山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响.方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g·L-1 5个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P＜0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P＜0.05或P＜0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P＜0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异.结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑索合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据.

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响.方法 采用MTT 法测定不同浓度的复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析.结果 复色1 号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P＞0.05),0.05～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P＜0.05),呈现一定的抑制作用;复色1 号方在0.001～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A 值均有显著性差异(P＜0.05),呈剂量依赖性激活作用.在0.001～ 0.01g/l 浓度范围内,复色1 号方的佳激活浓度为0.01g/l.结论 复色1 号方没有促进小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16 黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用.

趋化因子与病毒性肝炎的关系

0引言趋化因子(Chemokines)是一类结构相似的糖蛋白,具有较强的白细胞激活和趋化活性,包含有70-90个氨基酸,相对分子质量8-10kD,带有4个半胱氨酸残基,根据其末端的2个半胱氨酸残基是直接相连或是被一个氨基酸分开而分为α和β两大家族、19个成员,具有趋化和激活中性粒细胞、单核细胞或某些T细胞亚群、趋化嗜酸性粒细胞、趋化嗜碱性粒细胞并刺激其释放组织胺及刺激造血细胞、成纤维细胞、角化细胞或黑素瘤细胞的生长等作用,近年来研究发现,Chemokines在病毒性肝炎的发病过程中也起着重要的作用[1-2].

维A酸在细胞和基因水平调控黑素表达的研究

目的 探讨维A酸治疗皮肤色斑的作用机制.方法 应用不同浓度的维A酸作用于B16F10黑素瘤细胞及正常人黑素细胞,观察肘酪氨酸酶mRNA的表达、酪氨酸酶活性、黑素含量及黑素细胞增殖率的影响.结果 维A酸的作用浓度为100μmol/L时,黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达下调均值为30.13%;当浓度为500μmol/L以上时,可使酪氨酸酶活性降低82.79%,并随着浓度的增加作用越明显;而对黑素含量的降低则需要更高的浓度(1 000μmol/L);同时,还有促进黑素细胞增殖的作用.对照组氧醌对酪氰酸酶mRNA的表达无明显影响,对色素细胞有抑制和毒性作用.结论 维A酸能够抑制黑素产生,是通过下调酪氨酸酶的表达和活性来完成.

全反式维A酸、阿维A和他扎罗汀对人黑素瘤细胞A375凋亡及活性Caspase-3的影响及意义

目的 探讨全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)、阿维AT和他扎罗汀对人黑素瘤细胞A375凋亡和活性Caspase-3的影响及其意义.方法 体外培养人黑素瘤细胞A375,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡(磷脂结合蛋白V-PI法)和活性Caspase-3(荧光抗体法).结果 ATRA、阿维A能不同程度地诱导A375细胞凋亡(均P＜0.05),其中阿维A作用显著,其次为ATRA,而他扎罗汀作用不明显(P＞0.05)；ATRA、阿维A亦可使A375细胞活性Caspase-3水平上调(均P＜0.05)；阿维A、ATRA对细胞凋亡的影响和对细胞活性Caspase-3水平的影响均呈正相关(均P＜0.05).结论 阿维A和ATRA诱导A375细胞凋亡过程中 Caspase-3具有重要作用,维A酸具有恶性黑素瘤辅助治疗用药的应用前景.

血清药理学方法研究复方中药对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的运用血清药理学方法研究复方中药白斑一号对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响.方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,运用血清药理学、细胞学的方法,测定药物对B16黑素瘤细胞增殖情况,对酪氨酸酶活性调节作用及黑素含量的影响.结果复方中药白斑一号能促进黑素合成和激活酪氨酸酶,从而阐明了该方在白癜风治疗中的机制.

养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株酪氨酸酶mRNA转录水平的影响

目的观察养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株酪氨酸酶mRNA转录水平的影响机制,探讨养颜青娥丸治疗色素增加性皮肤病的作用机制.方法 PCR-ELISA方法检测养颜青娥丸复方不同浓度及不同时间对黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA转录的影响.结果 PCR-ELISA方法研究结果表明在加药6 h后养颜青娥丸对酪氨酸酶mRNA有抑制作用,48 h后抑制作用不太明显;各浓度对mRNA的水平均有抑制作用;在加药6 h后并在2.01 mg/mL抑制作用为显著.结论养颜青娥丸能抑制黑素瘤细胞内酪氨酸酶mRNA转录,对色素增加性皮肤病可能有一定的治疗作用.

白消一号方对黑素瘤细胞与角质形成细胞混合培养模型中黑素合成的影响

目的 体外构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素瘤细胞的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用.方法 分别培养角质形成细胞、黑素瘤细胞;体外构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,大鼠中药灌胃后不同时间取血清加入此模型中,用MTT法、多巴氧化法、及NaOH法.检测含药血清对黑素瘤细胞增殖、酪氧酸酶活性以及黑素合成的影响.结果 含药血清可促进黑素瘤细胞增殖,上调酪氨酸酶活性.增加黑素合成.结论 成功构建了黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的混合培养模型,白消一号方作用于此模型对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成均呈促进作用.

