首页 > 文献资料
-
肝炎基因诊断芯片检测肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA、HCVRNA的临床研究
肝炎基因芯片是根据肝炎病毒的特征基因片段设计探针序列,将探针以微阵列形式排列在经过特殊处理的玻片上,从待测血液、组织标本中抽取微量肝炎病原体DNA(RNA),与探针杂交,用特有的荧光波长扫描芯片,通过计算机软件进行分析诊断.我们用病毒性肝炎基因诊断芯片,分别双盲检测40份乙型肝炎患者和健康人、丙型肝炎患者血清,99份肝炎后肝硬化肝组织蜡块标本,15份慢性乙型肝炎患者肝组织活检标本;同时用荧光微粒子定量法测定血清中乙型肝炎病毒标志物HBcAg,PCR法检测血清中HBVDNA、HCVRNA,用免疫组化法、原位分子杂交法分别检测肝组织HBcAg、HBVDNA.结果报道如下.
-
PCR-RFLP检测肝癌和肝硬化患者乙型肝炎病毒基因型
目前已发现的HBV基因型有A~G 7种.国内外已有一些有关HBV基因型对HBV感染途径以及与HBV感染后肝病进展的报道[1],但至今还没有确切的结论.目前HBV基因型分型方法主要有3种,即全基因测序、PCR-RFLP法以及ELISA结合探针杂交的方法.我们以新近提出的PCR-RFLP法[2]对无症状携带者(asymptomatic carriers,AsC)、肝硬化以及肝癌患者3组血清进行HBV基因分型,以探讨HBV基因型与肝硬化、肝癌的发生和发展可能存在的关系.
-
肽核酸压电基因传感器阵列检测乙肝病毒的研究
随着声光技术、微电子技术的迅速发展,一种基于石英晶体的压电现象发展而来的石英谐振式基因传感器逐渐发展成熟起来,它是以压电石英晶体为换能器、以特异性短核酸探针为分子识别元件的一种新型基因传感器,在它诞生之初就因为集合了核酸探针杂交的高特异性和石英晶振微天平的高灵敏性可能成为新一代基因诊断技术.但是,目前研究报道的基因传感器表面固定的都是DNA探针,形成一些难以克服的困难.
-
应用DNA探针杂交化学发光自显影检测结核分枝杆菌
本研究建立了一种无需聚合酶链反应(PCR)扩增将一种新的裂解液与DNA探针、化学发光自显影优化组合成一个整体,,具备高敏感度和高特异性的检测结核分枝杆菌的新方法.该法操作简便、经济,适用于常规检测.报告如下.一、材料和方法1.仪器:TGL-16G型台式离心机,AG9600型PCR仪和DYY34型电泳仪.
-
肽核酸荧光原位杂交技术在临床微生物快速鉴定中的应用进展
肽核酸(peptlde nucleic acid,PNA)探针荧光原位杂交技术是一种诊断新技术,既具有PNA探针杂交的高度专一性,又具备传统染色技术的简便性,可为传染性疾病提供准确的诊断信息.它适用于临床微生物实验室的常规检验,能在短时间内为临床医生提供抗生素使用依据,具有传统微生物检验技术无法比拟的优势.笔者就其在临床微生物快速鉴定领域应用作简要综述.
-
突变受阻性扩增系统快速检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的初步研究
利福平(RFP)是结核化疗方案中的一个关键药物,它的应用可明显缩短结核病的疗程.因此,创建快速、简便的检测方法一直是基础研究中的一个重要课题.突变受阻性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)[1]是一种可以检测任何已知点突变或小基因片段缺失的扩增技术,简便、可靠、无同位素污染.我们选择与结核分枝杆菌(结核菌)RFP耐药相关的rpoB基因中突变频率高的3种突变形式:531 TCG→TTG,526 CAC→TAC,516 GAC→GTC来设计ARMS特异性突变引物,ARMS-聚合酶链反应(PCR)扩增后结合微孔板探针杂交酶免疫技术(EIA)加以检测其扩增产物,进而推断其RFP耐药与否.
-
多重连接依赖性探针扩增技术及其在临床中的应用
多重连接依赖性探针扩增(Multiplex Ligation dependent Probe Amplification,MLPA)技术是一种高效、特异、快速、简便,针对待检核苷酸序列进行定性和相对定量分析的技术.2002年Schouten等[1]在多重扩增探针杂交(Multiplex amplifiable probe hybridisation,MAPH)技术基础上进行改进而建立了MLPA技术.该技术在一次性反应中可检测45个核苷酸序列拷贝数的改变,目前已广泛应用于染色体数目异常、基因缺失/重复、DNA甲基化检测等多个分子生物学诊断领域.
