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东亚钳蝎有效部位抗小鼠癫痫作用的研究
东亚钳蝎是传统的动物性中药,具有抗惊厥、抗癫痫、镇痛、镇静、抗血栓和抗肿瘤等多种作用[1-3].本实验室已从中提取出东亚钳蝎有效部位(active fraction of buthus martensii karsch,AFBmK)[4],为了进一步研究AFBmK的抗癫痫作用机制,利用戊四氮(PTZ)建立癫痫模型,研究经AFBmK治疗后的癫痫小鼠大脑海马中一氧化氮合酶(NOS)的活性,以及NO的含量变化.
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石甘散对戊四氮致痫大鼠海马组织MDA、GSH-Px、SOD含量影响的研究
目的 探究石甘散对戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马组织内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响.方法 雌性SD大鼠120只,随机分为空白组、模型组、西药对照组、石菖蒲组、甘松组、石甘散组,每组20只.首先将实验大鼠适应性饲养7 d后,除空白组予腹腔注射0.9%氯化钠溶液1 ml外,各组均腹腔注射35 mg/kg PTZ进行造模.各组大鼠在造模完成1 d后开始灌胃给药,共治疗28 d.治疗结束,观察比较各组大鼠行为学[痫性发作潜伏期(ESL)和强直性惊厥潜伏期(TCL)]表现,计算惊厥发生率(TSR).完成行为学监测后取材,观测大鼠海马组织内GSH-Px、MDA、SOD的含量.结果 与模型组相比,各组均能延长ESL及TCL(P<0.05),且西药对照组、石甘散组明显长于石菖蒲组及甘松组(P<0.05).各组TSR均低于模型组的100%,且西药对照组及石甘散组的TSR下降明显(P<0.05).与模型组相比,各给药组均可以提高大鼠海马组织内SOD及GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05);其中,西药对照组及石甘散组的结果均优于石菖蒲组、甘松组,差异有统计学意义(P<0.05),西药对照组与石甘散组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 石甘散可以延长PTZ致痫大鼠的ESL及TCL,降低TSR.可通过提高海马组织内SOD及GSH-Px活性,降低MDA的含量,抑制氧化反应,减轻自由基对脑组织的损伤.
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痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马Glu,GABA含量的影响
目的:观察痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸(Glu),γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨痫愈痊颗粒治疗癫痫的机制.方法:将70只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丙戊酸钠组(200 mg· kg-)、痫愈痊颗粒低、高剂量组(586,1 172 mg·kg-1),采用亚惊厥剂量戊四氮(PTZ) ip建立癫痫大鼠模型,在造模同时即开始给药,共28 d.行为学观察后取海马组织,采用高效液相色谱-四级杆离子阱串联质谱仪检测海马中Glu,GABA的含量.结果:59只大鼠进入结果分析,与模型组比较,痫愈痊颗粒与丙戊酸钠干预后发作潜伏期延长、惊厥持续时间缩短(P＜0.01);惊厥持续时间高剂量组优于低剂量组(P＜0.05).模型组与正常组相比,海马Glu含量明显上升,GABA含量明显下降(P＜0.01);与模型组比较,痫愈痊颗粒高、低剂量组和丙戊酸钠组可明显降低海马Glu含量,升高GABA含量(P＜0.05,P＜0.01).结论:采用亚惊厥剂量PTZ能够建立癫痫大鼠模型;痫愈痊颗粒抗癫痫机制可能与其降低海马Glu含量,增加GABA含量有关.
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愈痫灵颗粒对戊四氮致痫大鼠海马神经生长因子与认知功能的影响
目的:探讨愈痫灵颗粒对痛性大鼠海马区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及认知功能的影响.方法:选取150只清洁级SD大鼠,随机选取10只作为正常组;其余动物用戊四氮(PTZ)造模.将符合模型标准的大鼠随机分为4组,ig给药,即愈痫灵颗粒组、丙戊酸钠组、拉莫三嗪组给药剂量分别为810 mg·kg-1,122 mg·kg-1,10.1 mg·kg-1,模型组、正常组每天给予同等体积蒸馏水.每天1次,连续给药28 d后,用开场实验(open field test)测定大鼠认知功能变化,采用免疫组织化学方法观察NGF的表达.结果:与模型组相比,愈痫灵颗粒能显著提高戊四氮致痫大鼠的开场实验成绩,差异有显著统计学意义(P＜0.01);愈痫灵颗粒能提高NGF阳性细胞平均灰度值和降低NGF阳性细胞平均吸光度,差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论:降低致痫大鼠海马区NGF的表达是愈痫灵颗粒改善戊四氮致痫大鼠认知功能的可能机制之一.
