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160六价铬诱导P53蛋白活化的机制
本研究探讨了Cr(Ⅵ)诱导P53活化的机制.培养人肺上皮细胞系A549并进行传代.取3×105A549细胞转入一个6孔平皿,于37℃下温孵24h,立即转染1μg报告质粒和1μg β-半乳糖苷酶(β-Gal)质粒,温孵过夜后冲洗,加入含10%FBS的F-12K培养基,再培养24h后加入5、10、20、50和100μmol/L的Cr(Ⅵ)溶液处理(未经处理的为对照),然后加入400μl报道溶解缓冲液,在4℃下抽提细胞2h;取80μl细胞溶解产物测量虫荧光素酶和β-Gal活性,结果以β-Gal标化的相对P53活性(与对照相比)来表示.另取经Cr处理后的A549细胞,抽提细胞经声处理断裂DNA和减少粘度,然后取20μl全细胞溶解产物加热、离心,进行蛋白印迹分析(Westernblot).取细胞溶解产物、20μlRecin/TNT(1:10)和10μg抗体在4℃下温孵过夜并离心,取上清进行Western blot反应.
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QuEChERS方法结合固相萃取-液质联用/气质法检测茶叶中的农药残留
方法概述加入10mL去离子水进行混匀,然后加入乙腈(LC)或正己烷/丙酮(GC)进行萃取.对LC加入Welchrom QuEChERS盐析包,进行猛烈摇震,再离心使其发生相分离.将部分有机相溶液通过Welchrom净化管反相固相萃取进行净化,后的提取液直接分析.对GC通过Welchrom Carb SPE柱进行净化,收集洗脱液,吹干,加入乙腈进行分析.由内标校正进行定量,其内标在第一次加入乙腈后进行添加.
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1-20 两种带色样品对SOS反应的影响
目的 SOS显色试验是一种通过显色测定大肠杆菌SOS反应强度的遗传毒性试验,遗传毒物可诱导大肠杆菌SOS反应.通过本实验可了解带色样品对SOS反应的影响.方法37℃活化培养大肠杆菌PQ37 8~10 h,转接培养2 h,加样品后培养2 h,加入B缓冲液300 μl,混匀,水浴5 min,加入显色剂一定时间后测定A420(吸光度)值,求出诱导比值,大于2.0时为阳性.结果 (见表1).结论带色样品对SOS显色试验结果影响较大,去除本底色也不能消除带色样品对结果的影响,但可通过离心减少带色样品对结果的影响.表1 带色样品对SOS反应的影响(-x±s)┏━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃┃二羟蒽醌(S9) ┃敌克松┃┃分组┃┃┃┃┣━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━┫┃┃不离心┃离心┃不离心减本底┃不离心┃离心┃不离心减本底┃┣━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 20mg ┃ 3.05±0.07 ┃2.13±0.62 ┃ 0.16±0.01 ┃ 5.37±0.01 ┃ 2.18士0.01 ┃ 0.72±0.01 ┃┃ 4mg ┃ 2.85±0.24 ┃ 2.15±0.01 ┃ 0.55±0.01 ┃ 4.28±0.01 ┃ 2.22±0.01 ┃ 0.70±0.01 ┃┃ 800μg ┃ 2.63±0.02 ┃ 2.44±0.01 ┃ 1.45±0.01 ┃ 2.43±0.0 ┃ 2.33±0.01 ┃ 0.49±0.01 ┃┃ 160 μg ┃ 2.64±0.01 ┃ 2.25±0.0 ┃ 2.22±0.01 ┃ 2.45±0.01 ┃ 3.04±0.01 ┃ 1.55±0.01 ┃┃ 33μg ┃ 2.55±0.07 ┃ 1.42±0.01 ┃ 1.80±0.01 ┃ 1.97±0.01 ┃ 1.77±0.01 ┃ 1.53±0.01 ┃┗━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━┛
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NOVA电解质分析仪管路堵塞故障分析
我院 1997年购进美国 NOVA12电解质分析仪, 98年升级为 16+,此机使用操作简便,速度快,在临检一线为我院急诊生化分析起到了很大作用,在使用过程中,因采血时间、离心程度、血液质量等原因,血液中的蛋白、脂类、纤维及血凝块在管路中积聚,阻塞的情况时有发生,下面就堵塞情况进行分析及介绍处理方法.
