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机体抗流感病毒免疫防御机制研究进展
流行性感冒是由流感病毒(Influenza virus)引起的严重危害人类健康的一种急性呼吸道传染病,在世界各国广泛流行.此类病毒经过呼吸道进入人体后,感染宿主细胞,诱导机体免疫应答,病程呈自限性.对流感病毒的发病机理以及引起机体免疫系统的变化及免疫应答的深入了解,将有助于了解流感病毒的致病机制,以采取更有效的治疗措施.本文将就流感病毒的发病机理、天然免疫应答、细胞免疫应答及体液免疫应答等方面进行综述.
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戊型肝炎病毒重组颗粒性蛋白疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答研究
HEV 239是福建省医学分子病毒学研究中心实验室研制的一种戊型肝炎病毒(HEV)重组颗粒性蛋白疫苗,该文旨在研究HEV239蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况.将5μg HEV 239蛋白疫苗(239-Pro)、加铝佐剂疫苗(239-Vac)或加弗氏佐剂疫苗(239-CFA)肌肉注射免疫BALB/c鼠3次,第8周检测鼠血清抗HEV抗体及其亚类,同时用ELISPOT方法检测细胞毒性T细胞(CTL)应答.结果显示:239-Vac诱导的抗体滴度与239-CFA相当,高于无佐剂的239-Pro.239-Vac诱导的抗体中,IgG1/IgG2a比值显著高于239-CFA和239-Pro,主要为Th2型应答.除239-CFA之外,239-Vac和239-Pro也可诱导出一定的HEV抗原特异性I型Tc应答.提示:重组抗原HEV 239能诱导良好的抗体应答及一定的Tc1应答.
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IL-12增强HBV融合抗原DNA疫苗在小鼠诱导的细胞免疫应答
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)极易形成慢性感染,主要机制在于感染者不能产生强有力的细胞免疫应答以清除病毒[1].慢性HBV感染者体内虽然存在HBV抗原特异性T淋巴细胞,但对HBV抗原的反应性较低.研究发现,增强这类T淋巴细胞的反应性,可以促进HBV的清除[2].
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白色念珠菌感染免疫应答的研究进展
白色念珠菌的致病是其与机体免疫系统相互作用的结果.研究发现,白色念珠菌感染人体时,刺激机体产生固有免疫及特异性细胞免疫和体液免疫应答.其中特异性细胞免疫占主导地位.了解认识白色念珠菌感染的免疫应答对诊断、预防及治疗白色念珠菌感染具有重要意义.
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和缓艾美耳球虫激发宿主免疫应答的初步研究
和缓艾美耳球虫 Eimeria mitis是7种鸡球虫中致病力弱的虫种，对于其免疫原性的认识至今仍有争论。本研究以和缓艾美耳球虫涿州株为研究对象，以初次免疫及二次免疫后鸡的卵囊排出量为标准评估了其免疫原性。同时利用ELISA检测了免疫后鸡群血清中球虫特异性IgY抗体的水平，并通过ELISPOT技术分析了二免后鸡群外周血单核淋巴细胞（ PBMC）中分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞的数量。结果显示，二次免疫后，鸡的卵囊排出量显著低于初次免疫，免疫组的血清特异性IgY抗体水平较低，而分泌IFN-γ的特异性淋巴细胞的数量较高。这些结果表明和缓艾美耳球虫涿州株具备良好免疫原性，且其激发宿主产生的保护性免疫以细胞免疫应答为主，有作为疫苗株的潜力。
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弓形虫主要表膜抗原SAG2 DNA疫苗的免疫保护作用研究
目的观察弓形虫pVAX1-SAG2真核重组质粒的免疫保护作用,为弓形虫病的免疫预防提供理论及实验依据. 方法大量制备重组质粒,免疫小鼠,3周后同量加强免疫1次, 5周后无菌取小鼠脾脏,制备脾细胞,用MTT法测定淋巴细胞转化率;用免疫荧光法测定CD4+、CD8+细胞.用弓形虫RH株速殖子经皮下注射攻击感染,每只鼠接种0.1 ml (约含1000个虫体) ,观察小鼠存活情况. 结果对小鼠的脾脏T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+进行分析,与对照组比较,免疫组小鼠CD4+细胞显著增多(P<0.05);而CD8+细胞数各组之间差异无显著性(P>0.05);淋巴细胞转化率各组间差异无显著性(P>0.05);攻击感染后, pVAX1-SAG2免疫组小鼠平均存活(7.8±1.8) d,与对照组比较显著延长(P<0.05). 结论弓形虫pVAX1-SAG2真核重组质粒能在组织内表达,并诱导小鼠产生细胞免疫反应.
