UPLC在药物分析中的应用

超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）是基于小颗粒填料的液相色谱技术。本文对UPLC的原理，小颗粒填料技术以及近年来在药物分析中的应用进行了综述。

利用ACQUITY UPLC(R)-Xevo(R) TQ MS同时测定动物肌肉组织中的克伦特罗与氯霉素

UPLC/MS/MS快速鉴定与分析18种邻苯二甲酸盐

沃特世100多种UPLC色谱柱: 让色谱分析速度更快、分离度更高、更环保

2004年,沃特世公司(Waters,以下简称沃特世)推出了整体设计的ACQUITY UPLC(R)系统,第一次全面实现了亚2μm颗粒的潜能,突破了传统HPLC系统在操作压力、系统体积以及数据采集速率等方面的局限,提升了分析速度、分离度和灵敏度.该项创新技术也因此被科学家们赞誉为重新定义了色谱分离科学".

沃特世ACQUITY UPLC(R)H-Class系统快速测定黄曲霉毒素

目标在不进行衍生操作的条件下,证明ACQUITY UPLC(R) H-CLASS系统的多元混合能力:配合使用沃特世黄曲霉毒素分析包,可提高分离黄曲霉毒素B1,B2、G1,G2和M1的分辨率且缩短分析时间.背景黄曲霉毒素是由真菌、黄曲霉菌和寄生曲霉代谢生成的一组真菌毒素,其可能出现在各种食品,如谷物、花生、调味料和乳制品中.天然形成的黄曲霉毒素有4种:B1、B2,G1和G2,其中,B1和G1是毒性较大的两种.M1是二次代谢产物,是乳牛食用B1污染的谷物后代谢生成的副产物,可对牛奶等乳制品造成污染.

全球早的UPLC用户谈UPLC应用与发展——访中国科学院大连化学物理研究所研究员梁鑫淼和沃特世市场拓展经理李彦憙

早在1996年沃特世(Waters)公司推出Alliance(R)HPLC时,多数公司都认为液相色谱(HPLC)技术已经发展到了极致,并且鉴于当时对HPLC的性能未提出更高要求,业界曾-度认为HPLC今后的目标应该是降低成本、走向更低的价格以获得更广泛的应用.

HPLC法与UPLC法测定胰岛素类似物的比较分析

目的:对HPLC法以及UPLC法测定胰岛素类似物的比较进行分析和探讨.方法:此次研究主要对重组赖脯胰岛素、重组人胰岛素以及猪胰岛素进行检测,检测方法包括HPLC法以及UPLC法,对两种检测方法的检侧结果进行观察和比较.结果:经研究结果显示,两种检测方法在结果上均不存在显著差异性,精密度、回收率均与相关要求符合.结论:采用UPLC法对胰岛素类似物进行检测,相比HPLC更为便捷,两者在检测结果上不存在太大差异,因此可以采用UPLC法替代HPLC法.

UPLC同时测定酸枣仁中4种活性成分的含量

目的：建立UPLC同时测定酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸含量。方法：采用ACQUITY UPLC, HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)，流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速0.5 mL·min-1，波长204 nm，进行检测。结果：斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸的质量浓度与峰面积分别在29.70~594.0μg·mL-1，10.68~213.6μg·mL-1，6.175~123.5μg·mL-1，22.00~440.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率均在98.3%~99.4%之间，RSD均小于1.4%。结论：该方法快速、准确、简便，为全面控制酸枣仁质量提供依据。

UPLC法测定脑外伤患者口服大黄吸收入血蒽醌类成分

目的:建立超高效液相色谱( UPLC)法测定口服大黄脑外伤患者血浆中蒽醌类成分.方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱,以甲醇-0.5％醋酸(12∶82)为流动相,检测波长:254nm,流速:0.5mL·min-1,柱温:25℃,进样量:5μL.结果:大黄酸的血浆中浓度分别在0.42～13.429μg·min-1内线性范围良好,其他4种蒽醌类成分未被检测出,方法回收率在97.2％～103.11％之间,日内、日间RSD均小于6％；本法检测出5名重型脑外伤病人1h血浆样品中大黄酸的质量浓度为7.93±1.94μg·min-1.结论:本法精密度好,回收率高,操作简便、无毒、重现性好.