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痰结核分支杆菌培养的2种前处理方法对比实验
痰结核分支杆菌培养的前处理方法直接关系到培养结果阳性率及阳性价号划分.理想的前处理方法应是既对结核杆菌损伤小,又使结核杆菌与痰中有机物彻底分离,并且对工作人员传染性小.为摸索出较理想的前处理法,对不含防腐剂涂片"+、++"痰标本分别使用"离心前处理法"和"国际前处理法"后培养,观察效果.
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浅谈板蓝根提取工艺的研究总结
通过对板蓝根两种提取方法的研究,结果表明,离心工艺较醇沉工艺生产周期短,提取收率高,成本较低.
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防治血脂异常的健康教育
随着生活水平的提高,血脂异常的患病率也在不断升高,大部分的血脂异常与生活方式有关,也就是说血脂异常是一种生活方式疾病.血脂异常是心血管疾病的主要的危险因素之一,要防治心血管疾病必须关注血脂异常.作为社区医生,应该关注居民尤其是中老年人的血脂,做到早预防早治疗,使其远离心、脑血管疾病,健康生活.
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影响凝血功能测定的因素分析
目的:探讨影响凝血功能检测的标本采集因素、标本状态及技术因素、药物因素.方法:选择住院患者及门诊健康体检患者的标本检测血凝功能,对标本不合格者重新抽血复查.结果:标本不合格与合格标本有统计学差异(P<0.05).结论:标本的采集、离心、标本状态不合格、标本处理不当都对凝血功能测定有很大影响.
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2所医院物品与人员手HBsAg及HBV-DNA污染检测
于1998年、1999年的3~5月,对福州地区2所医院口腔门诊物品与人员手进行了HBsAg与HBV-DNA检测.检测时,以浸有磷酸盐缓冲液的无菌棉拭,对物品表面与人员手往返涂抹采样.随后,将棉拭头剪入2 ml磷酸盐缓冲液中.在旋涡混匀器中充分震荡后,离心(4000 r/min)5 min.取离心液,用ELISA法检测HBsAg抗原性.以样液OD值(S)与阴性对照OD值(N)的比值(S/N)>2.1,为HBsAg阳性.以上海医科大学预防医学研究所提供的非放射性分子杂交法检测HBV-DNA,当测定孔位呈现蓝紫色斑点时为HBV-DNA阳性.
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医用离心机的基本结构原理及常见故障分析
医用离心机在医院广泛使用,作为一个工程人员熟悉掌握其结构原理、分析及维修常见故障相当重要.
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医疗器械重复接触全身毒性试验中血液标本放置时间的质量控制
目的:探讨血液标本离心前后放置时间对临床生化项目测定结果的影响,为动物试验血液标本保存方式、放置时间等建立相关标准操作规程,为形成标准文件提供理论基础.方法:选取10只SD大鼠,雌雄各半,每只大鼠取血4管,1号管离心后即刻(0h)以及放置1h、2h、3h、4h进行生化检测,2~4号管分别继续放置1.5h、2.5h、3.5h后离心进行生化检测.结果:标本离心后放置不同时间,血生化检测结果差异不显著(P>0.05);标本放置不同时间后再离心检测结果差异显著(P<0.01).结论:血液标本放置时间不超过1.5h,离心后血清2~8℃密闭保存不超过4h.