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EB病毒潜伏膜蛋白1诱导细胞免疫的研究进展
Epstein-Barr Virus(EBV)是1964年Epstein等发现的.研究证实EB病毒与许多人类肿瘤相关.潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP1)是EBV编码的潜伏感染过程中表达的病毒膜蛋白,是较早被确认的病毒癌基因之一.近期研究发现LMP1的氨基酸序列中存在诱导细胞免疫应答的多肽表位.可以诱导LMP1特异性细胞免疫反应.本文就LMP1在细胞免疫应答方面的研究做一介绍.
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不同种类乙型肝炎表面抗原诱导小鼠早期细胞免疫应答的比较
目的 比较不同表达系统来源的乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)免疫小鼠诱导早期脾淋巴细胞抗原特异性细胞免疫应答的特点,探讨影响乙肝疫苗保护效果的因素.方法 3种HBsAg(汉逊酵母、CHO细胞和血源)分别皮下接种不同组小鼠(BALB/c,H-2d),每只3μg,于免疫后4d分离脾单个核细胞(MNC),经细胞分选仪(MACs)分选后,获得纯度高于90％的CD4+和CD8+T细胞,应用ELISPOT测定MNC、CD4+和CD8+T细胞体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点数( SFC).结果 细胞分选后,汉逊抗原诱导CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平和CD4+T细胞分泌IL-2水平均显著高于CHO抗原组(8/10、2/10,P=0.035;6/10、0/10,P=0.005).汉逊抗原组与血源抗原组CD8+T细胞经体外刺激诱导IFN-y全部阳转(10/10),但分泌水平上汉逊抗原组显著高于血源抗原组(t=2.479,P=0.035)；汉逊抗原组诱导CD4+T细胞IFN-γ阳转率及分泌水平均显著高于血源抗原组(10/10、4/10,P=0.005；t=3.967,P=0.003).结论 乙肝抗原免疫小鼠4d即可诱导细胞免疫应答,且汉逊酵母抗原早期诱导抗原特异性IFN-γ、IL-2的能力显著高于CHO和血源抗原,与其临床考核母婴传播阻断HBV保护率显著优于CHO和血源乙肝疫苗相一致,为及时接种乙肝疫苗的必要性和高危新生儿选择接种乙肝疫苗的类型提供依据.
关键词： 乙型肝炎 表面抗原 细胞免疫应答 酶联免疫斑点法(ELISPOT) -
重组沙门菌表达结核分枝杆菌ESAT-6及其特异性免疫应答分析
目的 分析重组沙门菌表达的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌性蛋白ESAT-6诱导的特异性免疫应答.方法 将ESAT-6蛋白编码基因导入原核表达载体pYA3333中,构建重组质粒pYA33-esat.通过电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550,获得重组菌X4550(33-esat).以每只105CFU剂量的重组菌滴鼻免疫C57BL/6小鼠,间隔18 d,在第2次免疫后10 d取免疫小鼠脾脏、肺脏、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node,MLN)及派伊尔淋巴集结(Peyer's patch,PP)细胞,以ESAT-6多肽作为刺激原,检测特异性的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞.同时,运用CFSE方法榆测了体内抗原特异性CTL效应.结果 经沙门菌表达并运送的Mtb抗原ESAT-6能诱导特异性的免疫应答.在肺脏及PP细胞巾,检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞,免疫应答以Th1型为主.而在脾脏和MLN中,免疫应答呈现Th1/Th2混合应答.此外,体内CTL试验表明,重组菌能够诱导抗原特异的CTL效应,且特异性杀伤率为69.9%.结论 以滴鼻方式接种重组沙门菌,不仅能够诱导ESAT-6蛋白特异性的细胞免疫应答,还能激发特异的CTL效应,为结核病的防控提供了新的认识.
