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金欣口服液对RSV感染大鼠Ⅰ型干扰素及SOCS1/3表达的影响
目的:通过研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syneytial virus,RSV)感染大鼠肺组织细胞因子信号抑制因子1/3(suppressor of cytokine signaling1/3,SOCS1/3)蛋白的干预作用,探讨其抗RSV感染的可能机制.方法:SD大鼠70只,随机分为正常组,感染模型组,金欣口服液低、中、高剂量组(3.3,9.9,29.7 g·kg-1),预防组(提前2dig金欣口服液中剂量),利巴韦林组(24.5 g·kg-1),每组10只,除正常组外,滴鼻感染24 h造模,给药组每天给药2次,连续给药3d.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素IFN-α和IFN-β含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测RSV感染大鼠肺组织SOCS1,SOCS3 mRNA表达量的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理学变化.结果:与正常组比较,模型组RSV感染大鼠体内IFN-α和IFN-β含量明显升高,大鼠肺组织SOCS1,SOCS3 mRNA表达量明显升高(P＜0.05,P＜0.01),模型组大鼠肺组织病变较为明显;预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α的表达量高于模型组(P＜0.05),预防组、金欣口服液中剂量组、利巴韦林组IFN-β的表达量高于模型组(P＜0.01),金欣口服液高剂量组IFN-β的表达量高于模型组(P＜0.05),金欣口服液中、高剂量组SOCS1表达量低于模型组(P＜0.05),金欣口服液高剂量组和利巴韦林组SOCS3表达量高于模型组(P＜0.05),金欣口服液中剂量组SOCS3表达量高于模型组(P＜0.01).结论:金欣口服液可上调RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素的表达,并通过抑制SOCS1/3的表达,发挥抗病毒作用,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一.
关键词： 金欣口服液 呼吸道合胞病毒 Ⅰ型干扰素 细胞因子信号抑制因子1/3 -
金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠IFN-α表达的影响
目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c小鼠干扰素-α(IFN-α)表达的影响.方法:将BALB/c小鼠按RSV首次滴鼻至取标本时间分为三大组,每大组分别在RSV首次滴鼻后24,72,144 h后取支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法检测BALF中所含IFN-α浓度,观察金欣口服液对IFN-α表达的影响,利巴韦林为阳性对照.结果:RSV感染24 h后小鼠BALF中IFN-α的表达显著增高,其中金欣预防组(385.38±16.54) ng·L-1能上调IFN-α的表达(P＜0.01)；RSV感染72 h后小鼠BALF中IFN-α上调作用仍较显著,但是较之于24 h时IFN-α的表达明显有所下降,其中金欣治疗组(131.41±6.96)ng·L-1和金欣预防组(32.83 ±4.77) ng·L-1组均能上调IFN-α的表达(P＜0.01),且金欣治疗组上调作用更为明显(P ＜0.01)；RSV感染144 h后小鼠BALF中IFN-α的表达量显著减少(P＜0.01),金欣治疗组(14.21 0.80) ng·L-1下调IFN-α表达(P＜0.01).结论:在RSV感染早期,金欣口服液预防组和治疗组能显著上调BALB/c小鼠IFN-α的表达；随着感染时间延长,IFN-α表达下降,金欣口服液能进一步下调其表达水平,以促进机体恢复.
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基于血浆代谢组学分析金欣口服液治疗小鼠RSV肺炎的作用机制
目的:通过GC-MS技术分析BALB/c小鼠血浆内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的作用机制.方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,首次滴鼻2h后予金欣口服液(剂量27.6 g·kg-1·d-1)灌胃治疗,连续滴鼻3d后各组处死5只小鼠取肺组织行组织病理学检查,连续给药7d后采集各组小鼠的血浆,运用GC-MS检测(m/z 50 ～ 500)血浆内源性代谢物及其相对含量的变化,分析其可能参与的代谢通路.结果:RSV肺炎小鼠的血浆中共测得32种内源性代谢产物,其中乳酸、尿素、谷氨酰胺、葡萄糖、花生四烯酸和l,5-脱水山梨醇为差异代谢产物,主要与花生四烯酸、谷氨酰胺、丙酮酸的代谢通路有关.结论:金欣口服液治疗RSV肺炎可能与调节RSV感染导致的代谢紊乱相关.