UPLC法测定淫羊藿-威灵仙药对4种化学成分含量

目的:建立补肾止痛药对淫羊藿-威灵仙中淫羊藿苷、朝藿定C、宝藿苷-Ⅰ、齐墩果酸4种成分的UPLC含量测定方法,研究配伍提取对此4种成分提取含量的影响.方法:采用UPLC梯度洗脱技术.色谱柱:ACQUITYUPLC(R) BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm);流动相:乙腈-水梯度洗脱;柱温:30℃;流速0.3mL/min.淫羊藿苷、朝藿定C、宝藿苷-Ⅰ以270nm为检测波长,齐墩果酸检测波长为205nm.结果:淫羊藿-威灵仙药对中淫羊藿苷、齐墩果酸等4成分均呈良好线性关系(r≥0.999);平均加样回收率(n=6)为99.28％-100.87％(RSD＜3％,n=6).淫羊藿、威灵仙配伍提取,淫羊藿苷、齐墩果酸含量有少量增加,而朝藿定C和宝藿苷-Ⅰ含量无明显变化.配伍提取后用SPSS 16.0统计软件数据分析:淫羊藿苷P＜0.05,齐墩果酸P＜0.01.结论:该方法简便快捷、结果准确可靠,可用于淫羊藿-威灵仙药对及其制剂的质量控制,并为淫羊藿-威灵仙的临床配伍应用及其进一步研究提供了科学依据和支持.

UPLC同时测定桂枝中5种活性成分的含量

目的:建立UPLC同时测定桂枝中原儿茶酸、香豆素、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛的含量.方法:采用ACQUITY UPLC,HSS T3色谱柱(2.1mm×100 mm,1.8 μm),以乙腈-0.05％的磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温30℃.结果:原儿茶酸、香豆素、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛分别在0.359～3.59 mg· L-1(r =0.9993),2.83 4～28.34 mg·L-1(r=0.9998),0.574～5.74 mg· L-1(r =0.9998),2.400 ～24.00 mg·L-1(r =0.9999),和32.57～325.7 mg·L-1(r =0.999 8)(n =6)有良好的线性关系；平均加样回收率(n=9)均在96.7％～101.0％,RSD均小于2.3％.结论:该方法快速、准确、重现性好,可作为测定桂枝中原儿茶酸、香豆素、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛含量的方法.

茯苓UPLC特征指纹图谱

建立茯苓的UPLC特征指纹图谱分析方法,为快速评价茯苓的质量,完善茯苓的质量控制方法提供依据.采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100 mm,1.8 μm),流动相乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长243nm.建立了茯苓UPLC特征指纹图谱共有模式,标定了20个共有峰,指认了其中7个共有峰,15批茯苓的相似度在0.787～0.974.该方法快速,可用于评价茯苓的质量.

基于高分离度和高色谱峰纯度的红参UPLC指纹图谱研究

采用UPLC建立红参指纹图谱.采用Waters Acquity BEH C18(2.1 mm ×50mm,1.7 μm)色谱柱进行分离,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长203 nm.通过对22批红参进行测定,建立了红参的UPLC指纹图谱,并定义了26个共有峰.采用对照品比对,指认了其中的11个共有峰,它们分别是人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、20(S)-人参皂苷Rg3、20(R)-人参皂苷Rg3.其中的20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3这一组差向异构体是红参的特征成分,它们不仅可以用于区分红参与人参,同时也可用于红参炮制的过程控制.采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”对22批红参UPLC指纹图谱进行了相似度评价,结果18批样品的相似度大于0.9.与文献报道的红参指纹图谱测定方法比较,该研究所建立的方法具有高效、专属性强、分离度高、色谱峰纯度高、方法简单易行的特点,可用于人参类药材的品种鉴定和质量控制,并为上述药材质量标准的提升提供了理论依据.

