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重组人钙调素对小鼠胚胎发育及凋亡的影响
目的 探讨外源重组人钙调素(rhCAM)对小鼠早期胚胎体外发育及凋亡的影响.方法 小鼠超促排卵,收集2-细胞胚胎置于含不同浓度rhCAM的IVF-30培养液中,观察并记录胚胎形态,TUNEL法检测囊胚细胞数及囊胚细胞凋亡情况.结果 20 μg/ml rhCAM组的胚胎体外培养48、72 h的囊胚形成率和孵化囊胚率均高于对照组,该组体外培养72 h囊胚细胞凋亡指数显著低于对照组.200 μg/ml rhCAM组的胚胎囊胚形成率低于对照组,凋亡指数显著高于对照组.结论 一定浓度的rhCAM可促进胚胎体外发育并可抑制胚胎细胞的凋亡.
关键词： 胚胎 钙调素 凋亡 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 -
锌对大鼠成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性的调节
为了研究锌对大鼠成骨细胞膜Ca2+-ATP酶和Na+、K+-ATP酶活性的影响及其机制,实验设对照组和3个补锌组.采用孔雀绿比色法同步测定膜Ca2+-ATP酶和Na+,K+-ATP酶活性,以研究Zn2+对酶活性的影响以及蛋白激酶C或钙调素特异性抑制剂对Zn2+诱导的成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性的影响.结果表明,Zn2+可以显著提高成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性,但对Na+,K+-ATPase活性无影响;钙调素特异性抑制剂R24571对Zn2+诱导的Ca2+-ATPase活性无影响,钙调素对膜Ca2+-ATP酶基础活性也无激活作用;蛋白激酶C特异性抑制剂三氟拉嗪可使Zn2+诱导的Ca2+-ATP酶的活性显著降低.因此,锌可能通过蛋白激酶C介导调节成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性.
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缺锌对生长期大鼠行为及海马细胞钙状态的影响
为探讨缺锌对生长期大鼠行为以及海马细胞内游离钙([Ca2+]i)和活性钙调素(CaM)水平的影响,选用21只雄性Wistar大鼠,随机分为缺锌组、对喂组、对照组.缺锌组组饲以缺锌饲料,对喂和对照组饲以普通饲料.喂饲3周后,用旷场试验进行行为测定;之后处死大鼠,分别用Fura-2双波长荧光法和流式细胞术测定动物海马细胞[Ca2+]i和活性CaM水平.结果表明,缺锌组组大鼠在旷场内的行为与对照组出现明显差异;其海马细胞[Ca2+]i明显高于对照和对喂组,缺锌组和对喂组大鼠海马细胞活性CaM水平均明显低于对照组;缺锌组组大鼠细胞活性CaM水平也明显低于对喂组.缺锌对生长期大鼠行为的影响可能与其影响海马神经元的钙状态有关.
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电针“水沟”与“井穴”对全脑缺血大鼠脑组织钙调素活性影响的对比研究
目的:观察电针"水沟"与"井穴"对全脑缺血大鼠脑细胞内活性钙调素(CaM)含量的影响.方法:采用大鼠全脑缺血再灌注模型,用磷酸二脂酶法测定电针后正常对照组、模型对照组、电针"水沟"穴组、电针"井穴"组、假手术对照组脑组织活性CaM的含量.结果:脑缺血后脑组织活性CaM含量明显升高,电针刺激"水沟"和"井穴"均可使大鼠缺血区脑组织活性CaM含量明显降低,两组无显著性差异.结论:电针"水沟"与"井穴"均能明显降低活性CaM的含量,发挥肯定的脑保护作用.
关键词： "水沟"穴"井穴"电针刺激 脑缺血 钙调素 -
不同时间窗电针对急性局灶性脑缺血模型大鼠脑组织活性钙调素含量影响的研究
目的:研究不同时间窗电针对实验性脑缺血疗效的影响.方法:采用光化学法诱导局灶性脑缺血模型,于造模成功后0.5 hr、1 hr、3 hr、6 hr、12hr五个不同的时间窗开始电针,比较治疗6天后急性局灶性脑缺血模型大鼠脑组织活性钙调素(CaM)含量的变化.结果:大鼠脑缺血后,模型组CaM的含量明显升高,与空白对照组和假手术组相比有显著性差异(P<0.05);电针治疗组的CaM含量与空白对照组相比无统计学差异(P>0.05),但超早期不同的时间窗电针组间差异不显著(P>0.05).结论:针刺疗法超早期介入在大鼠局灶性脑缺血中发挥肯定的脑保护作用,但从造模后0.5 hr开始分设的五个不同时段组间不显示开始治疗时间窗与针刺疗效的正相关系.