关键词： 气相色谱-质谱联用 金欣口服液 血浆 呼吸道合胞病毒性肺炎 -
金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠JAK/STAT信号通路P-STAT1、P-STAT2调控的研究
目的:研究金欣口服液对RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素相关蛋白STAT1、STAT2和P-STAT1、P-STAT2表达的调控趋势.方法:将大鼠分为正常对照组(A组)、感染模型组(B组)、金欣口服液低剂量组(C组)、金欣口服液中剂量组(D组)、金欣口服液高剂量组(E组)、预防组(F组)、利巴韦林组(G组)7组,成功造模后,分别采用ELISA和RT-PCR检测各组大鼠肺组织内P-STAT1、P-STAT2和STAT1、STAT2的表达.结果:感染模型组较正常对照组、预防组和金欣口服液低剂量组未能上调大鼠体内P-STAT1和P-STAT2蛋白表达;而金欣口服液中、高剂量及利巴韦林组明显上调感染模型组RSV大鼠体内的P-STAT1和P-STAT2蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:实验表明金欣口服液可通过上调P-STAT1和P-STAT2的表达,诱导IFN的产生,发挥抗病毒作用.
关键词： 金欣口服液 呼吸道合胞病毒 信号转导及转录激活因子 信号通路 -
金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎幼大鼠白细胞介素-10及肿瘤细胞因子-α的调节作用研究
目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎幼大鼠炎症因子白细胞介素-10 (IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调节作用.方法:采用细胞培养、实验动物学、ABC-ELISA法等实验技术探讨金欣口服液对机体免疫的调节作用机制.结果:RSV感染大鼠后,促炎症细胞因子TNF-α明显下降(P＜0.05),抗炎症细胞因子IL-10的含量增加(P＜0.05),TNF-α/IL-10的比值较正常值降低(P＜0.05);金欣口服液实验组,TNF-α、IL-10含量均有不同程度的升高,其中以提前给药组增高为明显,高剂量组次之(P＜0.05),TNF-α/IL-10的比值增高,其中以低剂量组高,高剂量组次之.结论:金欣口服液抗RSV在上调促炎症细胞因子TNF-α含量的同时促进抗炎症细胞因子IL-10的释放,具有调节免疫失衡的作用,从而发挥抗病毒作用.
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金欣口服液血中移行成分体外抗呼吸道合胞病毒的研究
目的:通过研究金欣口服液血中移行成分的体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用,明确金欣口服液作用的物质基础.方法:采用细胞培养技术,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,以利巴韦林为阳性对照,观察金欣口服液血中移行成分槲皮素、虎杖苷、黄芩素、汉黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚在人喉癌上皮细胞(Hep-2)中对RSV的抑制作用,以治疗指数(TI)为评价指标.结果:在Hep-2细胞中槲皮素、虎杖苷、黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚对RSV具有直接灭活作用,TI分别为12.78、38.07、28.93、9.43、1.58,槲皮素、异鼠李素对RSV感染具有一定的治疗作用,TI分别为12.00、4.25,汉黄芩素对RSV感染有预防作用,TI为1.57.结论:槲皮素、虎杖苷、黄芩素、汉黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚是金欣口服液抗呼吸道合胞病毒的物质基础.
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金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达的影响
目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠Ⅰ型干扰素(IFN)-α/β表达的影响.方法:采用细胞培养、动物实验、ELISA(酶标记免疫吸附测定)法检测大鼠体内IFN-I表达量的变化.结果:金欣口服液预防组和中剂量组IFN-α表达量高于模型组(P＜0.05);金欣口服液高、中剂量组IFN-β表达量高于模型组(P＜0.05).结论:金欣口服液抗RSV的机制可能与其通过上调RSV感染宿主体内Ⅰ型干扰素的表达,从而发挥Ⅰ型干扰素的抗病毒效应有关.
