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柴胡皂苷A诱导鼻咽癌细胞凋亡及其机制研究
目的：初步研究不同浓度的柴胡皂苷A( saikosaponin A, SSA)对鼻咽癌细胞凋亡诱导作用及其机制。方法体外常规培养人鼻咽癌5-8F细胞,将 SSA溶解于含0.2％二甲基亚砜( dimethyl sulfoxide, DMSO)的Dulbecco改良Eagle培养基( dulbecco＇s modified eagle medium, DMEM)高糖培养基中,分别以0(对照组)、5、10和20μmol/L SSA作用于鼻咽癌细胞48小时,之后用免疫印迹法检测不同浓度的SSA对鼻咽癌细胞总的细胞外调节蛋白激酶( total extrallular signal regulated protein kinase, t-ERK)及磷酸化的细胞外调节蛋白激酶( phosphorylated extrallular signal regulated pro-tein kinase, p-ERK)蛋白表达量的影响,并通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平的变化。结果与对照组相比,10~20μmol/L SSA作用48小时,鼻咽癌细胞中ERK蛋白磷酸化水平明显降低,差异有统计学意义；而与对照组相比,10~20μmol/L SSA处理的鼻咽癌细胞凋亡细胞数明显增加,差异有统计学意义,且随着SSA浓度的增加,凋亡细胞数也相应增多。结论一定浓度的SSA可引起鼻咽癌细胞凋亡率的上升,其机制可能与抑制ERK蛋白磷酸化表达有关。
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柴胡皂苷a对难治性癫痫大鼠多药耐药蛋白P-糖蛋白表达的影响
目的:研究柴胡皂苷a(SSa)对氯化锂-匹鲁卡品致难治性癫痫模型大鼠多药耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:将制备成功的30只SD难治性癫痫大鼠随机分为5组,丙戊酸钠(VPA)组以VPA 200 mg·kg-1灌胃给药,SSa低、中、高剂量组分别ip SSa 0.54,1.09,2.18 mg·kg-1,空白对照组(A)和模型组(B)均等容积生理盐水ig,各组连续给药8周后用Western blotting检测各组大鼠海马、颞叶皮层P-gp的表达.结果:在大鼠海马、颞叶皮层,各组P-gp的表达,差异有统计学意义(P ＜0.001).与空白对照组相比,其余各组P-gp表达水平明显增强(P＜0.05)；与模型组相比,VPA 200 mg·kg-组表达水平增加(P＜0.05),SSa 3个剂量组表达水平降低,以SSa高剂量组明显(P＜0.05).结论:SSa低、中、高剂量均可降低大鼠颞叶皮层、海马区P-gp的表达,其效果成剂量依赖性,以高剂量组效果明显.
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黑柴胡质量标准
目的:修订和提高黑柴胡药材的质量标准.方法:采用生药学研究考察不同黑柴胡药材的横切面显微特征和粉末特征,依据2010年版《中国药典》附录药品标准研究方法对10批黑柴胡药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物进行检查,并测定活性成分含量.结果:修订了黑柴胡药材的性状特征和显微特征;建立了TLC鉴别黑柴胡的方法;黑柴胡的水分限度≤10.0％,总灰分≤9.0％,酸不溶性灰分≤3.1％,浸出物的含量≥15％,柴胡皂苷a和d的总质量分数≥0.2％.结论:完善了黑柴胡药材的质量标准,可作为该药材的修订内容.
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生长期不同施肥方法对柴胡中柴胡皂苷a、d含量的影响
目的:通过采用HPLC-ELSD法测定不同施肥柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,为优选施肥方案提供一定的依据.方法:采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Agilent TC-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,以水-乙腈(50:50)为流动相,检测器为蒸发光散射检测器,飘移管温度93℃;空气流速2.5 L·min-1;柱温20℃.结果:确定了柴胡的施肥方案.结论:此方法简单、准确、重复性好,通过柴胡皂苷a、d的变化为优选柴胡施肥方法提供依据.
