阴道炎.妊娠期妇女感染为9.4%~18.5%,其中80%~90%由致病力强和多见的白色念珠菌引起.
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心肌细胞培养进展
细胞培养(cell culture)是细胞,包括单细胞在体外条件下的生长.它在分子生物学、生物工程、生物制品、药物开发、临床各方面应用极广,如今已成为生物学、医学与药学研中有成效的方法之一.心肌细胞(cardiomyocyte)占心肌组织总细胞数的60%,占重量的90%以上[1].心肌细胞培养(cardiomyocytes culture)已成为心血管研究的基本方法和手段之一,在医学上有着广阔的应用前景.本文将有关心肌细胞培养的文献综述如下.
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乳鼠心肌细胞培养及纯化方法的改良
目的:改良乳鼠心肌肉细胞培养的方法,提高心肌细胞的单细胞收获率、存活率及搏动率.方法:在Simpson培养法的基础上探讨一种新的改良法,并将两种方法进行比较.结果:单细胞收获率1.60×106个/心脏;分离、消化后即刻、第5日及第8日的细胞布活率分别平均为(76.08±25.48)%、(93.32±28.67)%及(91.89±26.94)%;第5日及第8日的细胞搏动率分别平均是(91.63±25.33)%及(90.69±20.61)%,上述各项指标均高于Simpson法.结论:用改良法培养乳鼠心肌细胞时,单细胞收获率高、细胞存活率、心肌细胞和非心肌细胞分离彻底、心肌细胞纯度高.
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流式细胞术在临床检验中的应用
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是近代细胞生物学、分子生物学、分子免疫学、流体力学、激光技术、电子计算机技术等高度结合和发展的结晶,是一种在功能水平上对单细胞或其他细胞粒子、抗原物质进行快速检测分析和分选的技术[1].FCM结合现代单克隆抗体技术,可同时鉴别单个细胞上的多种参数定量定性分析,具有速度快、精度高、准确性好等特点.使用FCM能够快速分析单个细胞或粒子的多种特性,既可以定性也可以定量,尤其适用于大量样品检测,已在临床检验工作中得到广泛应用.