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基于化学成分和药理效应分析天麻饮片一体化工艺与传统工艺
目的:比较天麻一体化加工饮片与传统加工饮片在化学成分含量和药理效应方面的差异,阐述天麻饮片一体化加工工艺的合理性.方法:以天麻素和巴利森苷A,B,C,E的含量为指标,比较2种工艺所得产品化学成分含量的差异;以戊四氮致惊厥药理模型考察天麻2种工艺生产饮片的息风止痉药理作用.结果:天麻一体化加工饮片中天麻素和巴利森苷A,B,C,E质量分数分别为0.79％,2.04％,0.91％,0.23％,0.57％,传统加工饮片中则依次为0.39％,1.12％,0.64％,0.15％,0.54％.2种工艺所得饮片均具抗惊厥作用,但一体化加工饮片的抗惊厥作用强于传统分段加工工艺的饮片.结论:与传统分段加工工艺相比,一体化加工工艺降低了天麻的生产成本,提高了生产效率,且所得饮片有效成分含量较高、药理作用较好.
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柴胡皂苷a对PTZ诱导大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及其受体表达的影响
目的:探讨柴胡皂苷a (SSa)对戊四氮(PTZ)诱导体外培养的大鼠海马星形胶质细胞肿瘤坏死因子-α (TNF-α)释放及其受体表达的影响.方法:将体外原代培养的大鼠海马星形胶质细胞随机分为对照组(A组)、PTZ 10mmol/L诱导组(B组)、PTZ 1ommol/L加SSa不同剂量干预组(C组、D组,SSa分别为1.25mg/L、0.625mg/L),PTZ诱导2h后运用ELISA法检测细胞外液TNF-α水平、Western-blot法检测星形胶质细胞TNF受体1 (TNFR1)表达水平.结果:含PTZ 10mmol/L的B组TNF-α水平、TNFR1表达均显著高于A组、C组和D组(P<0.01).结论:PTZ可以诱导体外培养大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及TNFR1的高表达;SSa可以抑制Prz诱导星形胶质细胞TNF-α释放及TNFR1的高表达,这可能是其抗癫痫的作用机制之一.
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同病异治对戊四氮点燃大鼠海马区谷氨酸代谢通路的影响
目的 观察并比较癫痫"从肝论治" 复方柴胡疏肝汤和"从痰论治"定痫丸对戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)点燃大鼠海马区谷氨酸代谢通路的影响,探讨同病异治理论的分子机制.方法 以亚惊厥剂量PTZ腹腔注射大鼠建立慢性点燃癫痫模型.完全点燃大鼠24只,随机分为4组,分别为模型组、丙戊酸钠组、定痫丸组和柴胡疏肝汤组,并分别给予生理盐水、丙戊酸钠、定痫丸和柴胡疏肝汤灌胃干预;对照组大鼠给予生理盐水腹腔注射和灌胃干预.连续灌胃4周后,应用HPLC荧光法检测大鼠海马谷氨酸(glutamate,Glu)含量;Western blot技术观察谷氨酸转运体-1(glutamate transporter-1,GLT-1)蛋白表达水平;谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)活性.结果 与对照组比较,模型组大鼠海马区Glu含量显著升高、GLT-1蛋白表达及GS活性显著降低(P <0.01);与模型组比较,各用药组大鼠海马区Glu含量均显著降低,GLT-1蛋白表达及GS活性均显著升高(P <0.01);两中药复方组比较,柴胡疏肝汤组大鼠海马区Glu含量降低及GS活性升高较定痫丸组更显著(P <0.01),而两组GLT-1蛋白表达,差异无统计学意义(P >0.05).结论 "从肝论治"复方柴胡疏肝汤和"从痰论治"定痫丸均能降低PTZ点燃大鼠海马区Glu含量,提高GLT-1蛋白表达及GS活性,说明两复方均能通过调节Glu代谢通路影响脑内Glu水平;而柴胡疏肝汤降低癫痫大鼠海马区Glu含量、上调GS活性效果优于定痫丸,提示柴胡疏肝汤和定痫丸对Glu代谢通路的调节存在不同作用靶点,这可能是癫痫同病异治理论的分子机制之一.
