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一种提取大鼠膝关节软骨下骨总RNA的方法
在关于骨性关节炎软骨下骨的研究中,大鼠膝关节骨关节炎模型常使用.从细小的大鼠膝关节分离并抽提出高质量的软骨下骨总RNA样品十分困难.我们使用微动力磨钻液氮下打磨分离大鼠膝关节软骨下骨,结合Trizol与硅胶离心柱提取软骨下骨总RNA的纯化方法,是一种简单、可靠、实用的提取完整和高纯度软骨下骨总RNA的新方法.
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人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体胞外区基因原核系统的表达与纯化
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员之一,能够诱导前列腺癌、膀胱癌、肺癌等多种肿瘤细胞凋亡,但不影响正常细胞[1-3].本研究旨在观察重组TRAIL融合蛋白(GST-rTRAIL)的表达,探讨其包涵体蛋白的复性和纯化方法.
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高纯度黄芩提取物制备方法研究
目的:筛选黄芩提取物制备过程中除杂方法及变色关键工艺参数,制备高纯度黄芩提取物,为工厂实际生产提供参考.方法:以黄芩苷纯度与黄芩苷转移率为指标,比较了黄芩提取物纯化过程中4种除杂方法的效果与不同浓缩液浓度对黄芩提取物颜色的影响.结果:黄芩提取物纯化过程中佳除杂方法为硅藻土助滤除杂,同时浓缩液浓度变化是黄芩提取物颜色变化的关键原因.结论:黄芩提取物纯化过程佳除杂方法的建立以及过滤液浓度等关键工艺参数的确定,为高纯度黄芩提取物的制备提供了参考.
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娑罗子中七叶皂苷提取工艺研究
目的:采用正交实验法研究娑罗子中七叶皂苷的提取工艺及纯化方法.方法:考察料液比、浸提时间、浸提次数、浸提温度4个因素对娑罗子中七叶皂苷提取量的影响;并通过三种方法比较得出佳纯化方法.结果:娑罗子中七叶皂苷佳提取工艺是在浸提温度70℃、浸提时间为3 h、浸提液体积与样品质量比为8:1、浸提次数3次条件下提取;较优的纯化方法为:经活性炭脱色后用氯仿萃取,再水洗烘干.
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一种提高PCR产物亚克隆效率的方法
利用PCR扩增目的基因是常用的一种克隆方法,但在实际操作中,试剂盒中Taq DNA聚合酶在经过各种纯化方法(如酚氯仿抽提,乙醇沉淀,电泳和柱纯化)后,仍附着在扩增产物的5'端,有效地阻止随后的内切酶酶切过程,导致重组的失败。作者采用一种可以显著提高PCR产物克隆的效率的方法,即将10 μl蛋白酶K混合物[蛋白酶K混合物的配制:0.1 mol/LTris-HCl (pH8.0)、5%SDS,0.5 mg/ml蛋白酶K)加入100 μl PCR反应后的产物中,37 ℃水浴1 h后,68 ℃ 15 min以灭活蛋白酶K,用酚-氯仿、氯仿各抽提1次,无水乙醇沉淀,70%乙醇清洗后晾干,并用双蒸水溶解。采用这种方法得到了PCR产物与相应酶切载体连接,可以顺利得到大量的重组子,与常规方法比较大大地提高了克隆的效率。
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人红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶分离纯化方法的改进
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)是磷酸戊糖途径的限速酶.传统的以NADP-Sepharose 4 B作为亲和吸附剂的纯化方法由于较昂贵的NADP-Sepharose 4 B用量多,且耗时长,为此,作者对此传统方法进行了改进.报道如下:
关键词: 红细胞 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 纯化方法 -
酵母表达中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的初步纯化
目的:研究酵母表达中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的纯化方法.方法:表达上清用(NH4)2SO4盐析、凝胶过滤、阳、阴离子交换层析等方式进行纯化.通过比较产品纯度、收率与质量确定佳实验方案.纯化产品用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blot、等电聚焦与高效液相色谱进行鉴定.结果:获得较高纯度的NGAL.结论:(NH4)2SO4盐析、凝胶过滤和阳离子交换是纯化酵母表达NGAL的佳实验方案.
