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表皮生长因子受体/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶通路对小鼠黑素瘤B16细胞迁移的影响
目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路对小鼠黑素瘤B16细胞迁移的影响.方法:蛋白质免疫印迹方法分析各蛋白的表达;phagokinetic track motility法观察细胞的迁移.结果:表皮生长因子(EGF)能促进小鼠黑素瘤B16细胞迁移;AKT抑制剂(wortmannin)和水通道蛋白-3(aquaporins-3,AQP3)抑制剂(CuSO4)能抑制小鼠黑素瘤B16细胞迁移;EGF可诱导AKT磷酸化,EGF处理后5 min磷酸化AKT达到高峰.wortmannin和CuSO4可抑制细胞中AQP3的表达.结论:在小鼠黑素瘤B16细胞中,EGF通过磷酸化EGFR,激活AKT,进而使AQP3表达上调,促进B16细胞迁移.这一通路可被AKT和AQP3抑制剂阻断,这些涉及的信号通路可能成为潜在的治疗黑素瘤的靶点.
关键词： 表皮生长因子 水通道蛋白3 黑素瘤细胞 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 -
表皮生长因子通过其受体途径诱导小鼠黑素瘤B16细胞迁移的研究
目的:研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导小鼠黑素瘤B16细胞移行及其信号通路机制.方法:蛋白质免疫印迹方法分析各蛋白的表达;细胞迁移试验(phagokinetic track motility)测定法观察细胞的迁移.结果:EGF可诱导表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化,EGF处理后5 min,EGFR和ERK的磷酸化达到峰值,EGFR激酶抑制剂(PD153035)和ERK抑制剂(U0126)可阻断EGF诱导的ERK磷酸化;EGF可显著提高细胞中水通道蛋白-3(aqua-porins-3,AQP3)的活性,并随时间延长活性增强,24 h达到较高水平,AQP3活性亦随浓度升高而增强,当EGF浓度为100μg/L时达到较高水平:PD153035、U0126和CuSO_4可抑制AQP3的活性以及细胞的移行.结论:在小鼠黑素瘤B16细胞中,EGF通过磷酸化EGFR,激活ERK,进而使AQP3表达上调,促进B16细胞迁移.这一通路可被EGFR激酶抑制剂、ERK和AQP3抑制剂阻断,这些涉及的信号通路可能形成潜在的治疗黑素瘤的靶点.
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黑素瘤细胞培养上清液抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌白介素-12的研究
目的:探讨M14黑素瘤细胞培养上清液(melanoma culture supematants,MCS)在体外对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白介素(IL)-12的影响.方法:将小鼠腹腔巨噬细胞在体外分别以脂多糖(LPS)(10μg/mL)、MCS(100μg/mL)、PD98059(20μmol/L)等单独及共同作用,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清液中巨噬细胞IL-12 p40的分泌,用免疫印迹(Westem blot)法分析巨噬细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)44/42/丝裂原激活蛋白酶(MAPK)、p38 MAPK和c-Jun氨基末端激酶/应激活化蛋白激酶(JNK/SAPK)蛋白表达.结果:MCS在体外能够显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-12 p40[(12.82±2.87)ng/mL],且培养上清液中IL-12水平的降低与细胞核磷酸化的ERK44/42蛋白表达增强相一致;此外,经ERK44/42特异性抑制剂PD98059预处理的巨噬细胞其IL-12 p40的分泌量却不受MCS抑制[(25.23±4.52)ng/mL,P＞0.05].结论:黑素瘤细胞分泌物通过活化ERK MAPK信号传导通路抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-12.
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肾着祛斑汤对紫外线诱导的小鼠B-16黑素瘤细胞株黑素合成的抑制作用
肾着祛斑汤是欧阳恒教授多年来用于治疗黄褐斑的经验处方,我们研究该方对紫外线诱导的小鼠B-16黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶(TYR)活性及黑素合成的影响,以期探讨治疗黄褐斑的机制.