多成分定量结合指纹图谱分析用于不同产地香加皮的质量评价

采用超高效液相色谱法(UPLC),以甲醇-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,对山西、河南两省共30批香加皮中的3种成分(绿原酸、4-甲氧基水杨醛、杠柳毒苷)进行同时测定,并对其指纹图谱进行研究.结果表明不同产地样品中,3种成分含量差异较大;香加皮药材指纹图谱共标定17个共有峰,除H3,H11,样品相似度均在0.90以上.以3种成分含量及相似度数据进行显著性差异分析、聚类分析及主成分分析,结果表明不同产地的香加皮药材质量存在一定差异.建立的含量测定结合指纹图谱分析方法可更好地用于香加皮的质量评价.

基于UPLC结合化学计量学方法的龙血竭指纹图谱研究

建立不同厂家龙血竭UPLC指纹图谱,为其质量控制提供比较全面的评价方法.采用Phenomenex Kinetex 2.6μC18100A色谱柱,以乙腈-水梯度洗脱,流速1.7 mL·min-1,柱温40℃,检测波长为280 nm.利用化学计量学方法对色谱数据进行相似度分析、聚类分析和主成分分析.采用该方法测定了18批龙血竭,提取15个色谱峰作为指纹图谱共有峰,采用LC-Q-TOF MS方法指认了13个共有峰;其中15批样品相似度大于0.9;18批样品可大致分为4类.该法重复性好,简便可靠,可以为不同厂家龙血竭的质量控制和评价提供依据.

白芍饮片的化学成分测定及质量评价

目的:选择芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷和丹皮酚为白芍饮片的含量测定指标,通过建立UPLC测定方法对其含量进行测定,以实现白芍饮片的质量评价.方法:采用ACQUITY UPLC@HSS T3色谱柱,以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,检测波长230 nm,流速0.4 mL·min-1.通过主成分分析法获得线性方程,利用主成分得分综合评价白芍饮片的质量.结果:在所建立的色谱条件下,芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、丹皮酚与其他组分能够达到良好分离,专属性、精密度、重复性、线性关系、加样回收、稳定性试验均符合中药质量分析要求.25批白芍饮片样品中有9批不符合2010年版《中国药典》白芍含量测定项下规定.经主成分综合评分法评定,样品中浙江产白芍饮片质量较佳,其次为安徽产、山东产白芍饮片.结论:本方法可用于测定白芍饮片中芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷和丹皮酚的含量,并对白芍饮片进行质量评价,为白芍的质量控制提供了更快速、全面的方法.

木香川木香药材UPLC特征指纹图谱建立及鉴别研究

木香与川木香成分相似,难以鉴别.该文采用ACQUITY UPLC色谱仪,乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长238 nm,建立了木香、川木香药材的UPLC指纹图谱.聚类分析和主成分分析可以完全将2种药材分开.指纹图谱分析木香药材中标定了8个共有峰;川木香药材中标定了12个共有峰.通过与对照品比对,指认了其中6个共有峰,分别为紫丁香苷、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、木香烃内酯和去氢木香内酯.川木香中的4个特征成分峰,在木香样品中并不具有.应用UPLC特征指纹图谱对木香和川木香进行鉴别是可行的.