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右归饮对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴钙调素mRNA表达的影响
目的：从分子水平探讨肾阳虚证的本质以及补肾中药的作用机理。方法：用醋酸可的松造成肾阳虚模型，以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)半定量法，测定肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴CaMmRNA的表达，以及补肾中药右归饮对其的影响。结果：肾阳虚大鼠下丘脑、肾上腺CaMmRNA水平升高，垂体组织CaMmRNA水平没有显著变化，右归饮能够降低下丘脑组织CaMmRNA水平，但对肾上腺影响不显著。结论：下丘脑中CaMmRNA水平升高与肾阳虚证有关，下丘脑CaMmRNA水平的降低是补肾中药右归饮改善肾阳虚症状的作用机理之一。
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四神丸对脾肾阳虚泄泻大鼠胃窦组织Ghrelin-CaM-MLCK信号通路的影响
目的 观察四神丸对脾肾阳虚型泄泻模型大鼠胃窦组织Ghrelin-CaM-MLCK信号通路的影响,探讨其作用机制.方法 采用灌服腺嘌呤和番泻叶水煎剂制作脾肾阳虚型泄泻大鼠模型.将72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和四神丸高、中、低剂量组,每组12只.各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d,免疫组化和Western blot分别检测胃窦组织脑肠肽胃促生长素(Ghrelin)及其受体(GHSR)、钙调素(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的蛋白表达.结果 模型组大鼠胃窦组织Ghrelin、GHSR、CaM和MLCK蛋白表达均较正常组明显升高(P<0.01);各给药组上述指标蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),且以四神丸高剂量组为明显.结论 四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的作用可能与调节Ghrelin-CaM-MLCK信号通路指标的蛋白表达有关.
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电针水沟穴对实验性全脑缺血大鼠脑组织钙调素活性的影响
目的:观察电针水沟穴对缺血区脑细胞内活性钙调素(CaM)含量的变化.方法:采用大鼠全脑缺血再灌注模型,用磷酸二脂酶法测定正常对照组、模型对照组、电针水沟穴组、假手术对照组脑组织活性CaM的含量.结果:造模后脑组织活性CaM含量明显升高(P＜0.001),经电针水沟穴治疗后大鼠缺血区脑组织活性CaM含量明显降低(P＜0.01).结论:电针水沟穴可明显降低大鼠脑组织活性CaM的含量.
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基于FRET荧光蛋白探针的活体定量分子影像方法探究
目的 荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用.本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标物浓度,以及如何基于FRET探针实现三维成像.方法 基于探针和目标物结合时的化学反应平衡关系,提出一种新型分析方法,以精确定量待测物[钙调素(calmodulin,CaM)]的浓度.同时对于FRET探针的活体分子成像,结合荧光透射成像(3D-FMT)方法,建立了可进行三维时空动态FRET检测的平台系统,对FRET探针的测量结果(即待测物浓度)进行实时定量的三维重建.结果 准确地定量了待测物CaM浓度,并得到了高质量的3D-FRET分布影像.结论 提出FRET探针在活体成像应用领域两个关键问题的解决方案,为基因编码FRET探针向活体分子影像领域的推广奠定了重要的技术基础.
关键词： 荧光共振能量转移 基因编码FRET探针 荧光蛋白 荧光断层成像 钙调素 -
吗啡依赖对小鼠睾丸组织的影响及其相关机制分析
为了解吗啡依赖对小鼠睾丸发育及其功能的影响,研究了吗啡依赖对睾丸生精细胞凋亡的影响及其可能机制.以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡成瘾小鼠模型,用纳洛酮催促戒断,观察戒断症状,采用原子吸收、放射免疫分析和原位缺口平移(ISNT)技术观察睾丸细胞锌和钙调素(CaM)含量、睾丸超氧歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和睾丸组织中凋亡细胞数目.结果表明,与对照组相比,吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组躯体运动神经功能和植物神经功能亢进,睾丸锌和CaM含量减少,睾丸SOD、GSH-Px活性降低,睾丸组织中生精细胞凋亡数目明显增多(P＜0.05或P＜0.01).吗啡依赖小鼠可诱导睾丸组织中细胞凋亡,这种变化可能与睾丸组织中锌和CaM含量减少、睾丸SOD和GSH-Px活性降低有关.
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钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响
目的探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪(TFP)对HeLa细胞S期进程的影响及其分子机理. 方法通过TdR双阻断法获得同步化的S期HeLa细胞,以3H-TdR掺入法和Western技术分别观察了TFP对HeLa细胞S期进程和胸苷激酶(thymidine kinase,TK)活性及细胞周期引擎分子CyclinA、Cdk2和细胞周期调节蛋白p80cdc25B、PCNA、p21蛋白表达水平的影响. 结果 TFP(20μmol/L)能使3H-TdR的掺入峰值后移,并抑制了CyclinA、PCNA、p80cdc25B的表达和提高了p21蛋白的水平,但对Cdk2的表达几乎无影响. 结论 CaM除了能通过影响PCNA的水平直接作用于DNA合成,同时又可通过作用于CyclinA、p80cdc25B、p21等周期引擎分子和调控因子水平正调HeLa细胞S期进程.
