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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞早期凋亡的影响
目的:探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞早期不同时点凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响.方法:采用细胞培养、血清药理学、流式细胞术等实验技术检测金欣口服液含药血清抗RSV,影响细胞早期凋亡作用途径的影响.结果:RSV感染人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞12、24h后凋亡率均低于细胞对照组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比例逐步上调,金欣口服液作用后,凋亡率明显高于病毒组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显低于病毒组(P＜0.05).结论:金欣口服液在RSV感染早期,可能通过调控凋亡相关基因拮抗其抑制细胞凋亡的作用,从而影响进入细胞内的病毒复制增殖的过程,阻止病毒的扩散.
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呼吸道合胞病毒在不同龄期BALB/c小鼠上的感染差异
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是全世界范围内引起下呼吸道感染的主要病原体,主要高危人群为六个月以下新生儿及65岁以上人群.目前BALB/c小鼠是RSV感染的有效动物模型,但不同周龄BALB/c小鼠感染RSV后的差异性尚未有报道.本研究分别选择10、30、60周龄BALB/c小鼠,在鼻腔接种106及107PFU RSV后,对不同龄期小鼠临床一般症状、体重、鼻/肺部病毒滴度及肺组织炎症病理变化进行检测及比较.结果显示感染106 PFU RSV后小鼠未出现明显的体重下降,而107 PFU RSV感染后能有效引发小鼠在感染后6-11天出现明显的体重下降.检测结果显示,在107 PFU感染的小鼠的鼻、肺组织能够检测到明显的病毒复制,肺部免疫组化显示病毒主要定位于肺泡周围,炎症观察结果显示出明显的肺部炎症细胞浸润及组织病理损伤.同时本研究还观察到随着小鼠周龄的增大,感染后体重下降越明显,并能检测到更为明显的肺部病毒及验证损伤.这些结果显示出本研究成功建立了不同周龄BALB/c小鼠RSV感染差异模型,为不同年龄人群RSV感染免疫机制的深入探讨及RSV相关抗体和疫苗药物的选择、评估提供依据.
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 动物模型 Balb/c小鼠 周龄 支气管炎 -
人呼吸道合胞病毒疾病增强发生机制的研究进展
人呼吸道合胞病毒 (Human respiratory syncytial virus, hRSV) 是一种可以引起严重下呼吸道疾病的病原体, 易感人群为婴幼儿、老年人及免疫力低下者.目前尚无针对RSV的疫苗和特异性抗病毒药物.20世纪60年代, 用RSV的福尔马林全病毒灭活疫苗 (FI-RSV) 免疫的婴幼儿发生了免疫后RSV疾病增强的症状, 其特征为免疫后当再次发生天然感染时会引起高热、支气管肺炎和哮喘, 从而引发了更高的住院率, 并终导致两名FI-RSV免疫接种后感染RSV的幼童死亡.增强的RSV疾病 (Enhanced RSV disease, ERD) 主要表现为支气管周围以嗜酸性粒细胞为主的过量的单核细胞浸润以及非保护性抗体应答和细胞毒性T淋巴细胞功能异常等免疫反应.近年来, RSV研究领域正发生着重大变化, 许多具有新颖设计的候选疫苗正在纷纷进入临床试验, 因此我们要更加重视对ERD发生机制和临床特征的理解和分析.本文提供了对ERD发生机制的概括性描述, 并对ERD作为新型候选疫苗的重要评价指标进行了讨论.
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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞早期凋亡调控基因mRNA影响的研究
目的:探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞早期凋亡及Bcl-2和Bax mRNA表达的影响.方法:采用细胞培养、血清药理学、流式细胞术和RT-PCR等实验技术检测金欣口服液含药血清抗RSV,影响细胞早期凋亡作用途径的变化.结果:RSV感染人胚肺成纤维细胞(HELF)12和24 h后细胞凋亡率均低于未感染细胞对照组(P<0.05),RSV攻击宿主细胞24 h后,Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量上升,但不足2倍增长.金欣口服液作用后,凋亡率明显高于病毒组(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量上升≤0.5.结论:金欣口服液在RSV感染早期,可能通过调控凋亡相关基因拮抗其抑制细胞凋亡的作用,从而影响进入细胞内的病毒复制增殖的过程,阻止病毒的扩散.
