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增强RACE文献资料
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增强型RACE技术克隆辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1
目的在获得了辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1 EST序列的基础上获得全长cDNA.方法RT-PCR方法对RS1基因进行表达谱分析,找到表达丰度较高的组织提取总RNA作为模板,应用增强RACE技术即结合生物素探针富集靶cDNA的方法克隆RS1的cDNA末端.结果克隆到RS1片段3′端约2kb的序列.该序列5′端包含已知的RS1片段,3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子.明确了RS1的正、负链及其蛋白编码方向,为RS1 5′端的克隆提供了必要信息.结论结果与本实验的设计完全一致,说明这一方法对从表达丰度低,难以设计佳基因特异性引物的EST序列克隆其对应的全长cDNA是可行的,同时为下一步研究RS1在小鼠肠上皮辐射应激反应中的作用和被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础.
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非克隆cDNA文库与RACE技术克隆小剂量辐射诱导新基因RIG1
目的在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1 EST片段的基础上,简便、有效地获得其全长cDNA,进行下一步的基因功能研究.方法结合应用非克隆cDNA文库技术及增强RACE技术,设计了巢式RACE PCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交、再次磁性分离的纯化流程.结果成功地克隆到RIG1 EST片段3′端约1 kb的序列,该序列3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子.进一步的分析明确了RIG1 EST的正、负链及其蛋白编码方向,为RIG1 5′端的克隆提供了大量可靠的信息,目前RIG1 5′端的克隆已得到很好的进展.结论所得结果与我们的设计完全一致,说明这一技术路线是简便可行的,为下一步研究RIG1基因在细胞辐射应激反应中的功能及被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础.