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戊四氮点燃癫痫大鼠学习记忆功能及海马神经元钙调素依赖性蛋白酶Ⅱ表达的变化
目的 观察戊四氮(PTZ)点燃癫痫对大鼠学习记忆功能的影响及海马神经元钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的变化.方法 腹腔内连续注射PTZ制备点燃癫痫大鼠模型,用Morris水迷宫评测大鼠学习和记忆功能,用免疫组织化学技术观察海马神经元α-CaMKⅡ的表达.结果 与对照组大鼠比较,在Morris水迷宫试验中,PTZ组寻找平台的逃避潜伏期显著延长(P<0.05),游泳距离显著增加(P<0.05),穿越平台的次数及在平台象限的游泳距离的百分率显著减少(P<0.05),搜索策略变差,同时伴有海马CAl、CA3区α-CaMKⅡ表达明显减少(P<0.05).结论 PTZ点燃癫痫大鼠学习和记忆功能受损可能与海马CAl、CA3区α-CaMKⅡ表达减少有关.
关键词： 癫痫 戊四氮 海马 学习记忆 钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ -
氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活
目的 研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用,为癫痫的治疗提供实验依据.方法 分离新生SD大鼠海马,体外培养星形胶质细胞,经纯化鉴定后分为:对照组、戊四氮(PTZ)组、氯喹干预组(25、50和75 mg/L),经相应处理后,分别用MTT法、免疫荧光、Western blot测定星形胶质细胞数量及活性、星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及CyclinD1的表达量.结果与对照组比较,PTZ可激活星形胶质细胞的增殖,使GFAP、CyclinD1的表达量增加(P＜0.05);与PTZ组比较,氯喹阻滞了PTZ激活的星形胶质细胞的增殖(P＜0.05);氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞异常增加的GFAP的表达;氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞的CyclinD1的表达量(P＜0.05);与对照组相比,3种结果均显示75 mg/L氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强,并可维持其在正常范围.结论 氯喹具有抑制PTZ激活体外培养星形胶质细胞的作用,其可能通过抑制星形胶质细胞的增殖来发挥抗癫痫作用.
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糖皮质激素对致痫大鼠的行为、脑电图和代谢型谷氨酸受体1α的影响
目的探讨糖皮质激素的抗痫效应. 方法应用脑电图仪和免疫细胞化学方法,分别研究地塞米松对马桑内酯或戊四氮致痫大鼠的脑电图(EEG)和代谢型谷氨酸受体1α(mGluR1α)免疫反应性的影响,并观察大鼠行为的改变. 结果大鼠注射马桑内酯或戊四氮前30min经静脉注入地塞米松,能防止严重的癫痫发作症状和脑电图中高电位的痫波发放,并能减少mGluR1α在海马区的表达. 结论地塞米松具有抑制马桑内酯或戊四氮诱发癫痫的作用,海马内的mGluR1α可能在癫痫活动中起一定作用,地塞米松的抗痫效应可能与降低mGluR1α的表达有关.
关键词： 癫痫 马桑内酯 戊四氮 地塞米松 代谢型谷氨酸受体1α -
Caspase-3在戊四氮急性致痫大鼠脑组织中的表达
目的研究caspase-3在戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)急性致痫大鼠脑组织中的表达情况.方法免疫组织化学SP法显示海马及皮层caspase-3阳性细胞,CMIAS图像分析系统半定量分析caspase-3蛋白的含量.结果癫痫发作后海马及皮层caspase-3蛋白的表达水平均增加,且海马组织较皮层组织增加更为明显.结论Caspase-3参与了癫痫后脑组织神经元的凋亡过程;在癫痫发作所致的神经元损伤中,海马较皮层可能更为敏感.
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脑外伤大鼠癫痫易感性的研究
目的 研究外伤后癫痫易感性的变化.方法 采用自由落体法建立大鼠急性脑外伤模型,描记脑电图,采用戊四氮腹腔注射制备癫痫模型,记录戊四氮小致病量.结果 大鼠脑外伤后脑电图δ、θ波段较健康大鼠增加,α波减少,δ、θ、α波相对功率值比较有显著性差异(P<0.05);大鼠脑损伤组致痫所需小戊四氮量值小于健康大鼠对照组(P<0.05).结论 脑外伤后大鼠癫痫易感性增高.
