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疯牛病的研究概况及检验检疫预防措施
疯牛病是一种慢性致死性中枢神经系统变性病,于1986年由英国首先发现并报道.该病的历史背景可以追溯到20年代人类出现的类似病症"克-雅氏综合征(CJD)”.现已基本查明,其共同的致病因子是朊蛋白,这是一种不含核酸,不需要DNA或RNA参与即可复制的毒蛋白颗粒,主要攻击宿主的脑组织,以形成空泡样海绵状组织改变,导致宿主以神经系统病变而死亡,且至今无有效治疗方法或预防性疫苗.疯牛病在西方已酿成重大政治事件和经济悲剧.研究疯牛病等可传染性海绵状脑病的检验检疫并依法为人出境检验检疫提供科学技术支持,对即将"人世”的中国大限度地促进经济可持续性发展,保护人民身体健康关系重大.
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急性中枢神经系统感染症状监测研究进展
中枢神经系统(CNS)感染是指包括病毒、细菌、螺旋体、寄生虫、立克次体和朊蛋白等各种生物性病原体侵犯CNS实质、被膜及血管等引起的急性或慢性炎症性疾病[1].
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硫醇基团的氧化还原过程对人正常朊蛋白聚集和纤维化特征的影响
本研究旨在通过体外对纯化的原核重组人正常朊蛋白硫醇基团的氧化还原过程,探究二硫键的改变对其生化特性的影响.蛋白沉淀实验显示重组正常人朊病毒蛋白经过硫醇基团的氧化还原过程明显增加了其聚集性；硫磺素T(ThioflavinT,ThT)实验测定发现,经过硫醇基团的氧化还原过程重组PrP蛋白的纤维形成增多；圆二色谱(Circular Dichroism,CD)测定显示,处理后的重组PrP蛋白二级结构发生改变,其β折叠结构比例显著增多；蛋白酶K消化实验也进一步显示硫醇基团的氧化还原后PrP的蛋白酶K抵抗能力有所增加.这些结果提示二硫键的形成可明显地改变PrP的二级结构,促进朊蛋白聚集和成纤维过程.
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蛋白激酶CK2与PrP蛋白的体外相互作用研究
为了探讨蛋白激酶CK2与PrP是否存在分子间相互作用,利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中分别扩增出蛋白激酶CK2a和CK2β基因,并在E coli中表达了融合蛋白HIS-CK2α和GST-HISCK2β.利用pU-doWn及免疫共沉淀实验检测PrP与CK2的分子间相互作用.结果显示,重组PrP可与CK2α出现特异性结合,但不与CK2β发生反应.天然状态下脑组织中的CK2与PrPc也发生相互作用.PrP与CK2α亚基相互作用的区域位于PrP的C-端90～231位氨基酸.本研究从分子水平上提供了人重组和天然CK2和PrP蛋白相互作用的实验依据,为深入探讨CK2与朊蛋白作用的生物学意义和在朊病毒病发病过程中的作用提供了科学线索.
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堤岸田鼠(Bank Vole)重组朊蛋白在RT-QuIC反应上的特点及其关键位点的作用探索
堤岸田鼠对很多种属的朊病毒易感.在堤岸田鼠的朊蛋白氨基酸序列中, 只有两个位点是同仓鼠和小鼠都不相同的, 分别是位于C端的227位和230位.为了评估这两个位点对堤岸田鼠RT-QuIC反应的影响, 我们构建了田鼠野生型 (Vole-WT), 两种突变型 (Vole-E227D, Vole-S230R), 以及仓鼠野生型 (Ha-WT) 蛋白用于RT-QuIC反应.结果显示田鼠野生型及两种突变型具有极强的RT-QuIC反应效率.即使在较弱的反应条件下, 田鼠野生型及突变型也表现出比仓鼠更高的反应效率.其中Vole-E227D在三种田鼠蛋白中是效率高的, 随后为野生型和Vole-S230R.我们的结果表明堤岸田鼠朊蛋白氨基酸227位和230位不是造成堤岸田鼠RT-QuIC反应如此高的原因, 但特定氨基酸位点的改变会在一定程度上影响朊蛋白的RT-QuIC反应效率.