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竹叶柴胡根中皂苷类成分的薄层鉴别及含量测定
目的:研究竹叶柴胡根中的皂苷类成分,为其入药提供科学依据.方法:采用薄层色谱法对皂苷类成分进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法首次对竹叶柴胡根中皂苷类成分进行含量测定,用C18(4.60 mm× 150 mm,5μm)柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长210 nm,流速0.8 mL·min-1,柱温35℃,进样量10 μL.结果:竹叶柴胡根中含有皂苷类成分.柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为440～8 800 ng(r=0.999 7),488 ～9 760 ng(r =0.999 2)线性关系良好,平均加样回收率(n=6)分别为99.88％(RSD 0.41％),100.23％(RSD 0.46％).样品中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的总量在0.48％～1.08％.结论:竹叶柴胡全草入药具有其科学性.
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艾可胶囊的澄清工艺优选
目的:优选壳聚糖用于澄清艾可胶囊提取液的工艺.方法:以芍药苷、柴胡皂苷a的含量和浸膏得率为综合评价指标,选择药液比、壳聚糖加入量、搅拌温度、搅拌时间为考察因素,采用正交试验优选艾可胶囊的澄清工艺.结果:艾可胶囊提取液的佳澄清工艺为药液比1:5,搅拌时间10 min,温度60℃,每100 mL药液加入壳聚糖14 mL.结论:优选的工艺芍药苷、柴胡皂苷a的提取率高、稳定性好、成本低,适合于艾可胶囊的临床开发.
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柴胡疏肝散不同配伍对柴胡皂苷a溶出量的影响
目的:研究柴胡疏肝散不同配伍对柴胡皂苷a溶出量的影响.方法:采用L8(27)正交设计法,以HPLC-DAD测定各配伍样品中柴胡皂苷a的含量,并对数据进行单因素方差分析.结果:正交设计各因素对柴胡皂苷a溶出率的影响大小为使药＞佐药＞臣药.单因素对其影响均有显著性差异,交互作用无显著性差异.4组分法中,各组间均有显著性差异.不同药味数分组中,各大组之内不同配伍柴胡皂苷a溶出率不同,各组间溶出率:复方＞五五配伍＞单煎液＞六六配伍、两两配伍＞四四配伍＞三三配伍.结论:含有白芍、香附、川芎的配伍组中柴胡皂苷a的溶出率较低,含有枳壳和甘草配伍组中柴胡皂苷a的溶出率较高,全方组中柴胡皂苷a的溶出率高.
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樟帮特色酒润麸炒柴胡的炮制工艺优化
目的:优选樟帮酒润麸炒柴胡的炮制工艺,为这一地方特色炮制品的规范化生产及推广应用提供参考.方法:以柴胡皂苷a,d质量分数及血清胃泌素质量浓度的综合评分为指标,通过正交试验考察麦麸用量、黄酒用量、炒制温度、炒制时间对柴胡酒润麸炒工艺的影响.采用HPLC测定柴胡皂苷a,d含量,流动相乙腈-水(35:65),检测波长210 nm.采用三因素复合法复制脾气虚大鼠模型,给药14 d后利用放射免疫法测定血清胃泌素含量.结果:酒麸柴胡的佳炮制工艺为麦麸用量15％,黄酒用量15％,炒制温度100℃,炒制时间7 min,其中黄酒用量、炒制温度、炒制时间对其炮制工艺有显著性影响.柴胡皂苷a,d质量分数及血清胃泌素质量浓度分别为0.077％,0.683％,73.56 ng·L-1.结论:优选的炮制工艺合理可行、重复性好,可为酒麸柴胡的工业化制备提供参考.
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高效液相色谱测定克郁舒神颗粒中柴胡皂苷a含量
目的:制定质量标准.方法:采用高效液相色谱法测定克郁舒神颗粒中柴胡皂苷a的含量.结果:柴胡皂苷a在0.01μg～0.1μg进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9992,平均回收率为:99.94%,RSD为2.74%.精密度试验RSD为0.03%.结论:该测定方法结果准确,重复性好,可用于克郁舒神颗粒中柴胡皂苷a的含量测定.