白消一号方作用于黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型中黑素小体转运的观察

目的 体外建立黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素小体转运的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用.方法 体外培养黑素瘤细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素一琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记黑素瘤细胞内的黑素小体,然后将标记的黑素瘤细胞与角质形成细胞共同培养.大鼠中药灌胃后取血清加入此模型中,在倒置显微镜下观察混合细胞模型生长及共聚焦显微镜下观察共培养模型中黑素小体由黑素瘤细胞向角质形成细胞的转运情况.结果 含药血清可使黑素小体由黑素瘤细胞向角质形成细胞的转运增加.结论 在共聚焦显微镜下观察到白消一号方可以促进黑素小体转运,此途径可能为白消一号方治疗白癜风的作用机制之一.

积雪草甙对酪氨酸酶活性的抑制作用及对Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的探讨积雪草甙外用脱色素的作用机制.方法体外观察积雪草甙对蘑菇酪氨酸酶活性的作用并进行酶促反应动力学分析.进一步以系列浓度的积雪草甙作用于体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率.结果积雪草甙能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性,酶促动力学分析提示积雪草甙为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂.进一步研究发现,积雪草甙能抑制体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,但对细胞增殖无明显影响.与氢醌相比,积雪草甙抑制酪氨酸酶活性低于相同浓度的氢醌.结论积雪草甙可直接作用于黑素细胞,抑制黑素合成,是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂.

B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响

目的 探讨B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和一氧化氮(NO)的影响.方法 体外培养同基因小鼠腹腔巨噬细胞,分为实验组和空白对照组.实验组加入B16F10黑素瘤细胞培养上清液,空白对照组加入RPMI 1640完全培养基,分别用LPS刺激后继续培养24 h,采用免疫细胞化学染色法及L929细胞抑制实验[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]检测巨噬细胞TNF-α的表达及活性,Griess法检测NO的含量.结果 实验组TNF-α阳性表达较空白对照组明显减少,TNF-α活性较空白对照组明显降低[吸光度(A值):0.746±0.049比0.387±0.030,P＜0.01]；巨噬细胞释放NO的水平明显低于空白对照组(μmol/L:4.830± 1.384比11.455±0.175,P＜0.01).结论 B16F10黑素瘤细胞培养上清液对LPS诱导的同基因小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO具有抑制作用.

紫草素对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响

目的 探讨紫草素对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.方法 采用MTT法测定紫草素对人A375黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH裂解法测定黑素合成.并分成实验组(紫草素组)、对照组(空白组)和阳性对照组[甲氧沙林(8-MOP)组],对其结果进行比较分析.结果 紫草素浓度在0.25～1μmol/L对人A375黑素瘤细胞增殖无影响(P＞0.05),2μmol/L和4μmol/L的紫草素对于A375黑素瘤细胞的增殖有一定的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).紫草素对于人A375黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性呈剂量依赖性激活作用.实验组与对照组比较,0.25、0.5及1μmol/L紫草素对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性有激活作用,差异有统计学意义(P＜0.01);且阳性对照组紫草素作用优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组浓度为0.25、0.5及1μmol/L紫草素溶液和阳性对照组与对照组比较,对于人A375黑素瘤细胞中黑素合成有激活作用,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 紫草素对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用.

白僵蚕粗提物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型TYR及其相关蛋白TRP-1、TRP-2mRNA表达的影响

1 材料1.1 药物 白僵蚕:购自北京同仁堂制药集团哈尔滨药店,水煎醇沉,用MEM增养基配制成0.5、1.0g/L.1.2 仪器 Tprofessional standad 96 PCR扩增仪:德国Biometra公司;HeλⅡosγ可见紫外分光光度计:美国热电公司;DYY-10C型电泳仪:北京市六一仪器厂;Chaml Gel 5000凝胶成像系统:北京赛智创业科技有限公司.1.3 细胞株 黑素瘤细胞(A375):由中国科学院细胞中心提供;人永生角质形式细胞(HaCat)细胞:购自武汉大学中国典型培养物保藏中心.1.4 试剂 MEM培养基、Trizol细胞裂解液:Gibco公司;逆转录试剂盒:BIOBASIC INC;DNA多聚酶链式反应(PCR)试剂盒:上海生物工程技术服务有限公司;DNA Marker D2000:北京TIANGEN公司;引物核苷酸片段:大连宝生物工程有限公司;6×DNA Loading Buffer、5×RNA Loading Buffer:北京Solarbio公司;其他试剂均为分析纯.