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钙调素在生长相关蛋白-43调控细胞周期中的作用
目的 探讨钙调素-43( CaM)在生长相关蛋白(-43)(GAP-43)调控细胞周期过程中的作用. 方法 利用反转录病毒体系构建表达不同活性状态的GAP-43(即野生型、非磷酸化型和假磷酸化型GAP-43)NIH3T3细胞模型,并分别命名为表达野生型GAP-43 (3T3-G)、表达非磷酸化GAP-43(3T3-A)和表达假磷酸化GAP-43 (3T3-D)；另设对照组(转染空载体NIH3T3细胞).通过免疫组织化学及Western blotting鉴定各型细胞模型转入GAP-43的情况；应用免疫共沉淀检测各型GAP-43与CaM的功能关系；应用细胞生长曲线、BrdU累积标记法、BrdU脉冲标记法测定各型转GAP-43细胞的细胞周期. 结果 免疫组织化学和Western blotting结果显示,NIH3T3细胞能够表达转入的各型GAP-43.其中,3T3-A细胞增殖速度较其他细胞减缓.免疫共沉淀显示,3T3-A中有GAP-43和CaM相互作用表现；3T3-G中GAP-43和CaM有少量相互作用；3T3-D与3T3-P中则相互作用.累积BrdU测定,脉冲BrdU测定M期的实验表明,3T3-P细胞无明显周期改变；3T3-D与3T3-G细胞的周期延长；3T3-A细胞的周期明显延长并显示G1期明显延长. 结论 表达GAP-43的细胞其增殖表现可能是由于GAP-43结合了CaM,使之与Ca2+的结合减少而引起细胞周期(尤其是G1期)的延长.
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Camkkβ的病理生理作用
Camkkβ是一种激活钙调素依赖蛋白激酶的激酶（Ca2＋/Calmodulin-dependent protein kinase kinase），属于众多钙调蛋白激酶中的一员，可以激活CaMKⅠ、CaMKⅣ及单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）。Camkkβ在特定细胞中表达，因此它涉及多种生理及病理生理过程的调节，与能量平衡的调节、肥胖、葡萄糖稳态、造血过程以及癌症有关。本文就Camkkβ的作用进行综述，并讨论Camkkβ作为治疗靶点的可行性。
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心肌细胞核钙调素Ⅰ和CREB磷酸化在压力负荷大鼠心肌肥厚中的作用
目的探讨钙调素Ⅰ(CaM Ⅰ)及核转录因子CREB磷酸化在压力超负荷大鼠心肌肥厚中的作用.方法100只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=50)和心肌肥厚组(n=50),制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,模型复制成功后4周,以改良差速离心和密度梯度离心法提纯细胞核,以蛋白印迹法测定心肌细胞核CREB及磷酸化CREB(pCREB)表达,免疫组化法观察左室心肌组织CaMⅠ蛋白表达及分布,延续转录分析法观察阻断CaM后心肌细胞核c-fos mRNA的变化.结果与对照组比较,心肌肥厚组pCREB蛋白光密度明显增加(104.71 vs 75.29,P＜0.05),CREB蛋白光密度无明显变化(128.43vs 113.86,P＞0.05);CaMⅠ分布于细胞核及细胞浆,心肌肥厚组CaMⅠ蛋白表达较对照组明显增加(21.64 vs 17.24,P＜0.05);使用CaM抑制剂后心肌肥厚组心肌细胞核c-fos mRNA表达明显降低(144.6 vs 54.1,P＜0.05).结论压力超负荷时心肌细胞核内CaMⅠ蛋白表达增加,可能通过增加核转录因子CREB磷酸化,上调早期基因c-fos表达参与心肌肥厚的发生.
关键词： 左心室肥厚 钙调素 cAMP反应元件结合蛋白 c-fos -
外源性钙调素入核转运及其在大鼠心肌肥厚时的变化
目的探讨大鼠心肌细胞核对外源性钙调素入核转运的调节机制及其在大鼠心肌肥厚时的变化.方法制备腹主动脉缩窄心肌肥厚大鼠模型、差速离心提纯心肌细胞核、酶学方法测定钙-ATP酶活性、荧光分光光度计测定荧光标记钙调素向细胞核转入量.结果离体纯化的大鼠心肌细胞核在ATP存在下,外源性钙调素经核孔向核内转运量具有显著钙离子浓度依赖性,随核外钙离子浓度的增加而递增(P<0.05).在钙离子浓度为10-3 mol/L时,钙-ATP酶抑制剂thapsigargin (5 μmol/L)、兰尼碱受体拮抗剂钌红(ruthenium red ,50 μmol/L)和IP3受体拮抗剂肝素 (10 μg/ml)使外源性钙调素的细胞核孔转运分别降低90%、20%和89% (P<0.05).腹主动脉缩窄术后4周大鼠心肌显著肥厚,伴有明显的血流动力学异常,与对照组相比,腹主动脉缩窄心肌肥厚大鼠外源钙调素入核转运明显减少 (P<0.05),心肌细胞核钙-ATP酶活性显著下降 (P<0.001).结论外源性钙调素入核转运可能受核外钙离子浓度和核钙摄取、释放系统所调节,心肌肥厚时,钙调素入核转运减少、心肌细胞核钙-ATP酶活性下降,可能在相对稳定核功能紊乱的调节中起负性反馈作用.