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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞早期凋亡的影响
目的:探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞早期不同时点凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响.方法:采用细胞培养、血清药理学、流式细胞术等实验技术检测金欣口服液含药血清抗RSV,影响细胞早期凋亡作用途径的影响.结果:RSV感染人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞12、24h后凋亡率均低于细胞对照组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比例逐步上调,金欣口服液作用后,凋亡率明显高于病毒组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显低于病毒组(P＜0.05).结论:金欣口服液在RSV感染早期,可能通过调控凋亡相关基因拮抗其抑制细胞凋亡的作用,从而影响进入细胞内的病毒复制增殖的过程,阻止病毒的扩散.
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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染RAW264.7细胞Toll样受体3表达的调控作用
目的:通过研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)活化诱导的Toll样受体3(TLR3)的干预作用,探讨其治疗RSV肺炎可能的免疫学机制.方法:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,并设利巴韦林阳性对照,24h后收集细胞,Real time RT-PCR法测定TLR3 mRNA的表达变化；激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学染色法处理的各组细胞TLR3表达水平；ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)含量,在核酸及蛋白水平探讨金欣口服液含药血清抗RSV感染的作用机制.结果:RSV感染RAW264.7细胞后24h,细胞中TLR3 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清中IL-6表达明显升高(P＜0.01),而金欣组TLR3及IL-6表达均显著低于RSV感染组(P＜0.01,P＜0.05),且效果优于利巴韦林组(P＜0.01,P＜0.05).结论:金欣口服液含药血清能下调RSV活化诱导的TLR3及其下游炎症因子IL-6的高表达,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一.
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金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠RIG-Ⅰ信号传导通路的影响
目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中RIG-Ⅰ信号传导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制.方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液灌胃给药进行干预,于首次滴鼻后24 h、72 h、144 h取各组小鼠肺组织,Real time RT-PCR分别检测RSV-M、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β在mRNA水平的表达情况,Western Blot检测RIG-Ⅰ和IPS-Ⅰ在蛋白水平上的表达情况.结果:RSV感染24 h和72 h后,其肺组织中RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β的表达均较正常组显著升高,金欣口服液不同剂量组RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β表达较RSV组明显下调;144 h后,RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β表达量显著下调,金欣口服液不同剂量组能上调RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ和IFN-β的低表达.结论:RSV能诱导RIG-1信号传导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而金欣口服液能通过调控RIG-1信号通路从而调节IFN-β的表达.
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金欣口服液含药血清对RSV感染RAW264.7细胞TLR3信号转导通路的影响
目的 探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的信号转导通路影响及其可能作用机制.方法 分别以金欣口服液76.8g/(kg·d)、利巴韦林颗粒128.lmg/ (kg-d)予大鼠灌胃3天,制备金欣口服液、利巴韦林颗粒含药血清.RSV感染RAW264.7细胞分为模型组、利巴韦林组与金欣组.利巴韦林组与金欣组分别给予利巴韦林与金欣口服液含药血清2.5ml进行干预.另设正常细胞作为正常组.正常组与模型组加入2％ FBS维持液2.5ml.12h后收集细胞,检测RAW264.7细胞Toll样受体3(TLR3)、TANK结合激酶1 (TBKl)和干扰素调节因子3(IRF3) mRNA及其蛋白表达.结果 RSV感染RAW264.7细胞12h后可诱导TLR3、TBK1和IRF3 mRNA及其蛋白的高表达(P＜0.01),金欣口服液含药血清及利巴韦林均可下调TLR3、TBK1和IRF3 mRNA及其蛋白的高表达(P＜0.01),其中金欣口服液对TLR3蛋白的下调作用优于利巴韦林(P＜0.05).结论 RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活,上调TBK1和IRF3的表达,而金欣口服液含药血清能够抑制TLR3信号转导通路,从而起到抗RSV的作用.