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人朊蛋白相关蛋白Shadoo的表达、纯化及抗体的制备
目的 克隆、表达和纯化人朊蛋白相关Shadoo(SHO)蛋白并制备抗Shadoo的多克隆抗体.方法 提取仓鼠各组织的mRNA,分析SHO基因在仓鼠各组织中转录水平的差异;提取人DNA,PCR方法获得人SHO基因,克隆至融合表达载体,在大肠埃希菌中表达人SHO蛋白并纯化;以纯化蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,用Western blot方法分别检测与重组及内源性SHO蛋白的免疫反应性.结果 SHO基因在仓鼠各组织中的转录水平差异很大,脑组织转录水平高.在大肠埃希菌中表达了分子质量单位为37 ku的人SHO融合蛋白,制备的SHO蛋白抗体可与重组的SHO蛋白反应,可识别内源性的SHO.结论 成功表达纯化人SHO融合蛋白并制备了抗SHO抗体,为研究SHO和正常朊蛋白之间的关系打下初步基础.
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ADAM10处理增强铜离子诱导的重组朊蛋白的蛋白酶抗性
目的 分析ADAM10对铜离子诱导后的PrP蛋白的剪切特点.方法 常规方法表达、纯化人PrP全长蛋白(aa 23-230),利用氯化铜对纯化后的PrP蛋白进行诱导.用不同浓度的ADAM10对PrP蛋白进行处理,检测诱导后全长蛋白及剪切片段的PK抗性.结果 重组人PrP蛋白经Cu2诱导后具有部分抵抗PK消化的特点.Cu2+诱导后的PrP蛋白可被ADAM10剪切,具有剂量依赖性.ADAM10对Cu2+诱导的PrP蛋白处理后抵抗PK消化的能力明显加强.结论 ADAM10可以剪切Cu2+诱导的PrP蛋白,同时增加了处理后PrP蛋白的PK抗性.
关键词： 朊蛋白 铜离子 去整合素金属蛋白酶10 蛋白酶抗性 剪切 -
朊病毒检测方法研究进展
朊病毒(PrPSc)现认为是由细胞表面糖蛋白-朊蛋白(PrPc)构象改变而成,可引起人类及动物可传播性海绵样脑病(transmissible spongiform encephalopathy,TSE)的一种特殊的致病因子.
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Creutzfeldt-Jakob病与脑电图的关系
克罗伊茨费尔特-雅各布病,即克雅病(Creutzfeldt-Jakob diseases,CJD),可能系由朊蛋白引起的以海绵样变性为病理特征的亚急性或慢性海绵样脑病[1].在中老年期发病,以急速进行的痴呆、肌张力障碍、周期性的异常脑电图为临床特征.CJD的诊断主要依据脑组织活检及尸检等病理证据,但国内外许多学者报告脑电图周期波对CJD的诊断具有可靠价值,是除病理学以外诊断CJD的重要指标.现将我院2002年5月-2003年5月收诊的两例CJD患者的视频脑电图(video-EEG)及其他临床改变报告如下.
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脑电图对Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值
目的:探讨脑电图在Creutzfeldt-Jakob病(CJD)中的诊断价值.方法:对9例CJD患者进行脑电图跟踪观察.结果:脑电图有特征性改变,表现为弥漫性慢波或平坦波背景上出现阵发性周期现象.结论:脑电图对该病的诊断有重要价值,对怀疑CJD患者应早期反复进行脑电图检查.