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积雪甙对黑素瘤细胞生长影响的实验研究
目的研究积雪甙对黑素瘤细胞生长的影响.方法将黑素瘤细胞B16常规传代培养,取其生长状态良好的对数生长期细胞,观察积雪甙对B16细胞的生长抑制作用,并进行对B16细胞生长抑制作用的形态学观察,用流式细胞仪检测积雪甙对B16细胞诱导凋亡的作用.结果随着积雪甙的剂量增加,对B16细胞有丝分裂的抑制增加.代表凋亡早期细胞的annexin-v阳性细胞比例增加,摄取标记细胞线粒体的R123的细胞比例降低,而标记核内DNA的PI阳性细胞的比例增加,表明该药能够诱导细胞凋亡或致死亡.结论积雪甙有抗黑素瘤细胞生长作用.
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微管相关蛋白2基因转染抑制恶性黑素瘤细胞生长的研究
微管相关蛋白中的微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)存在于正常黑素细胞的胞浆内,具有稳定微管束,保持色素细胞树枝状形态学特征的作用[1].在原位、侵袭性及转移性黑素瘤细胞中,MAP2基因的表达逐渐下降[2].为探讨是否由于MAP2基因的缺失造成了肿瘤的侵袭,MAP2基因的超表达是否会对肿瘤的生长产生抑制作用,同时探索一种基因治疗恶性黑素瘤的理想方法,我们进行了研究.
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雷帕霉素诱导人黑素瘤细胞M14自噬及Bcl-2、Bax表达的变化
目的:对雷帕霉素诱导黑素瘤细胞发生自噬的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制.方法:不同浓度雷帕霉素(10、50、100 nmol/L)处理黑素瘤细胞M14,采用MDC荧光染色检测自噬囊泡；免疫细胞化学法检测自噬蛋白LC3B的表达；透射电子显微镜观察黑素瘤细胞超微结构的变化；Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达；采用罗丹明123染色(Rhodamine 123)流式细胞术检测线粒体膜电位的变化；MTT比色法检测雷帕霉素对M14细胞增殖的抑制作用.结果:经不同浓度的雷帕霉素处理后,MDC阳性细胞数增多,M14细胞发生自噬；自噬蛋白LC3B的表达增强；自噬水平随雷帕霉素浓度的升高而逐渐增强.透射电子显微镜观察可见M14细胞质内有大量独立双层膜结构、线粒体肿胀并出现自噬体、自噬溶酶体.Western blot结果显示雷帕霉素可以下调M14细胞中的凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,同时上调凋亡诱导蛋白Bax的表达.雷帕霉素可引起M14细胞的线粒体膜电位下降,与对照组相比差异显著(P＜0.05).10～100 nmol/L的雷帕霉素明显抑制黑素瘤细胞M14的增殖,该作用呈剂量依赖性,随着药物浓度的升高,抑制率增加,与空白对照组比较均有显著性差异(P＜0.0l).结论:10～100 nmol/I的雷帕霉素可诱导黑素瘤细胞发生自噬,抑制细胞的生长.其机制可能与蛋白Bcl-2和Bax表达水平有关.
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盐酸氨基葡萄糖胺诱导黑素瘤细胞分化的形态学观察
目的:研究盐酸氨基葡萄糖(GAH)对黑素瘤细胞分化的诱导作用.方法:用GAH处理体外培养的黑素瘤细胞,观察细胞生长和形态的变化.结果:细胞生长受到抑制,细胞形态发生改变,细胞由圆形变为梭形,核质比减小,核仁减少或消失,有些细胞胞内出现空泡;Giemsa染色显示实验组处于分裂期的细胞数远远少于对照组.结论:黑素瘤细胞经GAH作用后有向正常细胞转化的趋势,GAH是一种潜在的肿瘤细胞分化诱导剂.