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金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞早期凋亡调控基因mRNA影响的研究
目的:探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞早期凋亡及Bcl-2和Bax mRNA表达的影响.方法:采用细胞培养、血清药理学、流式细胞术和RT-PCR等实验技术检测金欣口服液含药血清抗RSV,影响细胞早期凋亡作用途径的变化.结果:RSV感染人胚肺成纤维细胞(HELF)12和24 h后细胞凋亡率均低于未感染细胞对照组(P<0.05),RSV攻击宿主细胞24 h后,Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量上升,但不足2倍增长.金欣口服液作用后,凋亡率明显高于病毒组(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量上升≤0.5.结论:金欣口服液在RSV感染早期,可能通过调控凋亡相关基因拮抗其抑制细胞凋亡的作用,从而影响进入细胞内的病毒复制增殖的过程,阻止病毒的扩散.
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基于GC-MS的金欣口服液对RSV肺炎小鼠脾脏代谢物的调控作用
目的 通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠脾脏组织中内源性代谢物的变化,探讨金欣口服液治疗RSV肺炎可能的作用机制.方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,给予金欣口服液(27.6 g/kg)干预治疗,连续治疗7d后处死小鼠,取脾脏组织,经甲醇提取后,先后予甲氧胺吡啶和BSTFA以肟化和衍生化,然后运用GC-MS检测脾脏中所含有的代谢物及其相对量的变化.结果 RSV肺炎小鼠的脾脏中共鉴定出35种代谢产物,其中L-脯氨酸、L-谷氨酸、缬氨酸、尿素、次黄嘌呤、葡萄糖为具有显著性差异的代谢物(P＜0.05),与之相关的代谢通路为D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢.结论 金欣口服液可以调节RSV肺炎小鼠脾脏的免疫功能,可能与氨基酸代谢有关.
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UPLC法同时测定金欣口服液中8种指标成分
目的 建立UPLC法同时测定金欣口服液中芥子碱硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-O-β-葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素8种指标成分的量.方法 采用UPLC法,Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,体积流量0.4 mL/min,梯度洗脱,检测波长280 nm,柱温35℃；分别对线性关系、精密度、重复性、稳定性及加样回收率进行考察.结果 被测定的8种指标成分分别在选定的范围内线性关系良好,平均加样回收率99％～102％,RSD均小于3.1％.结论 本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于金欣口服液的质量控制.
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金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠TNF-α表达的调控作用
目的:通过研究不同时间点金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,进一步阐明金欣口服液治疗RSV肺炎的作用机制.方法:体外实验:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,金欣口服液合药血清进行干预,24h后收集细胞上清,ELISA法检测各组TNF-α含量；体内实验:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液不同剂量及给药方式进行干预,并于首次滴鼻后24、72、144h取各组小鼠支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测TNF-α表达及金欣口服液的干预效果.结果:RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠后24h,TNF-α表达明显升高(P＜0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TNF-α表达明显下调(P＜0.01)；72h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达虽较正常组高(P＜0.05),但较24h组明显下降(P＜0.01),而金欣口服液等效剂量预防及治疗组TNF-α表达较RSV感染组均明显升高(P＜0.01)；144h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达较正常组无差异(P＞0.05),而金欣口服液高剂量及等效剂量治疗组TNF-α表达均较RSV感染组明显升高(P＜0.05).结论:金欣口服液能显著下调RSV感染初期TNF-α的高表达,且随着感染时间的延长,可适当上调TNF-α的表达,表明金欣口服液对RSV感染后体内TNF-α的表达具有一定的双向调节趋势,这可能是其治疗RSV肺炎的作用机制之一.
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基于GC-MS代谢组学的金欣口服液治疗RSV感染的体外研究
目的:通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析Hep-2细胞内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液体外抗RSV感染的作用机制.方法:RSV感染接种于6孔板上的Hep-2细胞,予金欣口服液治疗,24 h后予以液氮淬灭细胞,先后加入水-甲醇-氯仿(v:v:v,1:8.1:0.9)以便取少量细胞悬浮液行蛋白定量和萃取细胞代谢物,运用GC-MS检测细胞样品内源性代谢物及其相对含量的变化,并分析其可能参与的代谢通路.结果:RSV感染的细胞样本中共测得29种内源性代谢产物,其中谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、甘氨酸、柠檬酸、乳酸等为差异代谢产物(P＜0.05),主要与谷氨酰胺、甘氨酸、丙酮酸代谢通路有关.结论:金欣口服液体外治疗RSV感染的机制可能与调节RSV感染后引起的代谢紊乱有关.