关键词: 毕赤酵母 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 纯化方法 离子交换 色素 -
原代小胶质细胞及神经元细胞培养不同纯化方法的比较
目的 探讨建立简便高效的原代小胶质细胞及神经元培养和纯化方法.方法 神经元与胶质细胞混合培养后,采用温和胰酶消化法、恒温振荡法、利多卡因分离法及手摇法分离纯化小胶质细胞,无血清培养法及阿糖胞苷法分离纯化神经元,细胞计数、流式细胞术及细胞化学染色鉴定小胶质细胞及神经元.结果 手摇法分离纯化小胶质细胞与温和胰酶消化法、恒温振荡法、利多卡因分离法比较,细胞产量更高、活性更好;无血清培养法培养神经元比阿糖胞苷法细胞纯度更高、活性更好,形成神经网络结构的时间也更早.结论 手摇法分离纯化小胶质细胞是产量高、简便、经济的方法,而无血清培养法更能提高神经元的纯度及活性.
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3种PCR产物纯化方法的比较
PCR产物中一般都含有过量的引物及核苷酸,这些成分将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程,因此有必要去除.目前核酸的纯化方法很多,但往往因需时较长或回收率太低而影响下一步的操作.近年来,商品化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变为简便快捷,但因价格高昂而令多数实验室难以承受.本研究选择3种具有代表性的常用方法对HLA-DQA1基因第二外显子的PCR产物进行纯化比较,现报道如下.
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模板DNA制备方法对结核分枝杆菌基因扩增微孔板杂交法的影响
使用聚合酶链反应微孔板杂交对结核病的诊断具有独特之处,但是临床标本处理后供扩增处理液的优劣大大影响了扩增检出灵敏度和特异性标本中结核杆菌的游析和浓缩,结核杆菌裂解程度,释放的DNA的回收和质量,临床标本中的抑制因素的消除是保证灵敏度和特异性的关键因素,因此,选择合适的结核杆菌DNA模板提取、纯化方法是非常重要的[1].为此,我们对10种国内外现较引人注目的DNA提取、纯化方法在结核中应用情况进行了比较分析.
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掌叶大黄多糖纯化方法对比实验研究
目的 探索掌叶大黄多糖高产量和高纯度的分离纯化方法.方法 采用超滤法、超滤-醇沉法和传统水提-醇沉法,通过测定大黄多糖得率和含量(纯度)比较3种纯化方法的优劣.结果 超滤法所得大黄多糖得率和纯度均高于超滤-醇沉法和传统水提-醇沉法.结论 用超滤膜技术可以纯化、富集掌叶大黄多糖,具有工艺简单,成本低,环保无污染,所得制品收率高、纯度好等特点,克服了传统水提-醇沉法成本高、周期长的缺点,具有产业化的开发前景.
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柯萨奇病毒A组16型不同纯化方法的比较研究
目的 评价不同方法纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的可行性和有效性.方法 将CA16病毒收获液经切向流超滤浓缩后,分别进行离心、氯仿抽提、分子筛和蔗糖垫层/梯度离心,按《中国药典》(三部)(2010版)的检定要求检测不同纯化方法得到的样品,检测指标包括:感染性滴度、抗原含量、蛋白含量、比活性、HPLC纯度、残余牛血清白蛋白、残余抗生素、免疫原性.结果 从比活性来看,分子筛纯化法是其他方法的2~21倍,明显优于其他工艺;经HPLC检测,分子筛纯化样品纯度>98%,而其他工艺均在50%以下;分子筛法所得纯化样品中牛血清白蛋白残留量符合《中国药典》要求(<50 ng/剂),去除率达99.97%;分子筛法和蔗糖垫层/梯度离心法所得纯化样品中抗生素残留量符合《中国药典》要求(<50 ng/剂),分子筛法去除率在80%以上;从免疫小鼠后的抗体阳转率来看,离心和氯仿抽提样品组阳转率为100%,分子筛组为80%,蔗糖离心组为50%;从抗体几何平均滴度(ge-ometric mean titer,GMT)来看,氯仿抽提组高,为1∶912.结论 以Sepharose 6 Fast Flow作为层析介质的分子筛法可得到高纯度的CA16病毒,综合分析,该法是CA16较为理想的纯化方法.
关键词: 柯萨奇病毒A组16型 纯化方法 质量控制