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白介素－8与表皮生长因子对黑素瘤A375细胞增殖的影响
目的：：明确IL－8与表皮生长因子( EGF)对黑素瘤细胞增殖的影响。方法：将黑素瘤细胞A375分为9组：EGF组；EGF＋AG1478组；AG1478组；IL－8组；IL－8I组；IL－8＋IL－8I组；EGF＋ IL－8组；EGF＋IL－8＋AG1478＋IL－8I组及对照组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况；免疫印迹法检测EG-FR、蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶、磷酸化蛋白激酶B、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶、磷酸化表皮生长因子受体的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应检测EGFR与IL－8R mRNA水平的表达。结果：EGF组黑素瘤细胞增殖、上述蛋白的表达和mRNA水平显著高于对照组、EGF＋AG1478组和AG1478组。IL－8组显著高于对照组、IL－8I组和IL－8＋IL－8I组(均P<0.05)，EGF＋AG1478组显著高于EGF组和IL－8组( P<0.05)。结论： IL－8与EGF均能促进人黑素瘤细胞的增殖，它们之间可能具有相互协同作用，这种协同作用可能与AKT和MAPK等共同通路作用有关。
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U0126对黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用
目的:评价U0126对人黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用.方法:人黑素瘤A375细胞在6孔细胞培养板中培养,加U0126处理过夜,然后通过观察A375细胞的细胞形态、细胞移动及细胞侵袭判断U0126对A375细胞的抑制.蛋白电泳试验检测U0126对黑素瘤细胞A375的ERK1/2蛋白磷酸化的影响.结果:U0126诱导A375细胞产生肌动蛋白(actin)张力丝,导致细胞形态改变；A375细胞的移动和细胞侵袭被抑制.结论:U0126可能通过抑制黑素瘤的ERK1/2蛋白的磷酸化从而抑制人黑素瘤细胞A375的侵袭.
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黑素瘤细胞粘附与迁移相关表面分子研究进展
表皮黑素单元表明,黑素细胞(melanocyte,MC)能与约36个角质形成细胞(keratinocyte,KC)形成一种共生关系.通过对MC分化的调节,使得MC和KC的生命周期比例稳定地维持在1∶5.MC在增殖时必须断开与基底膜以及KC的连接,回缩树突并分裂,然后沿基底膜迁移,后再与基底膜和KC重新结合成表皮黑素单元.
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益母草鲜汁对皮肤黑色素抑制作用的实验研究
酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的主要限速酶,其活力可控制黑素生成量[1-2].它不仅决定黑索合成的速率,还是黑素细胞成熟的特征性标志[3-4].益母草虽为妇科良药,但在美容方面的功效也早有记载.笔者选择益母草鲜汁进行实验研究,以验证其对皮肤黑色素的抑制作用.1 材料
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小柴胡汤对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响
目的 观察小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成过程的作用.方法 培养黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系,以熊果苷为对照组,利用MTT法、多巴氧化法、NaOH法测定细胞活力,酪氨酸酶活性及黑素的含量.结果 小柴胡汤40 ug/ml以上的小柴胡汤水煎液可明显抑制黑素瘤细胞和共培养细胞活力(P＜0.01)；小柴胡汤水煎液对黑素瘤细胞及共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度药品组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；小柴胡汤对于黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性、黑素生成的抑制作用与其对于共培养细胞中黑素生成及酪氨酸酶活性的抑制作用无差别(P＞0.05),其功效优于阳性对照熊果苷组.结论 小柴胡汤在黑素瘤细胞及黑素瘤细胞与HaCaT细胞共培养体系中对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成有较强的抑制作用.
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携带白细胞介素-24的增殖型腺病毒联合放疗诱导黑素瘤细胞凋亡的研究
恶性黑素瘤的预后不良性除其较高的远处转移率及侵袭能力较强外,主要因其对常规治疗手段如放化疗等敏感性较低所致[1].白细胞介素-24(IL-24)是新发现的肿瘤抑制基因,能选择性抑制黑素瘤等多种肿瘤的生长并诱导其凋亡,还可以抑制肿瘤血管形成,增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性[2].近年来,用增殖型腺病毒为载体携带基因治疗肿瘤成了科学研究的热点[3].本研究旨在观察携带IL-24基因的增殖型腺病毒ZD55-IL-24在黑素瘤细胞中的表达及联合低剂量放疗后的变化,探讨ZD55-IL-24联合放疗增强诱导黑素瘤细胞凋亡的作用.
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高良姜总黄酮对B16细胞增殖和酪氨酸酶活性及黑素合成的影响
目的 探讨高良姜总黄酮对B16小鼠黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,比色法测定酪氨酸酶活性和黑素含量.结果 在浓度为0.25～10.00 μmol·L-1范围内,高良姜总黄酮均可显著促进B16细胞的增殖(P＜0.01);浓度为0.5,1.0 μmol·L-1时,高良姜总黄酮能够促进酪氨酸酶活性和黑素合成.结论 高良姜总黄酮在一定浓度范围内能够促进B16细胞增殖、酪氨酸酶活性升高和黑素合成.
