首页 > 文献资料
-
巴比妥单克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定
目的 建立抗巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗巴比妥单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定.方法 将巴比妥分子环状丙二酰脲环上氨基引入活性羧基,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,得到完全抗原BAR-KLH和BAR-BSA,并用紫外分光光度计鉴定.用BAR-KLH免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗巴比妥单克隆抗体的杂交瘤细胞株；采用体内诱生腹水法制备巴比妥单克隆抗体,饱和硫酸铵法、亲和层析法纯化,并进行免疫学特性鉴定.结果 完全抗原偶联成功,其偶联率为30∶1；筛选出1株杂交瘤细胞命名为5C6,其产生的单抗效价为1∶6.4×104,属于IgG1/kappa,抗体亲和力常数为2.27×108 L/moL.纯化后的巴比妥单克隆抗体用ELISA法检测其灵敏度为130ng/mL,并与其他7种镇静催眠类药物交叉反应率小于1％.结论 本研究制备的杂交瘤细胞株5C6分泌的抗体具有高特异性和灵敏度.
-
高特异性三唑仑代谢物单克隆抗体的制备
目的 建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础.方法 在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原.以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株.纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定.结果 获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6.2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL.与其他参试物无交叉反应.因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究.结论 本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度.
-
青霉素皮试假阳性因素的分析
青霉素是一种临床广泛使用的广谱抗生素,对敏感细菌有强大的杀菌作用,但是由于青霉素是人工合成的半抗原,进入人体后与人体蛋白质结合成为全抗原,致人过敏,特别是当发生过敏休克时,若抢救不及时,易危机生命,故其使用范围受限,准确判断青霉素皮试的结果,是患者能否得到正确抗感染的关键所在[1].