消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素合成的影响

目的 观察消白合剂对人A375黑素瘤细胞生长、酪氨酸酶活性及黑素含量的影响.方法 设消白合剂水提液体0.01、0.1、1、10 g/L浓度实验组和空白对照组,体外观察对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶的活性以及黑素含量的调节作用.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定消白合剂对细胞增殖的影响,酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法(490 nm)测定对黑素含量的影响.结果 消白合剂在0.01～0.1 g/L浓度范围内对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成有促进作用,而随着浓度的继续增高反而起抑制作用.结论 消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素的合成具有双向调节作用,临床运用时应该考虑到药物的量的优化.

siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖

目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响.方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-I及对照psilencer2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达.MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响；MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性.结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0％和18.9％.干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)％ vs (63.5±0.7)％,P＜0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)％ vs (27.5±0.3)％,P＜0.05；(11.5±0.3)％ vs (9.1±0.6)％,P＜0.01].干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性.结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性.

GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用

目的:研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)膜修饰小鼠黑素瘤B16.F10细胞制备的疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用.方法:采用生物素-链亲合素-GM-CSF融合蛋白技术制备GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗,将BALB/c小鼠随机分为GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组、GM-CSF与B16.F10细胞混合疫苗组、B16.F10细胞疫苗组、GM-CSF组、生理盐水组.各组于第1天和第7天分别进行免疫接种,第14天皮下注射0.2 ml B16.F10细胞(1×106个细胞)进行攻击,观察各组小鼠无瘤率和生存期;攻击后24 d 用ELISA法检测小鼠脾细胞INF-γ分泌水平.结果:接受B16.F10细胞攻击后第60天和第90天,GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组小鼠均未成瘤,存活率为100%;GM-CSF与 B16.F10细胞混合组无瘤率分别50%和40%,存活率分别为70%和40%;B16.F10细胞疫苗组无瘤率均为20%,存活率分别为80%和20%;GM-CSF组和生理盐水组无瘤率为0,无小鼠存活.GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组的IFN-γ分泌量比其他组明显升高(P<0.01).结论:GM-CSF膜修饰B16.F10肿瘤细胞疫苗可以激发BALB/c小鼠特异性抗肿瘤免疫反应,有效防止B16.F10肿瘤细胞的攻击.

cEGFR-rFc融合DNA疫苗抗小鼠黑素移植瘤的效果

目的:构建cEGFR-rFc融合DNA疫苗, 观察其对小鼠黑素移植瘤的抑制作用.方法:以异种同源鸡EGFR(chicken EGFR,cEGFR)膜外部分与兔疫球蛋白IgG的Fc段(rabbit IgG Fc,rFc)为基础构建真核表达载体pVAX1/cEGFR-rFc,脂质体法转染黑素瘤B16 细胞,免疫荧光法检测融合蛋白在B16细胞中的表达;以融合DNA疫苗免疫C57BL/6J小鼠,Western blotting法检测融合蛋白在小鼠体内的稳定表达.疫苗免疫小鼠接种B16黑素瘤细胞,14 d后处死部分小鼠,取出瘤体称重,计算抑瘤率;同时观察小鼠荷瘤后的生存率;ELASIA法检测DNA疫苗免疫小鼠血清抗EGFR抗体滴度,流式细胞仪测定小鼠脾细胞淋巴细胞亚群.结果:成功构建融合DNA疫苗pVAX1/ cEGFR-rFc,重组载体转染B16细胞后能检测到融合蛋白显著表达,疫苗免疫小鼠后能检测融合蛋白体内稳定表达.融合DNA疫苗能够延缓小鼠黑素移植瘤的生长,抑瘤率为54%(P<0.01);能延长荷瘤小鼠的生存期(疫苗组小鼠接种瘤细胞后30 d的生存率为40%);融合DNA疫苗诱发小鼠产生高滴度抗EGFR抗体(效价1∶1 000)和T细胞免疫(疫苗组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞数目显著增加, P<0.01).结论:cEGFR-rFc融合DNA疫苗能产生有效对抗黑素瘤B16细胞的免疫效应.

半抗原修饰的黑素瘤细胞激活树突状细胞诱导特异性T细胞反应

目的:探索半抗原[二硝基氟苯(DNP)]修饰的恶性黑素瘤细胞(恶黑)激活树突状细胞(DC)体外诱导特异性T细胞反应的抗肿瘤效应.方法:采用DNP修饰恶黑细胞B16(H-2b),然后在体外激活C57BL/6小鼠(H-2b)外周血来源的DC,观察其诱导T细胞的增殖和特异性T细胞杀伤功能;在小鼠皮肤迟发性超敏反应实验和荷瘤实验中观察DNP修饰瘤苗+DC的特异性.结果:经DNP修饰的B16细胞激活的DC,诱发T细胞增殖能力和对B16细胞的特异性杀伤效应均明显高于未修饰的B16细胞和DC.动物实验显示DNP修饰瘤苗联合DC具有明显的诱发皮肤迟发性超敏反应作用和抑瘤作用.结论:DNP修饰B16所激活的DC可以诱导更强的恶黑特异性T细胞效应.

氯化锂通过干预肌醇磷酸通路增加黑素瘤细胞的色素沉着

021蛋白激酶抑制剂对培养的人黑素瘤细胞中辐射诱导的WAF1累积的影响