关键词: 重复接触全身毒性试验 离心 放置时间 标准操作规程 -
威高新品PRP亮相CMEF秋季展
在第70届CMEF展会上,威高新品富血小板血浆(PRP)制备用套装一经亮相,就吸引了众多专业观众的眼球,其独特的优化设计、优异的临床实用性、广泛的适应范围,凸显了产品的创新价值。该产品使威高成为国内首家也是唯一一家研制PRP制备产品的公司,填补了国内空白。
据山东威高新生医疗器械有限公司副总经理吕汝举介绍,富血小板血浆(P R P)制备用套装是山东威高集团医用高分子制品股份有限公司与上海交通大学附属第六人民医院合作设计开发的,该套装已于2013年1月15日通过了国家食品药品监督管理总局的认证。该套装内包括了制备PRP所需要的所有用品;离心管内设计有三个孔,独特的优化设计保证了所有接触血液的操作都在同一个离心管内,避免转移过程中血液成分的二次污染和血小板激活;套装中的PRP喷枪包组合后可将凝血酶与PRP同时喷洒注射到创面,从而防止形成凝胶后不易注射使用的缺点,同时使PRP的分布更均匀,增加了其临床实用性。 -
威高新品PRP亮相CMEF秋季展
在第70届CMEF展会上,威高新品富血小板血浆(PRP)制备用套装一经亮相,就吸引了众多专业观众的眼球,其独特的优化设计、优异的临床实用性、广泛的适应范围,凸显了产品的创新价值。该产品使威高成为国内首家也是唯一一家研制PRP制备产品的公司,填补了国内空白。
据山东威高新生医疗器械有限公司副总经理吕汝举介绍,富血小板血浆(P R P)制备用套装是山东威高集团医用高分子制品股份有限公司与上海交通大学附属第六人民医院合作设计开发的,该套装已于2013年1月15日通过了国家食品药品监督管理总局的认证。该套装内包括了制备PRP所需要的所有用品;离心管内设计有三个孔,独特的优化设计保证了所有接触血液的操作都在同一个离心管内,避免转移过程中血液成分的二次污染和血小板激活;套装中的PRP喷枪包组合后可将凝血酶与PRP同时喷洒注射到创面,从而防止形成凝胶后不易注射使用的缺点,同时使PRP的分布更均匀,增加了其临床实用性。 -
基因芯片在乙型肝炎的基因诊断中的应用
基因芯片利用芯片技术中信息的集成化和平行处理原理,在一张芯片固定成千上万个探针同时进行实验,因而具高效、愉效、多参量等特点,把基因芯片技术用于疾病的诊断,其优点有以下几个方面:一是高度的灵敏性和准确性;二是快速简便;三是可同时检测多种疾病.本研究应用基因芯片对乙型肝炎病毒感染者血清标本进行了检测.1.材料与方法:于2001年3月采集深圳市卫生防疫站门诊体检人员乙型肝炎感染者血清标本20份,保存于-20℃冰箱,待检.乙型肝炎基因芯片试剂由博道公司提供.ScanArray 5000扫描仪购自基因公司.核酸提取方法:取裂解200 0644l加待检血清100 μl,混合均匀,然后加入等量的酚-氯仿-异戊醇,混匀后13 000 r/min,离心5 min;取上清加等量冷异丙醇,再加tRNA 1.5 μl,混匀后13 000 r/min,离心5 min;弃上清,和75%乙醇洗沉淀,13 000 r/min离心5 min,干燥后加5 μl纯水即可.