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戊四氮点燃大鼠海马及额叶皮层单胺水平的变化
目的:通过观察癫痫模型大鼠脑内单胺类递质水平的变化,探讨其在癫痫发病机制中的作用.方法:腹腔注射戊四氮(PTZ)建立Wistar大鼠癫痫模型,应用荧光分光光度法测定大鼠额叶、海马中多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)的含量.结果:癫痫模型组额叶中5-HT、DA均高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);NE含量低于对照组,两者之间的差异有显著性(P<0.01);海马中:癫痫模型组DA与正常对照组比较无明显差异,5-HT、NE的含量均低于正常对照组(P<0.05或P<0.01) .结论:脑内单胺类递质参与了癫痫活动调控,单胺水平的改变将导致脑的兴奋性改变.作用的性质取决于所在脑区,具体机制有待深入的研究.
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戊四氮致癫痫大鼠不同脑区神经肽Y和亮氨酸-脑啡肽的表达及其意义
目的 神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)和亮氨酸-脑啡肽(leu-enkephalin,L-ENK)在癫痫发生、发展和转归中有着重要作用,本研究在戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致癫痫大鼠模型中观察神经肽Y和亮氨酸-脑啡肽在不同脑区中的变化趋势,探讨神经肽Y、亮氨酸-脑啡肽与癫痫的关系.方法 将清洁级近交系雄性SD大鼠50只分为实验组(A组,n=40)和对照组(B组,n=10).A组大鼠腹腔注射戊四氮1次,剂量为50mg/kg,B组腹腔注射同等容量生理盐水.A组大鼠腹腔注射戊四氮后,根据癫痫发作进行分级,0～1级(未发生惊厥)为7只(A1组,n=7),立即取脑处理;2级以上发作(大发作)为33只,随机于癫痫发作后立即取脑处理(A2组,n=10)及6 h(A3组,n=11),24h(A4组,n=10),72h(A5组,n=2)取脑处理.B组于注射生理盐水后5min～10min内取脑处理.采用放射免疫方法动态观察A,B两组大鼠脑组织的海马、中脑、纹状体和额叶中神经肽Y、亮氨酸-脑啡肽的改变;S-P免疫组化染色法染色,观察A,B两组大鼠海马Cal区神经肽Y、亮氨酸一脑啡肽的表达.结果 A1组大鼠中脑、纹状体及额叶的神经肽Y含量较B组升高(P<0.05).A,B两组海马CA1区神经肽Y含量比较,差异无显著意义(P<0.05).癫痫大发作组(A2,A3和A4组)以上各部位神经肽Y含量均明显高于B组;动态观察结果显示,癫痫发作后,在中脑、海马、纹状体和额叶的神经肽Y含量明显增高,随后呈逐步下降趋势,癫痫发作后24h,其含量与未发生惊厥的A1组神经肽Y含量比较,差异无显著意义(P>0.05).S-P免疫组化染色显示,癫痫大发作后,海马神经肽Y的表达明显增加,但随着时间的推移而降低.应用戊四氮后,癫痫大发作大鼠较未出现大发作的大鼠,其额叶、海马、中脑及纹状体中亮氨酸-脑啡肽含量均明显升高,两组问比较,除中脑外,其余部位差异有显著意义(P<0.05);但大发作大鼠海马、中脑及纹状体亮氨酸-脑啡肽含量与B组比较,高于B组,但差异无显著意义(P>0.05).癫痫大发作后,各脑区亮氨酸-脑啡肽含量呈逐渐下降趋势.结论 神经肽Y和亮氨酸-脑啡肽与癫痫的发生、发展有着密切关系.
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戊四氮诱导大鼠癫痫发作的mGLuR1α表达与神经元凋亡
目的 探讨癫痫发作后mGLuR1α的表达及其与神经元凋亡的关系,并明确mGLuR1α在癫痫活动中的作用.方法 将大鼠随机分为致痫后6、12、24、48、72 h组及对照组,应用免疫组织化学和RT-PCR方法检测戊四氮(PTZ)诱导大鼠癫痫发作后不同时间点脑神经细胞mGLuR1α的表达变化,采用原位末端标记法和流式细胞仪检测其神经元凋亡情况.结果 (1) 致痫后6 h TUNEL染色阳性神经元开始表达,致痫后l2 h明显,24 h开始下降,48 h仍有表达.致痫后12 h细胞凋亡率高,之后随时间延长逐渐下降.(2)致痫后6 h mGLuR1α mRNA转录水平即达高,12 h仍处于较高水平,之后逐渐降低,72 h时仍高于正常水平,而受体的蛋白表达则稍晚,于致痫后l2 h达到高峰,24 h开始下降. (3) 致痫大鼠mGLuR1α受体表达的早和高峰时间与TUNEL反应时间基本吻合. 结论 mGLuR1α表达与致痫大鼠的神经细胞凋亡机制有关,癫痫发作可导致mGLuR1α一过性高表达,从而造成神经元损伤.