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survivin的研究进展
survivin基因是一种与肿瘤高度相关的凋亡抑制基因,其所表达的蛋白抑制细胞凋亡、促进细胞增生,同时对肿瘤患者特异性细胞免疫应答的激活和肿瘤血管的形成也有一定作用,其剪接体的问世更为它提供了崭新的研究价值.研究发现survivin复杂的功能与其在细胞中的定位表达是密切相关的.survivin剪接体的亚细胞定位和功能也在不断的探讨中.对survivin及其剪接体的作用机制和在肿瘤发生、诊断、放化疗中的作用进行了阐述.
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白癜风患者淋巴细胞对自身抗原表位肽的免疫应答研究
目的：探讨进展期白癜风患者的细胞免疫功能。方法对门诊收集的102例进展期白癜风患者进行HLA-A位点分型，应用ELISPOT实验，采用已知的5条白癜风相关的表位肽段刺激患者外周血单个核细胞，通过斑点形成细胞数目分析患者外周血中针对特异抗原的细胞免疫应答水平，分析比较治疗前后的变化，确定白癜风患者细胞免疫应答与疾病进展有无相关性。结果38.24%(39/102)白癜风患者为HLA-A*0201限制性。HLA-A*0201限制性患者外周血淋巴细胞针对自身表位肽段有高水平的免疫应答。经过有效治疗后，免疫应答有所下降。结论汉族白癜风患者外周血淋巴细胞对已知的白癜风自身抗原表位存在特异性细胞免疫应答，这种免疫应答水平可能与疾病活动相关。
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结核病Mtb8.4基因疫苗构建、表达及诱导的细胞免疫应答
目的制备结核病Mtb8.4基因疫苗,并研究其免疫原性.方法克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Mtb8.4,转染COS-7细胞后,用RT-PCR检测Mtb8.4基因在细胞内正确表达.将Mtb8.4基因疫苗肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第3次DNA免疫后4周,处死小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100:1、50:1、10:1进行CTL杀伤检测.结果Mtb8.4基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量分别为787.317±45.586pg/ml和319.953±57.978pg/ml,BCG组分别为1 486.540±39.600pg/ml和767.043±50.269pg/ml,BCG组IL-4的含量为90.580±10.998pg/ml,明显高于其他各组(P＜0.01).效靶比为100:1、50:1、10:1时,Mtb8.4基因疫苗组的CTL活性分别为55.3%、35.7%、9.2%,BCG组分别为28.9%、21.4%、9.8%.Mtb8.4基因疫苗主要使抗原特异性Th1型细胞免疫应答增强,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,CTL活性增加;而BCG使IFN-γ、IL-2和IL-4分泌均增加.结论结核病Mtb8.4基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,可作为结核病的候选疫苗.
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淋巴细胞亚群与乙型肝炎病毒感染
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全球重大的公共卫生问题,是造成慢性肝炎和肝病的主要病因之一.包括我国在内的亚洲地区为HBV感染的高流行区,面临的乙肝流行趋势更为严峻[1].尽管目前对乙型肝炎发病机制的认识还不完善,但普遍认为HBV病毒本身不具有细胞毒性,机体感染后出现的炎症反应和病理损伤主要与病毒作用下的机体免疫反应有关.其中,细胞免疫应答尤其是HBV特异性T淋巴细胞应答,对于病毒清除和疾病转归均有重要意义[2].随着研究技术的不断进展,对这些淋巴细胞数量和功能的体外研究,逐步推进了人们对于急慢性HBV感染发病机制的认识,对于临床诊治的指导意义重大.