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CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导体液免疫应答的作用
目的 研究CpG 2006佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的体液免疫应答的作用.方法 重组RSV疫苗G1F/M2与CpG佐剂混合,鼻腔或腹腔注射免疫BALB/c小鼠3次,后一次免疫2周后取血,分离血清,用间接ELISA检测特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a水平.结果 鼻腔免疫途径:CpG佐剂组诱导的IgG1均显著低于无佐剂组(t=3.365,P＜0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.675,P＜0.05),佐剂组IgG1/IgG2a的比值(1.05)明显低于无佐剂组(1.25).腹腔免疫途径:CpG佐剂组的IgG1明显低于无佐剂组(t=6.869,P＜0.05),而IgG2a显著高于无佐剂组(t=2.893,P＜0.05),且前者IgG1/IgG2a的比值(0.97)明显低于后者(1.30).结论 CpG 2006作为G1 F/M2的佐剂,对体液免疫应答无增强作用,但可以调节免疫应答的类型,使Th1型应答升高,Th2型应答降低.
关键词： CpG 2006 佐剂 呼吸道合胞病毒(RSV) 重组蛋白疫苗 体液免疫应答 -
白细胞介素4及其受体在呼吸道合胞病毒所致婴幼儿肺炎中的相关性研究
目的:探讨IL-4及其受体(IL-4R)在呼吸道合胞病毒所致婴幼儿肺炎中的相关性.方法:应用酶联免疫吸附试验检测45例呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎患者及51例正常对照组中血清中的IL-4及IL-4R浓度.结果:(1)RSV肺炎组和正常对照组中IL-4浓度分别为(294.68±90.65)ng/L和(146.75±37.26)ng/L,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).(2)RSV肺炎组和正常对照组中IL-4R浓度分别为(17.60±13.80)μg/L和(7.47±4.29)μg/L两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:IL-4及IL-4R在RSV所致肺炎中含量明显增高,且随病情进展受体浓度增加,表明RSV肺炎病情的严重程度与IL-4及IL-4R含量增加呈正相关.
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盐酸阿比朵尔对呼吸道合胞病毒活性抑制作用
目的 探讨盐酸阿比朵尔(Ahyd)抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 应用不同浓度及不同的给药方式探讨Ahyd对RSV抑制作用的机理,噻唑蓝(MTT)法检测各实验组病毒感染细胞的存活率,采用RT-PCR方法检测各实验组RSV的相对变化量.结果 病毒组细胞存活率为20.2％,Ahyd试验组病毒感染细胞的存活率高可达71.8％,在无毒范围内呈剂量依赖性;RT-PCR结果显示,病毒对照组的2-△△Ct为9.33,Ahyd试验组的2-△△Ct低可降至3.21.结论 Ahyd对RSV感染具有较强的抑制作用.
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中医药防治RSV感染的研究进展
综述了近年关于中医药防治RSV感染的临床和实验室研究.其中单味药以麻黄、莪术、柴胡等为主,中药复方则以自制方药为多,从抑制或对抗RSV,改善血液循环,调节机体免疫能力的角度进行较深入的研究.在给药途径方面,列举了3种方法:静脉,雾化吸入,直肠给药.
关键词： 中医药 呼吸道合胞病毒(RSV) -
3种治法对RSV诱导的肺炎小鼠炎性细胞因子的表达及TLR-4/NF-κB信号通路调控研究
目的:探讨3种治法代表方剂对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导引起肺炎的小鼠血清IL-6、IL-8及肺组织Toll样受体4(TLR4)、细胞核转录因子(NF-κB)的影响,揭示其治疗机制.方法:将Wister小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、银翘散组、玉屏风散组、银屏散组.于感染前3d,玉屏风散组、银屏散组连续给予玉屏风散(7.5 g· kg·d-1)3 d;除正常组以外,50 μL 10 LD50病毒液滴鼻建立呼吸道合胞病毒感染的小鼠RSV肺炎模型.感染2h后,银翘散组、银屏散组继续给予银翘散治疗(10 g·kg·d-1),连续给药3d;采用ELISA法检测各组小鼠血清中IL-6、IL-8含量,免疫组化法检测分析肺组织TLR4、NF-κB P65蛋白的表达.结果:与正常组比较,RSV感染诱导小鼠肺组织中TLR4蛋白表达上调,增加NF-κB的活化(P＜0.05),使血清中IL-6、IL-8水平升高(P＜0.05).银翘散组、玉屏风散组、双表法组测得IL-6、IL-8含量以及TLR4、NF-κB P65表达相较于模型组显著减弱(P＜0.05).与利巴韦林组比较,双表法组减弱尤为突出(P＜0.05).结论:3种治法对于治疗RSV肺炎均有显著疗效,尤其以双表法疗效更佳.其作用机制可能与抑制炎症因子IL-6、IL-8分泌及阻断TLR4/NF-κB信号通路有关.