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戊四氮致痫大鼠不同脑区神经肽Y的表达及意义
目的研究神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)在戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致痫大鼠不同脑区中的变化,以探讨NPY与癫痫的关系. 方法清洁级近交系雄性SD大鼠50只, 分为对照组(A组, n=10)及实验组(40只).实验组按体重50 mg/kg经腹腔注射PTZ 1次, 对照组腹腔注射同等容量的生理盐水.根据癫痫发作分级,0～1 级7只为B组, 立即取脑; 2 级以上发作33只, 随机于癫痫发作后0(C组,n=10)、6(D组,n=11)、24(E组,n=10)、72 h(F组,n=2)取脑.采用放射免疫方法动态观察脑组织中海马、中脑、纹状体和额叶中NPY的改变;SP免疫组化染色法染色,观察各组大鼠海马CA1区NPY的表达. 结果 B组中脑、纹状体及额叶NPY含量较A组升高(P<0.05), 而两组间海马NPY含量差异无显著性;癫痫发作组(C组、D组、E组)各部位NPY含量均明显高于A组.动态观察结果显示, 癫痫发作后在中脑、海马、纹状体和额叶的NPY含量明显增高随后呈逐步下降,在癫痫发作后24 h其含量与未发生惊厥的B组NPY含量差异无显著性(P >0.05);免疫组化染色显示癫痫大发作后海马NPY的表达明显增加,但随着时间的推移而降低.结论 NPY与大鼠癫痫的发生、发展有密切关系.
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慢性癫痫大鼠脑组织生长抑素mRNA及其表达产物的研究
目的为探讨生长抑素(SOM)在癫痫发病中的作用.方法应用原位杂交组织化学方法研究慢性癫痫大鼠海马回、齿状回、大脑皮质SOM mRNA表达的变化,并用放射免疫法检测了海马、大脑皮质内基因表达产物的变化.结果慢性癫痫大鼠海马回、齿状回、大脑皮质SOM mRNA胞体数量、胞体截面积均明显高于对照组,胞体灰度值均明显低于对照组.与此同时,海马及大脑皮质内SOM含量亦明显增高.结论慢性癫痫发病过程中编码SOM的基因被活化,同时伴随着其表达产物的增加,SOM与癫痫的发病密切相关.
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迷走神经刺激对戊四氮致癫痫大鼠丘脑网状核谷氨酸受体的影响
目的探讨迷走神经刺激(vagus nerve stimulation, VNS)抗癫痫的机制.方法应用原位杂交组织化学方法研究戊四 氮(PTZ)致癫痫大鼠和VNS抗癫痫大鼠丘脑网状核谷氨酸受体(NMDAR1)mRNA的变化. 结果 [ HT5"BS〗丘脑网状核NMDAR1 mRNA表达, PTZ致癫痫组明显高于正常对照组,VNS抗癫痫组明显低于PTZ致癫痫组,VNS抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性.结论 (1)丘脑网状核在PTZ致癫痫和VNS抗癫痫中均可能起着重要作用.(2) VNS可 能通过抑制丘脑网状核兴奋性神经递质受体--NMDAR的活性与表达,降低大脑皮层的兴奋 性,从而提高癫痫发作的阈值,抑制癫痫的形成及发展来发挥抗癫痫作用.
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斑马鱼幼体癫痫模型的建立及应用
本研究用戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)方法建立了一种斑马鱼幼体癫痫模型.结果显示,PTZ可导致斑马鱼幼体癫痫样异常兴奋行为,如游动速度加快、抽搐等异常现象;癫痫标志基因c-fos信号在斑马鱼幼体脑区增强并范围扩大,而lgil基因表达则被抑制.这些表型与癫痫临床病例和文献报道相符.给予癫痫治疗药丙戊酸钠(VPA)可使斑马鱼癫痫症状减轻或消失:异常兴奋游动、c-fos和lgi1基因表达,以及神经核蛋白NeuN均恢复到近正常组水平.利用所建模型,检测了两种先导化合物Y53和BMT(均为小檗碱结构类似物)的抗癫痫作用,Y53抑制光刺激下的发作更有效;BMT对无刺激的发作有较好的抑制作用.综上,所建斑马鱼癫痫模型对于化合物有无刺激因素条件下的差异作用也具有较好的辨识力,可作为抗癫痫先导化合物的简便实用的药效筛选平台及用于癫痫发病机制研究.