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HPLC法测定加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量
目的:用HPLC法测定加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量.方法:样品经甲醇超声提取,使用C18色谱柱,乙腈-水(37:63)为流动相,检测波长208 nm,流速1 mL·min-1,柱温35℃.结果:柴胡皂苷8线性范围(0.2～1.6)μm,相关系数r=0.999 8,平均回收率99.9%.结论:样品处理方法合理,方法学考察符合定量要求,结果准确,可用于加味四逆颗粒中柴胡皂苷a的含量测定.
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HPLC法测定小柴胡汤滴丸中柴胡皂苷A的含量
目的:用HPLC法测定小柴胡汤滴丸中柴胡皂苷A的含量.方法:样品经氯仿提取后,微碱性提取液通过D101大孔吸附树脂吸附,乙醇洗脱,HPLC法测定乙醇洗脱液中柴胡皂苷A,使用C18柱,乙腈-水(37:63)为流动相,检测波长为208nm.结果:柴胡皂苷A线性范围1.06～9.58μg,相关系数0.9997,平均加样回收率99.2%.结论:样品处理合理,方法学考察符合定量要求,结果准确,可用于小柴胡汤滴丸中的柴胡皂苷A的含量测定.
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多指标正交试验优选鳖血柴胡的炮制工艺
目的:优选鳖血柴胡的炮制工艺.方法:以柴胡皂苷a,c,d及醇溶性浸出物含量的综合评分为指标,通过正交试验考察炮制时间、鳖血用量、炮制温度对鳖血柴胡炮制工艺的影响.采用HPLC测定柴胡皂苷a,c,d的含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0 ～ 50 min,25％ ～90％ A;50 ～55 min,90％A),检测波长210 nm.结果:炒制时间对炮制工艺具有显著性影响.佳炮制工艺为150℃炮制10 min,加鳖血量0.05 mL·g-1.醇溶性浸出物及柴胡皂苷a,c,d质量分数分别为12.42％,0.85％,0.23％,0.90％.结论:优选的炮制工艺合理可靠、重复性好,为规范鳖血柴胡饮片的炮制加工提供参考.
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柴胡皂苷a对PTZ诱导大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及其受体表达的影响
目的:探讨柴胡皂苷a (SSa)对戊四氮(PTZ)诱导体外培养的大鼠海马星形胶质细胞肿瘤坏死因子-α (TNF-α)释放及其受体表达的影响.方法:将体外原代培养的大鼠海马星形胶质细胞随机分为对照组(A组)、PTZ 10mmol/L诱导组(B组)、PTZ 1ommol/L加SSa不同剂量干预组(C组、D组,SSa分别为1.25mg/L、0.625mg/L),PTZ诱导2h后运用ELISA法检测细胞外液TNF-α水平、Western-blot法检测星形胶质细胞TNF受体1 (TNFR1)表达水平.结果:含PTZ 10mmol/L的B组TNF-α水平、TNFR1表达均显著高于A组、C组和D组(P<0.01).结论:PTZ可以诱导体外培养大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及TNFR1的高表达;SSa可以抑制Prz诱导星形胶质细胞TNF-α释放及TNFR1的高表达,这可能是其抗癫痫的作用机制之一.
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栽培与野生北柴胡质量比较分析
目的 以河北承德地区栽培的北柴胡和北京昌平地区野生的北柴胡为样本,探讨北柴胡栽培品与野生品的质量差异以及北柴胡适宜的采收期.方法 主要以柴胡皂苷a、d的含量以及北柴胡醇溶性浸出物为指标,采用高效液相色谱法为分析方法.结果 所有样品醇溶性浸出物及柴胡皂苷a、d总含量均符合2015年版《中国药典》的要求.醇溶性浸出物在春季野生北柴胡中含量高,与栽培品差异不大.柴胡皂苷a及柴胡皂苷d在春季栽培北柴胡中均含量高.栽培品与野生品中柴胡皂苷a、d的含量,春季采收品均高于秋季采收品.结论 野生北柴胡与栽培北柴胡柴胡皂苷a、d含量差异较大,栽培品含量显著高于野生品以及药典要求,可替代野生北柴胡使用.建议在春季对北柴胡进行采收.