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 3种治法 病毒性肺炎 ELISA 免疫组化 -
鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究
目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,后选择鸭跖草75％乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究.方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用.结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75％乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75％乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7.结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持.
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RSV感染幼龄大鼠肺组织TSLP与Th2反应的相关性分析
目的:通过观察当呼吸道合胞病毒(RSV)感染幼龄大鼠肺组织时胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)与IL-4、IL-10和IL-13的变化,探讨TSLP与Th2反应的相关性.方法:将18只正常Wistar大鼠随机分为模型组和正常对照组,每组各9只.应用RSV病毒液滴鼻造模,生理盐水滴鼻做对照.取大鼠肺部组织进行病理切片观察炎症反应情况;运用实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)分别检测两组大鼠不同时间点合胞病毒载量情况和肺组织TSLP在基因水平的表达情况,同时采用免疫印记法(Western blot)检测肺组织TSLP在蛋白水平的表达情况;同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中Th2型相关细胞因子IL-4、IL-10和IL-13的表达水平;并对TSLP与L-4、IL-10、IL-13的关系进行Spearman相关分析.结果:与正常对照组相比,模型组大鼠在滴鼻感染后出现精神状态差、毛粗糙、活动减少、呼吸短促等症状,且上述症状进行性加重;病理观察显示模型组大鼠可见肺泡壁明显增厚,肺间质可见大量的浆细胞、淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞浸润;q-PCR法检测模型组大鼠合胞病毒载量逐渐增加,在第5天左右达到峰值,后逐渐降低;RSV感染促进大鼠体内TSLP表达水平增加,q-PCR法和Western blot法检测显示:模型组大鼠的TSLP浓度均高于对照组(P<0.05);同时ELISA检测表明模型组大鼠血清中IL-4、IL-10和IL-13的浓度均高于对照组(P<0.05);Spearman相关分析显示RSV模型组大鼠的TSLP与IL-4和IL-10表达水平均呈正相关,TSLP与IL-13表达水平无相关性.结论:RSV感染Wistar大鼠肺组织时,可诱导TSLP表达水平增加,同时促进Th2型炎症反应的发生及相关细胞因子的表达,为进一步研究RSV感染致毛细支气管炎和哮喘等喘息类疾病的作用机制及临床治疗奠定了基础.
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RSV CTL表位与G蛋白片段的融合表达对G蛋白片段诱导的免疫应答的调节作用
目的:观察呼吸道合胞病毒(RSV)的CTL表位F/M2与G蛋白抗原活性片段G1融合表达后,对G1诱导的免疫应答的调节作用.方法:将重组表达质粒pET-DsbA-G1和pET-DsbA-G1F/M2分别转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白DsbA-G1和DsbA-G1F/M2,亲和层析纯化.取上述蛋白,腹腔注射免疫BALB/c小鼠,定期采集血清和脾细胞,用MTT法测定CTL杀伤活性,ELISA测定IgG及其亚类IgG1和IgG2a抗体滴度,空斑抑制实验检测血清中和抗体.结果:经表达和纯化获得了纯度达90%以上的融合蛋白;DsbA-G1F/M2诱导了显著的RSV特异性CTL杀伤活性,而无CTL表位的DsbA-G1则不能诱导产生CTL反应;DsbA-G1F/M2和DsbA-G1均刺激产生了强烈的IgG抗体应答,但DsbA-G1所产生的IgG亚类仅为IgG1,而DsbA-G1F/M2同时诱导了高滴度的IgG1和IgG2a,显著下调了IgG1与IgG2a的比例;二者均诱导了高滴度的中和抗体,但与DsbA-G1相比,DsbA-G1F/M2所诱导的中和抗体滴度有所减弱.结论:CTL表位F/M2与G蛋白片段G1的融合表达产物DsbA-G1 F/M2,能够同时诱导细胞免疫和体液免疫应答,CTL的激活下调了IgG1与IgG2a的比例,使得免疫应答更平衡,有利于改善该候选疫苗的安全性.