-
女性泌尿生殖道沙眼衣原体感染临床诊断方法
目前女性泌尿生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)感染,已成为威胁女性健康的严重问题,沙眼衣原体感染发病率逐年增高,实验检查诊断衣原体感染技术不断改进,目前有培养,抗原检测,核酸探针杂交,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),以及在PCR基础上发展起来的LCR(ligase chain reaction),敏感性特异性更高,是女性CT感染检测的较好方法.
-
增强型RACE技术克隆辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1
目的在获得了辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1 EST序列的基础上获得全长cDNA.方法RT-PCR方法对RS1基因进行表达谱分析,找到表达丰度较高的组织提取总RNA作为模板,应用增强RACE技术即结合生物素探针富集靶cDNA的方法克隆RS1的cDNA末端.结果克隆到RS1片段3′端约2kb的序列.该序列5′端包含已知的RS1片段,3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子.明确了RS1的正、负链及其蛋白编码方向,为RS1 5′端的克隆提供了必要信息.结论结果与本实验的设计完全一致,说明这一方法对从表达丰度低,难以设计佳基因特异性引物的EST序列克隆其对应的全长cDNA是可行的,同时为下一步研究RS1在小鼠肠上皮辐射应激反应中的作用和被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础.
-
非克隆cDNA文库与RACE技术克隆小剂量辐射诱导新基因RIG1
目的在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1 EST片段的基础上,简便、有效地获得其全长cDNA,进行下一步的基因功能研究.方法结合应用非克隆cDNA文库技术及增强RACE技术,设计了巢式RACE PCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交、再次磁性分离的纯化流程.结果成功地克隆到RIG1 EST片段3′端约1 kb的序列,该序列3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子.进一步的分析明确了RIG1 EST的正、负链及其蛋白编码方向,为RIG1 5′端的克隆提供了大量可靠的信息,目前RIG1 5′端的克隆已得到很好的进展.结论所得结果与我们的设计完全一致,说明这一技术路线是简便可行的,为下一步研究RIG1基因在细胞辐射应激反应中的功能及被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础.
-
定量和半定量PCR技术及其临床意义
1 半定量和定量PCR及定量核酸的方法1.1 内对照法将已知的目的DNA及内对照DNA混合,加入两对引物同时进行PCR扩增,后将PCR产物转膜,用特异性探针杂交,目的DNA扩增后的量通过系列稀释后与内对照的相对量进行比较即可确定[1].
-
中国布鲁氏菌核糖体的基因多态性
目的 分析国内99株布鲁氏菌的遗传多态性,为其分型和诊断奠定基础.方法 提取布鲁氏菌DNA,经内切酶Eco RI酶切、琼脂糖凝胶电泳、Southern转印后,与地高辛标记的16 srRNA核糖体基因探针杂交,以酶免疫试验检测信号,比较布鲁氏菌各标准株和野生株的16 srRNA核糖体指纹图谱.结果 不同布鲁氏菌菌株在16 s rRNA探针杂交图谱上有明显的多态性,根据杂交的条带数及片段的大小差异,99株布鲁氏菌分属17个RT型(ribotype,RT型).以RT15型为优势型,其他型别则较分散,有的RT型只存在于某个菌株.结论 我国布鲁氏菌在遗传分化及克隆群的分布上存在多态性,提示国内布鲁氏菌在流行上具有复杂性.
-
乙型肝炎病毒荧光定量聚和酶链反应检测结果分析
乙肝病毒长期以来一直危害着人们的健康,乙肝患者血清病毒水平并非衡定不变,而是随肝脏炎症情况波动,乙肝病毒含量在病程中的变化规律一直为人们所关注,FQ-PCR结合PCR和探针杂交荧光标记的优点,能够及时准确的反映患者所处的临床阶段及药物的疗效.
-
多重连接依赖性探针扩增技术在产前诊断中的应用
产前诊断是在遗传咨询的基础上,主要通过遗传学检测和影像学检查,对高风险胎儿进行明确诊断,通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目的,从而降低出生缺陷率,提高优生质量和人口素质.多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术是在多重扩增探针杂交(MAPH)技术的基础上改进而来,基本原理是针对基因组内拷贝数变异(CNV)对可与样本DNA正确杂交并被连接酶连接的探针进行扩增和半定量分析,具有精确度高、重复性好、操作简便及通量大等特点.MLPA已广泛应用于染色体数目异常、遗传性疾病基因缺失重复、单核苷酸多态性、甲基化等多个研究领域等.随着MLPA不断被改进,目前已成为临床上常用的产前诊断工具之一,因此本文就其在产前诊断中的应用做一总结.