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养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的影响
目的:研究养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响及对细胞内酪氨酸酶的影响.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定养颜青娥丸对细胞增殖的影响;酶学方法研究养颜青娥丸对酪氨酸酶活性的作用;470 nm比色法测定合成黑素含量A值.结果:研究发现养颜青娥丸对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用,对合成黑素含量有降低作用;组方单味药中杜仲、沙苑子、制首乌对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用,对合成黑素含量有降低作用;补骨脂、核桃肉对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有促进作用,对合成黑素含量有增加作用.结论:养颜青娥丸对黄褐斑可能有一定的治疗作用,但治疗机制不能单纯用生化学、酶学改变来解释.
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复方中药含药血清对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响
目的 探讨复方中药含药血清对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶(TYR)活性的影响.方法 体外培养人A375黑素瘤细胞,采用多巴速率氧化法研究复方中药含药血清对TYR活性的影响.结果 低浓度(5％～10％)的Ⅰ方、Ⅱ方、Ⅲ方对酪氨酸酶活性无明显激活作用(P＞0.05)；高浓度(20％～30％)的Ⅰ方、Ⅲ方、Ⅵ方对TYR活性均有明显激活作用(P＜0.05),以Ⅵ方作用显著,且与其它各组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 对TYR具有激活作用的中药组成复方并不一定对TYR有激活作用,具有祛风活血和补肾三重作用的Ⅵ方在促进TYR活性上优于祛风除湿Ⅰ方、养血活血Ⅱ方和滋补肝肾Ⅲ方.
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复方中药白癜冲剂对B16黑素瘤细胞生物学特性影响的实验研究
目的:观察复方中药白癜冲剂对体外培养的B16黑素瘤细胞生物学特性的影响.方法:体外培养B16黑素瘤细胞,测定不同浓度白癜冲剂对B16黑素瘤细胞增殖、对酪氨酸酶活性和黑素含量的影响.结果:低浓度剂量组白癜冲剂对B16黑素瘤细胞较对照组有明显促增殖作用,黑素合成增多,酪氨酸酶活力增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:复方中药白癜冲剂能促进B16黑素瘤细胞的黑素合成,提高酪氨酸酶活力.
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紫杉醇在乳腺癌治疗中的应用
紫杉(俗名yew)学名红豆杉,是世界珍稀抗癌植物,紫杉醇(paclitaxe,商品名Taxol)是从红豆杉树皮、木质部分及针叶中分离提纯的一种有效天然化合物,其在体外对L1210和P388白血病细胞、Walker256肉瘤细胞、肉瘤180及B16黑素瘤细胞具有很高的活性.经30多年不懈的研究,已在作用机理、药理学及临床等方面取得重大进展.现在临床使用的有紫杉醇(又称:泰素、安泰素、特素、紫素等)针剂、紫杉胶囊、达克素片等剂型,属广谱抗肿瘤植物药,对乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌等有独特的疗效.
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肉桂醛对恶性黑素瘤A375细胞增殖和分泌VEGF的影响
目的 研究肉桂醛对体外培养的人恶性黑素瘤细胞株A375增殖和分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法 A375细胞在体外培养扩增后,在培养基中分别加入10、20、40 μmol/L肉桂醛,分别在培养24、48、72 h MTT法检测细胞活性.同时收集各个浓度肉桂醛处理不同时相的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中VEGF分泌量.结果 10 μmol/L肉桂醛作用24h即能抑制A375细胞增殖,10、20、40 μmol/L肉桂醛间的抑制强度具有统计学意义(P＜0.01).40 μmol/L的肉桂醛作用72 h后细胞增殖抑制率高,达(88.91±4.5)％.随肉桂醛作用时间延长,A375细胞分泌VEGF的量逐渐减少,72 h后各浓度间的抑制作用具有统计学意义(P＜0.01).40 μmol/L肉桂醛作用72 h后A375细胞分泌的VEGF含量低,为9.55 pg/ml.结论 肉桂醛能抑制人黑素瘤细胞增殖和VEGF的分泌,其抑制强度与药物浓度和作用时间成正比.
关键词： 肉桂醛 黑素瘤细胞 血管内皮细胞生长因子 增殖