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CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用
目的:研究CpG2216佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的细胞免疫应答的作用.方法:重组RSV疫苗G1F/M2与CpG2216佐剂混合,或与CpG2216及常规佐剂Al(OH)3混合,鼻腔(i.n.)或腹腔注射(i.p.)免疫BALB/c小鼠三次,后一次免疫后2周杀小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞特异性杀伤活性;用ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+/CD8+效应及LDH记忆细胞.结果:与G1F/M2相比,CpG+G1F/M2鼻腔或腹腔注射免疫均诱导了显著的杀伤活性;而且G1F/M2+Al+CpG(i.p.)诱导的杀伤活性显著高于CpG+G1F/M2(i.p.).ELISPOT结果显示:CpG+G1F/M2鼻腔免疫和腹腔注射免疫组的分泌IFN-γ和IL-4的淋巴细胞数量明显多于G1F/M2组;CpG+Al+G1F/M2(i.p.)组的细胞数显著多于CpG+G1F/M2(i.p.)组;且各组分泌IFN-γ的淋巴细胞数显著多于分泌IL-4的淋巴细胞,即均诱导了Th1型优势应答,有利于宿主抗病毒.流式细胞仪检测结果表明:CpG+G1F/M2(i.n.)仅诱导CD44+单阳性的细胞,而CpG+G1F/M2(i.p.)和CpG+Al+G1F/M2(i.p.)既诱导产生了CD44+单阳性细胞,也产生了CD44+CD62L+双阳性的记忆细胞.结论:CpG2216作为RSV重组疫苗G1F/M2的佐剂,可显著增强细胞免疫应答.
关键词： CpG2216 佐剂 呼吸道合胞病毒(RSV) 重组蛋白疫苗 细胞免疫应答 -
肉桂醛对RSV感染宿主细胞凋亡的影响
目的：探讨肉桂醛对呼吸道合胞病毒感染的宿主细胞凋亡的影响。方法实验室培养Hela接种呼吸道合胞病毒，选用低、中、高浓度肉桂醛在不同作用方式下进行干预，设正常、病毒对照组，应用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与病毒对照组相比，正常细胞、不同浓度给药组的细胞凋亡率明显下降（P＜0.05）。结论肉桂醛在不同作用方式下对RSV有杀灭作用。通过细胞凋亡情况可以反映有效浓度的肉桂醛对RSV有杀灭作用。
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 细胞凋亡 肉桂醛 -
白藜芦醇对呼吸道合胞病毒复制相关周期的影响
目的 研究白藜芦醇对呼吸道合胞病毒(RSV)感染Hep-2细胞相关周期的影响,并探讨金欣口服液(麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、黄芩、虎杖)治疗RSV肺炎的物质基础.方法 构建RSV感染Hep-2细胞体外模型,分为白藜芦醇处理组与未处理组,并以没有感染RSV的正常细胞作为对照组；采用体外转录法、荧光定量PCR法(qPCR)及激光扫描共聚焦显微镜法分别检测白藜芦醇对RSV的RNA聚合酶转录活性、核酸复制及诱导Hep-2细胞融合效应的影响.结果 白藜芦醇在25 μmol/L的大无毒浓度下,能显著抑制RSV的RNA聚合酶活性,但对RSV复制、融合蛋白F表达无明显作用,亦不能抑制RSV介导的细胞融合效应.结论 白藜芦醇在金欣口服液的抗RSV效应中发挥作用不是通过干预RSV复制相关周期,需要进一步研究.