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染料木黄酮对成骨细胞内游离钙、钙调素水平及ALP、ATP酶的影响
目的 研究不同浓度的染料木黄酮(genistein,GEN)对体外培养大鼠成骨细胞游离钙、钙调素、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、ATP酶的影响.方法 采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞,加入不同浓度的染料木黄酮(10-8 mol/L,10-7 mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L),以妊马雌酮(商品名:倍美力)(10-8 mol/L,10-7 mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L)作为阳性对照组,用PNPP(对硝基苯磷酸盐)法测定ALP活性、放射生物法测定钙调素水平、激光扫描共聚焦显微镜测定细胞游离钙、比色法测定ATP酶活性.结果 染料木黄酮对成骨细胞钙调素、ALP、Ca2+-ATP、细胞内游离钙水平的影响呈正相关性,并与其剂量成正相关性,但这些作用均低于雌激素水平(P＜0.01).结论 染料木黄酮能增加成骨细胞ALP、Ca2+-ATP活性和钙调素水平、钙离子震荡波,并与其浓度有关,作用与雌激素相似.
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钙调素在肝脏疾病中的作用
钙调素(Regucalcin)是一种多功能蛋白,参与维持细胞内钙稳态,调节多种酶活性,抑制氧化应激以及调控细胞增殖凋亡.钙调素在肝脏中含量较高.在多种肝脏疾病中,钙调素基因及其蛋白表达水平发生改变.这些改变在肝脏疾病的发生发展中起到重要作用.本文就钙调素在肝脏疾病中的作用进行综述.
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从生理说起:钙与VD
组成人体的化学元素有60多种,其中钙磷的含量较多,它们主要以无机盐的形式存在于体内,具有重要的生理功能,是维持人体日常生理活动所必需的常量元素.约993％以上的钙和85.7％以上的磷是以羟磷灰石Ca10 (PO4)6(OH)2的形式构成骨盐.羟磷灰石存在于骨骼和牙齿中,是人体内含量多的无机盐.功能及代谢Ca2+参与肌肉收缩、细胞分泌以及凝血等过程;C a2+能降低毛细血管及细胞膜的通透性和神经肌肉的兴奋性(据此某些国外的著作认为钙可以让人松弛、镇静,还具有止痛作用).体液中Ca2+浓度稍微降低,可造成神经肌肉兴奋性增高,引起肌肉的自发收缩;Ca2+有利于心肌收缩,它和有利于心肌舒张的K+相拮抗,从而维持心肌的收缩与舒张;Ca2+与真核细胞中的特异性受体——钙调素结合成Ca-钙调素时,可使Ca2+依赖性酶的活性增强;Ca2+也作为许多酶的激动剂,亦能抑制肾脏25-羟维生素D2-1α-羟化酶的活力,参与钙代谢的调节.
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钙调神经磷酸酶依赖的信号通路与心肌肥大
钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)是一种Ca2+/钙调素( CaM)依赖的蛋白磷酸酶,存在于包括心脏的许多组织中.已知CaN在免疫反应中起重要作用,但在非免疫细胞中的生物学功能了解甚少.1998年4月,美国西南大学Olson小组报道,心肌细胞中的CaN依赖的信号通路,可以与NF-AT3、GATA4协同作用,活化心肌细胞的多种生长相关基因,可能在心肌肥厚的发病中起重要作用.这一发现引起了学术界的高度关注.
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针刺"水沟"穴与针药结合对实验性全脑缺血大鼠脑组织钙调素活性影响的实验研究
目的采用大鼠全脑缺血再灌注模型,观察电针"水沟"与口饲维脑路通对缺血区脑细胞内活性钙调素(CaM)含量的变化.方法测定针药结合治疗后对脑组织活性CaM的含量变化的影响.结果脑缺血后脑组织活性CaM含量明显升高,电针"水沟"与针药结合治疗后可使大鼠缺血区脑组织活性CaM含量降低.结论电针"水沟"与针药并用可明显降低活性CaM的含量,针药并用明显优于单纯针刺,针药结合对脑缺血再灌注大鼠有协同治疗作用.