关键词： Creutzfeldt-Jakob 朊蛋白 脑电图 三相波 -
朊蛋白PrPc在Enneking III期骨肉瘤中的表达及预后相关性分析
目的：探讨朊蛋白PrPc(cellularprionprotein)在EnnekingIII期骨肉瘤中的表达以及分析其与骨肉瘤转移和患者预后的相关性。方法采用免疫组织化学法(SP法)对初诊已发生肺转移的EnnekingIII期骨肉瘤15例以及相应瘤旁组织中朊蛋白 PrPc 的表达进行检测。同时，检测同期收治的初诊未转移骨肉瘤标本33例作为对照组。比较已有转移的骨肉瘤和未转移骨肉瘤中 PrPc 蛋白的表达水平。对2006年1月至2009年12月收住院的两组骨肉瘤患者的临床资料进行回顾性分析。收集年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、病理性骨折、生存时间等资料。应用 Kaplan-Meier 法计算患者生存年率，应用 Log-rank 检验进行单因素分析，应用Cox回归模型进行多因素分析，探讨PrPc的表达和不同的临床特征与骨肉瘤患者预后生存率之间的关系。结果 PrPc蛋白在骨肉瘤组织中普遍表达，在瘤旁组织中不表达；EnnekingIII骨肉瘤中PrPc的表达要显著高于Enneking II期对照组( P＝0.006)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验显示PrPc的表达水平与骨肉瘤患者预后相关( P＝0.010)，Enneking分期与预后相关( P＝0.025)。多因素分析显示，PrPc表达水平和肿瘤的Enneking分期可以作为骨肉瘤预后的独立影响因素。结论朊蛋白PrPc在已有转移的EnnekingIII骨肉瘤中的表达高于未转移患者。PrPc高表达的骨肉瘤患者预后较差。PrPc的高表达可能与骨肉瘤预后不良有一定相关性。
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α-突触核蛋白病类朊蛋白样发病机制研究进展
突触核蛋白病是具有α-突触核蛋白病理特征的疾病,包括帕金森病、路易体痴呆、路易体变异型阿尔茨海默病、多系统萎缩、单纯性自主神经功能障碍以及脑内铁沉积神经变性病-1型,其共同病理特征是α-突触核蛋白选择性地在易损的神经元和神经胶质细胞中积聚,形成包涵体.近年来多项研究表明错误折叠的α-突触核蛋白是引起这一类疾病的主要原因,而且其具有与朊蛋白相似的作用方式,在细胞内和细胞间发生转移从而在神经系统内播散,导致多种神经变性疾病的发生和进展.本文就α-突触核蛋白病类朊蛋白样发病机制研究进展进行综述.
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典型Creutzfeldt-Jakob病一例
1 病例报告 患者女性,52岁,农民,主因“认知功能进行性下降伴肢体抽动8个月,加重2个月”入院.患者8个月前无明显诱因出现认知功能下降,表现为记忆力减退,不能记起近期事件,夜间间断出现右侧肢体抽动及睁眼,伴失眠及烦躁,无言语障碍,生活可自理,未予诊治.6个月前患者出现反应迟钝,做日常家务能力明显下降,间断出现言语困难,表现为不能完整叙述整句话,逐渐出现重复性语言及行为,就诊于当地医院,考虑为“抑郁症”,给予口服药物(具体不详)治疗效果欠佳.2个月前患者出现生活不能自理,家属照顾日常起居,患者可理解家属说话,但自己不能表达,同时出现步态不稳,就诊于当地医院,行腰椎穿刺脑脊液常规检查:外观无色透明,白细胞1×106/L,蛋白0.6 g/L,氯124.1 mmol/L,葡萄糖3.15 mmol/L.
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Creutzfeldt-Jakob病一例报道
CJD为Creutzfeldt-Jakob disease的简称,又称皮质纹状体脊髓变性,是由具有感染性的蛋白质朊蛋白(prion protein,PrP)引起.
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脑脊液127份14-3-3蛋白检测结果及分析
克雅病(Creutzfelt-Jacob disease, CJD)是由于朊蛋白(prion)引起的人类中枢神经系统的致死性退行性疾病.目前对此病的确诊依赖于脑组织常规病理检测或异常朊蛋白(PrPSc)的检出.但由于脑组织标本获得困难且易造成潜在污染,目前各国学者一直致力于CJD脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)标志物的研究,发现14-3-3蛋白的敏感性、特异性高,是CJD患者生前有效的实验室诊断方法之一[1,2].但是近年的研究发现,脑梗死急性期等多种疾病的CSF中均可检出14-3-3蛋白[3].CSF14-3-3蛋白的诊断价值存在争议.我们对127份CSF进行了14-3-3蛋白检测,以期明确CSF14-3-3蛋白对我国神经系统疾病特别是CJD的诊断价值.