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炎性树突状细胞的功能特性及在支气管哮喘发病机制中的作用
树突状细胞是功能强的专职抗原递呈细胞,作为机体免疫应答的启动者在免疫应答中占有重要地位.研究显示在感染或炎症状态下由炎性单核细胞分化而来的一种树突状细胞亚型——炎性树突状细胞,参与调节免疫应答.近来,炎性树突状细胞在支气管哮喘发生机制中的作用备受关注,现就炎性树突状细胞在不同类型免疫应答的作用及其与支气管哮喘的关系作一综述.
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浅低温对肺癌根治术患者Th1/Th2型细胞因子的影响
恶性肿瘤患者术前存在着不同程度的免疫功能抑制,手术、麻醉和低体温等又可进一步加重免疫功能的抑制,使术后感染和肿瘤复发、转移的概率增加.手术过程中由于麻醉、环境温度、体腔暴露等因素导致患者核心温度降低,处于浅低温状态[1].浅低温可诱导IL-2、IL-10等细胞因子的表达发生变化[2],该作用可能与其抑制免疫功能有关.机体抗肿瘤免疫主要是细胞免疫,Th1/h2型细胞因子是细胞免疫应答调节中的关键环节.本研究拟探讨浅低温对肺癌根治术患者Th1/Th2型细胞因子的影响,进一步研究浅低温对恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响.资料与方法本研究已获本院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书.拟行肺癌根治术的患者,年龄30～64岁,体重50 ～ 70kg,性别不限,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,TNMⅡ或Ⅲa期,术前未行放化疗,围术期无发热,预计术中失血量＜500 ml,采用随机数字表法,将患者随机分为2组:常温组(Ⅰ组)和浅低温组(Ⅱ组).
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甲氨蝶呤与肿瘤坏死因子-α拮抗剂对类风湿关节炎或脊柱关节病患者EB病毒T细胞应答与病毒载量的影响
类风湿关节炎(RA)患者患淋巴瘤的风险是其他人群的2～3倍,而免疫抑制剂在淋巴瘤发生风险中的影响存在较多争议.Pary等研究了甲氨蝶呤(MTX)或肿瘤坏死因子(TNF)-α拮抗剂治疗的RA或脊柱关节病(SPA)患者中EB病毒载量及EB病毒特异性的T细胞免疫应答的变化(Arthritis Res Therapy,2009,11:R77).
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CpG-ODN增强乙型肝炎病毒转基因小鼠对重组乙肝疫苗的细胞免疫应答
[目的] 探讨CpG-ODN作为佐剂对重组乙肝疫苗诱导乙肝病毒转基因小鼠产生细胞免疫应答的影响. [方法] 用重组干扰素(rIFNα-2b)、重组乙肝疫苗(rHBs vaccine)和重组乙肝疫苗+CpG-ODN分别免疫HBV转基因小鼠后,流式细胞仪检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群,ELISA法检测免疫小鼠的外周血IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量,MTT法和乳酸脱氢酶法分别检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖和杀伤功能. [结果] 重组乙肝疫苗组CD3+、CD4+、CD8+细胞在T细胞中所占百分比分别为(25.008±2.852)%、(13.640±1.616)%、(9.989±1.123)%均明显高于对照组,(P<0.05);IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量分别为(1304.288±572.212)pg/mL、(203.810±91.807)pg/mL、(860.736±336.888)pg/mL均明显高于对照组,(P<0.05);淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应与对照组相比均有明显差异,(P<0.05).疫苗+CpG-ODN组与疫苗组比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答(P<0.05),且以Th1型细胞免疫应答为主.而干扰素组由于给药次数和剂量等原因,与对照组无显著差异.[结论] CpG-ODN作为佐剂可以较好的增强重组乙肝疫苗诱导HBV转基因小鼠产生细胞免疫应答.