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金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠TLR7mRNA和蛋白表达的影响
目的 研究金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织中Toll样受体7(TLR7)mRNA、蛋白表达的影响.方法 将BALB/c小鼠分为RSV感染后72 h组和144 h组两大实验组,每大组分为正常组、RSV感染模型组、利巴韦林组、金欣高剂量组、金欣等效剂量组,每组15只小鼠.72 h组RSV滴鼻3d、灌胃3d,144 h组RSV滴鼻3d、灌胃5d,末次灌胃24 h后采集肺组织,Realtime PCR检测肺组织中TLR7 mRNA表达水平,Western Blot法检测肺组织TLR7蛋白表达水平.结果 RSV感染后72 h组内,与RSV模型组相比,金欣高剂量组、等效剂量组能下调肺组织TLR7 mRNA的表达及蛋白表达(P＜0.01、P＜0.05)；RSV感染后144 h组,TLR7 mRNA及蛋白的表达均较72 h同法处理组下降,但各组间TLR7 mRNA及蛋白的表达无差异.结论 RSV感染BALB/c小鼠72 h后,金欣口服液能下调肺组织中TLR7 mRNA及TLR7蛋白的表达；感染晚期(144 h后),金欣口服液下调TLR7表达,使之趋向正常.
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基于RSV对细胞的感染周期研究金欣口服液的干预作用
目的 基于呼吸道合胞病毒( RSV)的感染周期观察金欣口服液含药血清对RSV感染细胞的干预作用.方法 分别在RSV感染Hep-2细胞前后用含药血清干预,观察细胞病变效应、检测细胞存活率和病毒滴度,以及RSV的F融合蛋白表达,判断药物对RSV感染的预防及治疗作用.结果 在RSV感染前或感染早期干预,金欣口服液对细胞病变抑制率均超过50％,与病毒对照组比较,细胞存活率显著增高,上清病毒滴度显著降低,后期干预只能延缓病变.金欣含药血清作用后F蛋白表达显著降低、融合病变较少.结论 金欣口服液含药血清在RSV感染早期干预效果更显著,其抗病毒作用靶点可能与F融合蛋白或该蛋白在细胞上的相应受体有关.
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金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR4及TAK1表达的调控作用
目的 通过观察金欣口服液(炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩等)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺组织TOLL样受体4(TLR4)及转化生长因子β活化激酶(TAK1)表达的调控趋势,探讨金欣口服液抗病毒机制以及TLR4信号通路途径.方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液给药进行干预,并于首次滴鼻后24 h取各组小鼠肺组织,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4、TAK1蛋白表达.结果 RSV感染BALB/c小鼠后24h,TLR4、TAK1蛋白表达明显升高(P＜0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TLR4、TAK1表达明显下调(P＜0.01);金欣组蛋白表达量低,与利巴韦林组相比,P＜0.01,利巴韦林组与RSV感染组相比P＜0.01.结论 金欣口服液能抑制TLR4信号转导通路中TLR4/TAK1蛋白的表达,TLR4的蛋白表达与TAK1的蛋白表达呈正相关,金欣口服液抗RSV作用机制中的TLR4信号通路途径可能是通过TAK1实现的.
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金欣口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒作用研究
目的:观察金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人喉癌上皮细胞(Hep-2)细胞的抑制作用.方法:通过体外抗病毒实验采用MTT法检测病变抑制率及以上清滴度观察金欣口服液含药血清对RSV的抑制作用.结果:MTT法测定病毒抑制率均高于75%,含药血清组上清滴度与空白血清组和病毒对照组比较有显著差异,滴度低于后两组.结论:金欣口服液对呼吸道合胞病毒引起的细胞病变有明显抑制作用.