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气相色谱法测定大鼠血浆中氰戊菊酯的动力学研究
本研究采用气相色谱法测定大鼠血浆中氰戊菊酯的浓度变化,以便从不同角度阐明氰戊菊酯在动物体内的代谢规律。 一、材料与方法 1.动物及其处理:体重200~250 g 的SD大鼠48只,由江苏省实验动物中心提供,适应饲养环境1周后,按体重随机分成12个时间组,每组4只,雌雄各半。实验前大鼠自由饮水,禁食12 h。将氰戊菊酯用色拉油配成11 mg/ml浓度,按55 mg/kg剂量给大鼠灌胃,分别在灌胃后0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00、16.00、20.00、24.00、32.00 h经大鼠眼眶静脉丛取血约5 ml。血液收集于肝素化试管中,离心(3 000 r/min)10 min后分离血浆,于-30 ℃保存备用。 2.药品和试剂:氰戊菊酯标准品,含量为98.4%,由上海中西药业股份有限公司提供;80%氰戊菊酯原药,由江苏省激素研究所提供,所用分析试剂均为AR级。 3.仪器和气相色谱条件:日本岛津GC14B气相色谱仪;3%SE-30玻璃柱2 m×2 mm,硅烷化101担体;电子捕获检测器;温控:柱温250℃,气化温度280℃,检测器温度310℃;载气:高纯度氮气,流速60 ml/mim;进样量2 μl。 4.血药浓度测定方法:取血浆2.0 ml于具塞试管中,加入环己烷2 ml,振摇2 min后离心8 min,提取上清液;再在此血浆试管中加入环己烷2 ml,振摇2 min,离心后再提取上清液,将2次提取的上清液合并在同1个小试管中,用氮气吹干,然后用0.2 ml环己烷溶解小试管壁四周的提取物,作气相色谱法测定[1]。5.数据处理:用3P87药物动力学程序在计算机上进行模型选择,根据F检验和AIC值选择房室数和权重,并据此计算相应的动力学参数。
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中国猕猴预存抗腺病毒中和抗体滴度对腺病毒体外感染单核细胞效率的影响
为了探索通过血液系统利用重组腺病毒载体的方法,以中国猕猴为动物模型,以复制缺陷型人5型腺病毒(human adenovirus serotype 5,HAd5)为载体携带报告基因在体外直接感染外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMC).首先对HAd5在体外感染PBMC的条件进行优化,证实离心力可提高HAd5的感染效率;细胞分群结果表明HAd5特异感染PBMC中的CD14+单核细胞,仅感染小部分自然杀伤细胞,但几乎不感染T淋巴细胞和B淋巴细胞.首次发现:猕猴体内预先存在的抗HAd5中和抗体滴度越高,其单核细胞在体外对HAd5的易感性越强.这种现象将拓宽基于腺病毒载体的基因治疗和疫苗的临床应用范围,尤其是对预先存在腺病毒中和抗体的人群更具意义,为探索更方便有效的基因治疗和疫苗研究带来新的思考.
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2.148思密达吸附胆汁中总胆红素和总胆汁酸的初步研究
目的初步研究体外条件下思密达在不同pH值和浓度下对胆汁中胆汁酸和胆红素吸附作用.方法留取PTCD患者引流的胆汁经稀释成不同浓度,分别滴定至pH值为1、3、5、7,加入150mg/mL思密达后充分混匀,离心,取上清液,滴定至pH值为7,测定思密达对总胆红素和总胆汁酸的吸附量,并计算吸附率.
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肺穿刺诊断包虫病1例
患者男性,28岁.X线透视发现肺内有一5 cm×6 cm包块.行右肺穿刺活检术,进针时有包膜抵抗感,用力刺入有落空感,抽出无色透明清亮液体70 ml,内含多枚针尖大小灰白色颗粒状物.液体沉淀离心后,将颗粒状物石蜡包埋,切片,HE染色.镜检为细粒性棘球蚴原头节(图1,2).
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乳白胶在冷冻切片中的应用
恒温冷冻切片问世以来,人们就寻求一种理想的支持物-包埋剂.近10余年采用进口的OCT和国产包埋剂,经实践证明,较为理想,但OCT和国产包埋剂价格昂贵,不宜广泛使用.近5年来我科采用乳白胶(木胶)作为冷冻切片包埋剂,制片3000余例,适用于各种组织、穿刺标本和体液离心沉淀物.方法简便、快速、效果十分理想.现介绍如下.
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国内外狂犬病毒实验室检测与诊断技术的研究及进展
1 狂犬病诊断实验室的安全措施在一般的实验室条件,技术人员有暴露于以下传染的危险:--野生狂犬病毒(即街毒),当实验室对接收到的动物标本进行尸体解剖或对标本进行加工(悬液制备,离心)等,这一类操作是非常危险的,必须在P3以上条件的专业实验室中进行.