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脑室内(鞘内)应用万古霉素治疗中枢神经系统感染
中枢神经系统感染是指各种生物性病原体,包括病毒、细菌、螺旋体、寄生虫、立克次体和朊蛋白等侵犯脑或脊髓实质、被膜和血管等,引起急、慢性炎性反应(或非炎性反应)性疾病[1].目前随着多重耐药菌的不断增多,尤其是耐苯唑青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐苯唑青霉素表皮葡萄球菌(MRSE)感染率在葡萄球菌致颅内感染的比例迅速上升,使得万古霉素逐渐成为对抗这两类病原体的"金标准"[2].此外,这些耐药菌对万古霉素的低抑菌浓度(MIC)水平明显升高,使得药物在病灶区域难以达到有效的浓度,因此为解决临床的实际治疗困难,有些临床医生采用了脑室内(鞘内)局部给药的方法[3-4].
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朊蛋白在口腔鳞状细胞癌和黏膜白斑中的表达及意义
目的 检测朊蛋白在口腔正常黏膜、白斑、鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)以及其各亚组之间的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测OSCC(84例)、白斑(26例)及正常黏膜组织(20例)中朊蛋白的表达情况,并分析其在性别、种族、组织病理分期、临床分期等临床参数的相关性.结果 朊蛋白在正常黏膜、白斑及OSCC组织中的阳性表达率分别为15％(3/20)、42％ (11/26)和95％(80/84);朊蛋白在白斑及OSCC中的表达差异有统计学意义(P＜0.05),阳性率随分化程度下降而升高(P＜0.05).朊蛋白在肿瘤TNM分期及性别、种族中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在TNM分期中,I、Ⅱ期朊蛋白表达强度随分化下降而明显升高(P＜0.05),但与Ⅲ、Ⅳ期之间的差异无统计学意义(P＞0.05);而在I+Ⅱ和Ⅲ+Ⅳ期的总体表达差异中有统计学意义(P＜0.05).结论 朊蛋白在OSCC中的高表达及在白斑、OSCC中的渐进性高表达与OSCC的发生、病理分期、及临床TNM分期密切相关,可为OSCC的早期诊断和靶向治疗提供依据.
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细胞型朊蛋白的神经保护作用
朊蛋白是人类朊蛋白病的致病因子,细胞型朊蛋白是其在细胞内的正常形式,具有神经保护作用.本文综述细胞型朊蛋白的分子生物学特征及其通过细胞表面信号传导、抗氧化应激及抗Bax凋亡所起的神经保护作用,为神经退行性疾病的防治提供新的思路.
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层粘连蛋白受体研究进展
层粘连蛋白受体(LR),是重要的细胞外基质成分层粘连蛋白的受体.它是一个多功能蛋白,与肿瘤细胞的转移密切相关,能够介导病毒和朊蛋白与宿主细胞的相互作用,并且参与细胞的信号转导.本文就层粘连蛋白受体的生物学功能以及在疾病治疗方面的研究进展进行综述.
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散发型克雅病脑部影像表现
克雅病(Creutzfeldt-Jakoh disease,CJD)是由致病性朊蛋白(PrPSc)引起、以脑实质海绵样变性为基础的人亚急性或慢性海绵样脑病(如感染动物,则称疯牛病).该病发病率低,约为1/100万,临床容易误诊;并且该病可传播,及早诊断可避免医原性感染[1].国外对该病影像表现有较多研究,国内相关文献较少[2-3].散发型CJD( sCJD)是CJD常见的类型.笔者回顾性分析8例临床诊断为sCJD患者的MRI和CT资料,总结sCJD的影像学表现.