辽细辛中十二碳四烯酰胺A,B的定性及定量分析研究

建立辽细辛中2个主要的直链酰胺成分十二碳四烯酰胺A与十二碳四烯酰胺B的定性与定量分析方法,并测定其在42份辽细辛(37份不同年份收集的北细辛及5份汉城细辛)中的含量.利用HPLC-IT-TOF-MS/MS技术结合对照品鉴定北细辛甲醇提取液中的十二碳四烯酰胺A与B;对2种成分的含量测定采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-PDA),ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相为纯水-乙腈,梯度洗脱,柱温45℃,检测波长254 nm.结果表明,HPLC-IT-TOF-MS/MS鉴别细辛中十二碳四烯酰胺A、B的准分子离子[M+H]+为m/z 248.20;2种成分在UPLC-PDA上分离度良好,在检测范围内呈良好线性,平均加样回收率为97.90％和99.86％.在所测定辽细辛样品中,十二碳四烯酰胺A的含量为0.11 ～3.89 mg·g-1,十二碳四烯酰胺B为0.24～6.65 mg·g-1.含量测定结果显示随着贮藏时间的延长,十二碳四烯酰胺A与十二碳四烯酰胺B的含量均呈现降低的趋势,与2013年收集样品相比,2002～2003年收集样品中两者的平均含量分别降低34％和36％;这2种成分在汉城细辛中的平均含量[十二碳四烯酰胺A:(0.78 ±0.52) mg·g-1;十二碳四烯酰胺B:(1.69 ±0.83) mg·g-1]均显著低于北细辛[十二碳四烯酰胺A:(1.59 ±0.75)mg ·g-1;十二碳四烯酰胺B:(2.90±1.17)mg·g-1](P＜0.05);辽细辛地上部分十二碳四烯酰胺A的含量为0.11 ～0.33 mg·g-1,十二碳四烯酰胺B含量为0.24～0.60 mg·g-1,两者的含量均明显低于同一植株的地下部分(分别为0.73～3.89,2.11 ～6.24 mg·g-1).本方法快速简便、结果准确,对2种直链酰胺类成分可达到良好的分离并满足含量测定的要求,可用于辽细辛药材中这2种成分的定性与定量分析,为辽细辛药材质量控制方法的进一步提高提供依据.

UPLC测定茜草炭中4种醌类成分的含量

目的:建立同时测定茜草炭中异茜草素、羟基茜草素、1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌、大叶茜草素含量的超高效液相色谱法.方法:采用Acquity BEHC18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为甲醇-0.3％甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.2mL·min-1,进样量2μL,柱温30 ℃,检测波长276 nm.结果:异茜草素、羟基茜草素、1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌、大叶茜草素的质量浓度与峰面积分别在0.69～34.44 mg·L-1(r=0.999 9),0.66～ 33.2 mg·L-1(r=0.999 7),0.68～34.08 mg·L-1(r=0.999 9),1.07～ 53.52 mg·L-1(r=0.9999)呈良好线性;平均回收率分别为96.95％,95.75％,102.5％,96.15％,RSD均小于3％.结论:该方法简便、快速、准确,可作为茜草炭质量控制的一个有效方法.

微波萃取-UPLC同时测定虎杖中5种主要活性成分的含量

目的:建立同时测定虎杖药材中虎杖苷、白藜芦醇、蒽苷B、大黄素和大黄素甲醚5种活性成分含量的微波萃取与超高效液相色谱(UPLC)分析方法,为完善虎杖的质量标准提供科学依据.方法:采用MDS-8型多通量密闭微波化学工作站,以甲醇为溶剂,160 ℃微波萃取制备供试品溶液；UPLC分析条件为Waters Acquity H Class UPLC系统,BEH C18色谱柱(2.1mm×100 mm,1.7 μm),乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,柱温30℃,检测波长226 nm.结果:5种活性成分采用微波萃取10 min可提取完全；经UPLC分析可在12 min内完全分离,且在线性范围内均呈良好的线性关系(r≥0.999 6),平均加样回收率为97.00％ ～ 103.7％ (n =6),RSD≤2.2％.16个产地的虎杖药材中,每种被测成分的批次间含量差异都比较大,但5种成分的总量相对稳定(3.683 3％ ～7.103 1％).结论:微波萃取-UPLC法同时测定虎杖中多个活性成分的含量,方法快捷、分离效果及重现性好,可以用于虎杖的质量控制与评价.