-
基因诊断方法的研究与进展
基因诊断是利用分子遗传学技术在DNA或RNA水平上对某一基因进行突变分析,从而对特定疾病进行诊断.基因诊断因其直接诊断性、高特异性、灵敏性、早期诊断性弥补了表型诊断的不足而被广泛应用.基因诊断也被应用于组织工程的相关领域,如干细胞移植及器官移植的供受体配型,皮肤组织工程等研究中.本文主要从核酸分子杂交、聚合酶链反应及相关技术、DNA序列测定、DNA芯片、连锁分析等方面对基因诊断方法研究进展进行了综述,分析其各自的优缺点,并在此基础上提出了对基因诊断方法研究前景的展望.相信随着分子生物学和分子遗传学的飞速发展必将极大的促进基因诊断技术的进步.以基因诊断为基础的基因治疗也将成为人类治疗自身疾病的主流技术.
-
聚合酶链反应-探针杂交-酶显色用于结核分支杆菌的检测
目的评价聚合酶链反应-探针杂交-酶显色方法,检测结核分支杆菌.方法收集131例活动性肺结核患者和30例非结核呼吸系疾病患者的痰标本以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查,结核菌培养、PCR-探针杂交-酶显色法、PCR-琼脂糖凝胶电泳技术检查对比.结果涂片法、培养法、PCR-探针杂交-酶显色法的敏感性分别为26.72%、41.22%、70.23%,PCR-探针杂交-酶显色法的敏感性显著高于培养法和涂片法(P<0.01).PCr-探针杂交-酶显色法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为70.23%、70.99%,特异性分别为96.67%、86.67%,前者特异性比后者高,且PCR-探针杂交-酶显色法只检出结核分支杆菌和牛型分支杆菌.结论PCR-探针杂交-酶显色技术检测结核分支杆菌灵敏度高,特异性好,简便快速,同时能筛检非结核分支杆菌.因此,该技术具有很强的临床应用价值.
-
PCR-微孔板反向杂交法在结核分枝杆菌检测中的应用
目的评价PCR-微孔板反向杂交法检测临床标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值.方法应用集菌涂片镜检法、培养法、PCR法、PCR-微孔板反向杂交法分别对55份肺结核病患者和30份非结核呼吸系统病患者痰标本平行检测.结果涂片法对结核病患者临床标本中MTB检出率为21.82%,培养法检出率为25.46%,PCR法检出率36.36%,PCR-微孔板反向杂交法检出率47.27%.对30例非结核呼吸系统疾病患者检测MTB,PCR法出现2例假阳性,其余3种方法均阴性,PCR-微孔板反向杂交法比单纯PCR法灵敏度高、特异性强.结论PCR-微孔板反向杂交法具有简便、快速、抗污染、灵敏度高、特异性强的优点,缺点是存在假阴性,应改进标本前处理方法,在对结核病的辅助诊断中应与细菌学方法相结合,以提高检出率.
-
利用寡核苷酸芯片鉴定多种肠道致病菌方法的建立与初步应用
目前,临床上对腹泻样本的检测主要依靠传统的细菌学培养及生化鉴定,操作方法繁琐,检测周期较长,而利用分子生物学方法如PCR、探针杂交等及免疫学方法也存在特异性差和灵敏度低等问题[1].
-
应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA
由于DNA探针杂交反应特异性高,国内外研究者已采用DNA探针杂交技术检测结核分枝杆菌.但该检测方法敏感性较低,通常采用与聚合酶链反应(PCR)扩增相结合的方法.但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会.
-
病毒性肝炎基因诊断芯片的临床检测
肝炎基因诊断芯片是将肝炎病原体的特征性基因片段或基因组成设计的探针序列,以微矩阵型密集排列在经过特殊处理的玻片上[1].把待测血液、分泌物等标本中抽提出的微量肝炎病原体的DNA或RNA荧光标记后与探针杂交,用特有的荧光波长扫描芯片,得到肝炎病原体基因的图片,再经计算机软件分析出这些肝炎病原体基因在标本内的分布情况.我们用基因诊断芯片对40例乙型肝炎患者、20例丙型肝炎患者及30例正常人血清进行了双盲检测,现将结果报告如下.