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 白藜芦醇 RNA聚合酶 融合蛋白F -
金欣口服液对RSV感染细胞TLR4及TNF-α表达的影响
目的 研究开肺化痰清热止咳中药金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的Hep-2细胞TLR4及该通路下游细胞因子TNF-α表达的影响.方法 制备血行药物成分溶液,作用于RSV感染的Hep-2细胞,通过RT-qPCR、免疫荧光标记结合激光共聚焦技术及ELISA法,分别观察分析细胞TLR4 mRNA、蛋白和相关细胞因子的表达水平,分析药物作用机制.结果 与病毒对照组比较,金欣口服液作用于RSV感染的Hep-2细胞后,TLR4 mRNA及蛋白表达显著降低,TNF-α表达显著降低,细胞病变程度减轻.结论 金欣口服液含药血清可以通过下调TLR4和TNF-α表达水平减轻感染RSV后Hep-2细胞的病变程度.
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RSV RNA检测在中医药治疗小儿RSV肺炎的病原学评价中的应用
目的 对中医药治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎进行病原学疗效评价. 方法 中医药治疗小儿RSV肺炎的临床试验按照GCP规范进行,应用实时荧光PCR技术检测RSV RNA. 结果 对67例入选病例治疗4、7、10 d的鼻咽部分泌物进行RSV检测, 结果 显示:实验组和对照组RSV d 4、d 7转阴比较,差异无统计学意义(P>0.05),d 10全部转阴.结论中医药治疗小儿呼吸道合胞病毒性肺炎,其病毒阴转率与对照组(西药组)没有差异.
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 实时荧光PCR 病原学评价 病毒性肺炎 -
江西省呼吸道合胞病毒G蛋白基因特征分析
目的 了解江西省流行的呼吸道合胞病毒(RSV)的G蛋白基因特征.方法 收集2005年-2007年流感样病例标本,进行RSV分离;对病毒G蛋白进行全基因序列测定,并与国际标准株进行比较,对G蛋白潜在的O-糖基化位点进行分析.结果 从4291份标本中分离到6株RSV.各分离株与A、B型标准株的氨基酸同源性分别为85.6％～87.6％和75.9％～ 76.7％;其3端基因高变区核苷酸序列与RSV GA2亚型的同源性高.分离株在人群免疫选择压力位点111、132、226、262、274、290、297位氨基酸上发生了变异,与A2株比较,众多的潜在的O-糖基化位点发生了改变.结论 2005年-2007年江西省RSV流行株属于GA2亚型,在G基因的人群免疫选择压力位点和糖基化位点有变异.
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呼吸道合胞病毒蛋白G基因l核苷酸分析
目的:对河南省呼吸道合胞病毒(RSV)进行分离与鉴定.方法:选择2006年冬季至2007年春季河南省部分医院急性呼吸道感染患者,采集咽拭子,利用Hep-2细胞和Vero细胞进行病毒分离,对分离株用特异性RTPCR鉴定;对鉴定阳性的RSV毒株进行蛋白G全基因序列测定,并进行同源性分析,构建基因进化树.结果:共分离到4株RSV毒株,各分离株之间核苷酸同源性92%～99%;与A型RSV标准参考株的核苷酸同源性为86%～92%,与B型RSV标准株的同源性为70%.结论:2006年河南省RSV流行株为A型.
关键词： 呼吸道合胞病毒(RSV) 黏附基因 -
柳兰叶凤毛菊等19种藏药提取物体外抗呼吸道合胞病毒活性的实验研究
目的 对19种藏药提取物进行体外抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)活性的筛选.方法 采用细胞病变效应法(cytopathogenic effect,CPE)观察药物对Hep-2细胞的大无毒浓度(TC0)和药物抑制RSV的致病变作用.结果 从19种藏药中筛选出柳兰叶凤毛菊Saussurea epilobioides Maxim提取物具有显著的抗RSV活性,其TC0大于500μg/ml,且在预防给药,直接灭活,给药治疗3种加药方式下均具有抗RSV活性,其中预防给药对RSV具有更好的抑制作用.结论 通过对19种藏药提取物的筛选,发现柳兰叶凤毛菊提取物具有抗RSV的活性.
关键词： 藏药 呼吸道合胞病毒(RSV) Hep-2细胞 柳兰叶凤毛菊