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反相高效液相色谱法测定安乐片中柴胡皂苷a含量
目的 建立安乐片中柴胡皂苷a的含量测定方法.方法 色谱柱:kromasil C18柱:流动相乙腈-水(55:45);检测波长:210mm;流速:1.0ml·min-1.结果 柴胡皂苷a线性范围为24.28～194.24μg·ml-1,相关系数r为0.9997,回收率为99.15%,RSD为1.67%.结论 本方法简便、可靠、重现性较好,能起到控制安乐片中柴胡皂苷a含量的作用.
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锌硼钼配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响
采用“3414”肥料效应试验方案,对北柴胡进行不同配比的锌硼钼配施处理,通过测定北柴胡干物质积累量和柴胡皂苷a,d含量动态变化以及北柴胡产量,考察不同浓度的锌(Zn)硼(B)钼(Mo)配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响.结果发现适宜配比的锌硼钼配施对北柴胡干物质积累及分配有积极的调节作用,处理Zn2B2Mo3不仅能促进干物质积累,还利于干物质有效地向地下部分转移;一定范围内,单施Zn,Mo肥均能够增加北柴胡根部的产量,处理Zn2B2Mo1的产量为所有处理中的大值.回归分析结果表明:适当调整微肥配施,按Zn48.45g· hm-2,B 355.05g·hm-2,Mo86.40g·hm-2的配方,北柴胡能够获得3 313.05 kg·hm-2的产量;处理Zn2B3Mo2的锌硼钼配比有利于北柴胡根部柴胡皂苷a,d总量的增加,回归分析结果表明:佳微肥施肥量为Zn36.15g·hm-2,B 343.05g·hm-2,Mo106.35g·hm-2,此配方下,柴胡皂苷a,d总量能够达到1.23％.该研究首次发现适宜配比的锌硼钼配施能够提高北柴胡的根部产量,并能够促进柴胡皂苷a,d的积累.
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柴胡皂苷对芍药苷在Caco-2细胞模型中吸收转运的影响
目的:研究柴胡皂苷a,d对芍药苷在Caco-2细胞模型中转运的影响.方法:用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数,比较不同浓度芍药苷溶液、及芍药苷配伍柴胡皂苷a,d后在Caco-2细胞模型中双向转运的差别；电阻仪测定电阻,比较试验前后细胞电阻的差异.结果:芍药苷通过Caco-2细胞单层的转运量4h内随时间延长呈线性增大,其吸收渗透系数较小,浓度为20,50,100 μmol·L-1时,吸收渗透系数分别为(0.98±0.10)×10-6,(0.92±0.09) ×10-6,(0.89±0.04)×10-6 cm·s-1；芍药苷与柴胡皂苷a,d配伍后,吸收渗透系数与单体比较分别增加了2.37,2.54倍,且试验后细胞电阻有显著降低.结论:柴胡皂苷a,d能促进芍药苷的肠道吸收,可能与柴胡皂苷能打开Caco-2细胞间的紧密连接有关.