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大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)诱导小鼠Th1细胞的活化作用
目的:探讨MBP对小鼠T细胞的调节作用.方法:采用淋巴细胞分层液分离小鼠脾脏淋巴细胞,在体外用MBP刺激淋巴细胞,通过MTT法测定淋巴细胞增殖反应;ELISA检测脾细胞培养上清中细胞因子的分泌水平;MBP免疫小鼠后,ELSPOT检测MBP刺激脾淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞频数;免疫组化检测MBP与T细胞的结合作用.结果:MBP以剂量依赖关系促进小鼠淋巴细胞的增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,轻微抑制IL-4的分泌;ELSPOT检测细胞分泌IFN-γ结果显示,MBP可诱导特异性Th1活化,也可刺激非特异性Th1活化;免疫组化结果显示,抗MBP抗体可与经MBP刺激的淋巴细胞发生反应,阳性细胞占总淋巴细胞的37.7%,当MBP采用 1∶2 000抗MBP抗体中和后,再与淋巴细胞反应,结果未见阳性细胞.结论:MBP可作用于淋巴细胞诱导非特异性Th1活化,也可通过免疫诱导大量特异性Th1活化;MBP可作为新的免疫增强剂开发利用.
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含HBV PreS2/S的抗体化乙肝基因疫苗可增强乙肝病毒特异性CTL应答
目的:构建乙肝病毒抗原PreS2/S和抗体Fc段的融合分子,观察该抗体化的乙肝疫苗诱导特异性细胞免疫应答的能力及状况.方法:用PCR的方法扩增乙肝病毒抗原PreS2/S和鼠IgG1 Fc段基因,依次克隆到载体上;体外转染小鼠肌细胞,观察表面抗原转录水平和蛋白水平的表达情况;基因免疫小鼠,观察其诱导的特异性CTL免疫应答状况.结果:基因克隆融合分子经酶切和测序鉴定构建成功;体外转染实验表明融合分子可以在肌肉细胞中表达;免疫小鼠脾脏细胞用特异性抗原刺激后能产生很强的细胞免疫应答,其中特异性CTL反应明显增强.结论:基于抗体Fc段的抗体化乙肝疫苗能增强机体对HBV的特异性CTL反应,有利于打破HBV感染导致的免疫耐受.
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CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用
目的:研究CpG2216佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的细胞免疫应答的作用.方法:重组RSV疫苗G1F/M2与CpG2216佐剂混合,或与CpG2216及常规佐剂Al(OH)3混合,鼻腔(i.n.)或腹腔注射(i.p.)免疫BALB/c小鼠三次,后一次免疫后2周杀小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞特异性杀伤活性;用ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+/CD8+效应及LDH记忆细胞.结果:与G1F/M2相比,CpG+G1F/M2鼻腔或腹腔注射免疫均诱导了显著的杀伤活性;而且G1F/M2+Al+CpG(i.p.)诱导的杀伤活性显著高于CpG+G1F/M2(i.p.).ELISPOT结果显示:CpG+G1F/M2鼻腔免疫和腹腔注射免疫组的分泌IFN-γ和IL-4的淋巴细胞数量明显多于G1F/M2组;CpG+Al+G1F/M2(i.p.)组的细胞数显著多于CpG+G1F/M2(i.p.)组;且各组分泌IFN-γ的淋巴细胞数显著多于分泌IL-4的淋巴细胞,即均诱导了Th1型优势应答,有利于宿主抗病毒.流式细胞仪检测结果表明:CpG+G1F/M2(i.n.)仅诱导CD44+单阳性的细胞,而CpG+G1F/M2(i.p.)和CpG+Al+G1F/M2(i.p.)既诱导产生了CD44+单阳性细胞,也产生了CD44+CD62L+双阳性的记忆细胞.结论:CpG2216作为RSV重组疫苗G1F/M2的佐剂,可显著增强细胞免疫应答.
关键词： CpG2216 佐剂 呼吸道合胞病毒(RSV) 重组蛋白疫苗 细胞免疫应答