关键词： 芍药苷 柴胡皂苷A 柴胡皂苷d Caco-2细胞单层模型 -
人外周血单核细胞分化为树突状细胞过程中核转录因子-κB p50的表达及柴胡皂苷a的影响
目的 观察人外周血单核细胞分化为树突状细胞(DC)过程中,核转录因子-κB p50(NF-κB p50)的表达以及柴胡皂苷a对单核细胞分化为树突状细胞的影响.方法 非连续密度梯度离心获取人外周血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、柴胡皂苷组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD14、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC;动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-κB p50的表达,并进行图像分析.结果 CD14、CD83、HLA-DR、S-100免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征.在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和TNF-a的RPMI-1640培养液继续培养3d时,imDC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-κB p50表达具有显著性差异(P<0.05).单纯用只含柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-κB p50阳性,但未见其分化为DC.若用含GM-CSF、IL-4和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入TNF-α后继续培养3d,imDC的细胞核呈NF-κB p50强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为mDC.联合培养组细胞的表型表达均强于只加细胞因子组(P<0.05).结论 人外周血单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-κB p50表达逐渐增强.单纯用低浓度柴胡皂苷a不能刺激单核细胞分化为DC,但联合细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α培养时,可使其分化为imDC和mDC.
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柴胡皂苷A对脑损伤大鼠认知功能的干预及机理研究
目的 探讨柴胡皂苷A对脑损伤大鼠认知功能的干预及机制.方法 30只SD大鼠经颅脑撞击建立中度皮层损伤模型后随机分为模型组和实验组,各15只,分别灌胃柴胡皂苷A 5 mg·kg-1和等量生理盐水;另外10只为假手术组不进行颅脑撞击,灌胃等量生理盐水,各组均连续干预14 d.评估大鼠脑损伤后的神经功能,Morris水迷宫系统测定大鼠认知功能,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠海马组织白介素-1β(IL-1β)及脑源性神经生长因子(BDNF)含量,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织Janus激酶(JAK)/信号转导转录激活因子3(STAT3)通路蛋白表达.结果 实验组脑损伤后神经功能评分均高于模型组,且随脑损伤后时间的延长神经功能评分呈逐渐升高趋势(P<0.05).假手术组、模型组及实验组穿台次数为(14.05±3.46),(7.43±2.87),(10.41±3.32)次,与模型组比较,实验组大鼠逃避潜伏期缩短,穿台次数增多(P<0.05).假手术组、模型组和实验组的BDNF含量为(712.51±12.63),(326.45±10.54),(621.48±16.52)pg·mg-1;IL-1β分别为(1.56±0.23),(3.84±0.25),(1.93±0.26)pg·mg-1,差异均有统计学意义(均P<0.05).假手术组、模型组及实验组海马组织JAK蛋白相对表达量为0.71±0.12,1.87±0.35,0.96±0.22,STAT3蛋白相对表达量为0.36±0.04,0.98±0.12,0.51±0.04.模型组海马组织JAK、STAT3蛋白含量高于假手术组,而实验组海马组织JAK、STAT3蛋白低于模型组(P<0.05).结论 柴胡皂苷A可有效改善脑损伤大鼠的认知功能和神经功能,可能与其抑制海马组织JAK/STAT3通路活化有关.
关键词： 脑损伤 柴胡皂苷A 认知 神经功能 Janus激酶/信号转导与转录激活因子3通路 -
HPLC-ELSD法同时测定复方柴术片中柴胡皂苷a、芍药苷与甘草酸的含量
目的:建立同时测定复方柴术片中柴胡皂苷a、芍药苷和甘草酸含量的HPLC方法,为制剂的质量控制提供有效的分析方法.方法:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相组成A:乙腈,B:0.01%甲酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1,柱温:25℃;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度100℃,气速2.0 L·min-1.结果:在选定的色谱条件下,柴胡皂苷a、芍药苷和甘草酸与相关物质分离完全.柴胡皂苷a线性范围为0.043 4～0.694μg,r=0.999 1,平均回收率为94.1%(RSD=1.7%,n=6).芍药苷线性范围为0.234～3.74μg,r=0.999 6,平均回收率为95.2%(RSD=1.5%,n=6);甘草酸线性范围为0.228～3.64μg,r=0.999 3,平均回收率为94.2%(RSD=1.4%,n=6).结论:本方法简便、准确、专属性强,可用于复方柴术片中柴胡皂苷a、芍药苷和甘草酸的含量测定.
