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重组人表皮生长因子的基因重组研究进展
天然的重组人表皮生长因子(hEGF)存在于人体的多种组织和体液中,但主要是从人尿中分离提纯,因其含量非常少,难以大量制备应用于研究和临床当中.自20世纪80年代以来,随着生物技术的飞速发展,基因重组技术不断地得到发展与完善,人们便开始对重组hEGF进行大规模生产的尝试.
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转基因水稻中重组人乳铁蛋白的分离纯化及其抑菌活性研究
目的 研究从转基因水稻中分离纯化重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rhLF),并检测其是否具有抑菌活性.方法 通过饱和硫酸铵分级沉淀从转基因水稻中分离rhLF后,经CM Sepharose FF交换层析和Sephadex G25分子筛层析进一步纯化rhLF.采用微量肉汤稀释法检测不同浓度rhLF(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和5.00mg/ml)对鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特菌的抑制情况.结果 通过分离和纯化成功获得纯度较高的rhLF(纯度约90%),经考马斯亮蓝染色,Western blot和质谱仪鉴定分析确定为rhLF,分子量约为79 kD.抑菌实验显示,5.00和4.00mg/ml rhLF对鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌有持久的抑制效果,2.00和1.00mg/ml rhLF在实验后期也表现出明显的抑菌作用,0.50mg/ml及以下浓度则没有抑菌效果.5.00和4.00mg/ml rhLF在18h内对蜡样芽孢菌表现出一定的抑制效果;5.00mg/ml rhLF对单增李斯特菌在18h内有抑制作用.结论 从转基因水稻中可成功分离和纯化rhLF,纯化后蛋白仍具有明显的抑菌活性.
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柱切换高效液相色谱法及其在食品检验中的应用
柱切换是指利用多通路切换阎改变进样阈与色谱柱、色谱柱与色谱柱、色谱柱与检测器之间的连接关系的技术.对于样品中多组分待测物的净化和分离分析,柱切换高效液相色谱法是有效的分析方法.样品前处理后进样,待测物可在线进行富集、净化、衍生化等,从而减少有机溶剂的用量、提高回收率、降低检出限和定量限.由此综述柱切换的原理和装置,在食品中农药残留检测、兽药残留检测、食品成分分析和其它成分的应用,以及存在的问题.
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让逆流色谱技术为中药现代化服务
逆流色谱技术是一种新颖的分离技术.它是不用任何固态支撑体的液液分配层析法,则能够完全排除支撑体导致的不可逆吸附和对样品的玷染、失活、变性等影响,能实现对复杂混合物中各组分的高纯度制备量分离.本文概述了这一技术的特点、发展简史和应用情况,并就中药成分高纯度标样的制备、新药研究、高质量中间体生产和生产过程的质控等问题,对如何使此项技术为中药现代化服务提出了建议.
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超滤技术在中药注射液制备中应用的体会
超滤是利用超滤膜在外界压力持续作用下,将溶液中不同分子量的组分分离提纯的一种技术.近年来,医药工业已经越来越多地应用这种技术分离提纯有效成分(1),制备注射用水(2)和中药注射液(3).我们将超滤技术用于清开灵注射液的制备,在有效成分的保留、杂质和热原的去除、澄明度及颜色方面都较原工艺有了提高,现报道如下.
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中医方药作用特点及现代药效评价标准的缺陷
目前国际生物医学界对中医药提出频繁的要求是:证据(Evidence)[1~5].寻找证据面临两大主要问题:一是中药作用的物质基础;二是疗效的标准及判定.目前普遍关心和重视的是前者,姑且不论能否搞清中药药效物质,然而是否搞清了物质基础就等于阐明了中药复方,事实上问题远非如此简单.无论是中药复方、单味药或活性组分和单体,在鉴定其有无药理活性时其活性如何定位?新药研究药效学的国家标准基本模拟相应西药药理学;国际或国内分离提纯植物药单味药或复方的成分后,对其活性鉴定时也大多以此为标准或想当然将中药功效与现代药理划等号.
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前列腺穿刺活检后血清PSA的动力学研究进展
前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)自1979年分离提纯出以来,由于其特有的生物学特性,现已广泛应用于临床,检测前列腺癌(prostate cancer,Pca).
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人髓核间充质干细胞的分离提纯方式及生物学活性鉴定
目的:探索人髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs)的提纯方法并鉴定其生物学活性.方法:收集3例腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织(Pfirrmann分级均为Ⅳ级),利用酶消化法分离细胞.采用两种方法分离提纯NPMSCs,一组细胞采用贴壁法培养(贴壁组),另一组通过流式细胞分选技术利用NPMSCs表面阳性标志物CD73、CD90、CD105获得NPMSCs(流式组).将两种方法获得的NPMSCs进行体外培养扩增,分别进行形态学观察,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK-8)检测增殖能力.贴壁组NPMSCs采用流式细胞分选仪在进行分选之前检测免疫表型,流式组NPMSCs在生长达80%~90%融合时进行免疫表型的检测.向成骨、成脂、成软骨诱导分化,诱导28d后分别进行茜素红染色观察其成骨能力、油红O染色观察其成脂能力、甲苯胺蓝染色观察其成软骨能力,利用Imag J软件计算染色区域所占的面积百分比.比较两组NPMSCs在形态学、免疫表型及增殖和分化能力的差异.结果:形态学观察发现,两组NPMSCs均呈漩涡状生长,贴壁组NPMSCs可见散在的单个细胞生长;流式组NPMSCs长梭形形态更长,排列更加紧密,少见散在的单个贴壁生长细胞.流式细胞分选后所得的NPMSCs占细胞总数的(89.67±2.52)%,可以进行体外培养扩增,细胞为典型的长梭形特征,漩涡状生长,在接种后12~15d达80%~90%融合,增殖能力在接种后5~13d明显高于贴壁组NPMSCs (P<0.05).流式组NPMSCs的CD73、CD90、CD105的表达率明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05),并且低表达CD34、CD45及HLA-DR.两种方法获得的NPMSCs均能完成三系诱导分化,流式组成骨、成脂、成软骨染色区域百分比均明显高于贴壁组(P<0.05).结论:利用流式细胞分选技术从人退变髓核组织中可获得较高纯度的NPMSCs,并能进行后续培养扩增.与贴壁法获得的NPMSCs相比,流式细胞分选的NPMSCs具有更强的增殖与分化能力.
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异长春花碱+羟基喜树碱联合治疗晚期乳腺癌的近期疗效观察
异长春花碱(NVB,盖诺)为半合成长春碱类抗肿瘤药物,单药NVB在晚期乳腺癌的治疗中已显示出突出疗效.羟基喜树碱(HCPT)是直接从喜树中分离提纯的天然抗肿瘤药物,因其作用于拓扑异构酶Ⅰ(Topo Ⅰ)的独特抗肿瘤机制而受到重视,现已用于多种肿瘤的治疗并获得了良好的疗效.经多种方案化疗的乳腺癌复发的重要原因之一是乳腺癌细胞产生了多药耐药性(MDR),为此,从1999年6月至今,我们用NVB加HCPT联合治疗了25例此类晚期乳腺癌并观察其疗效,现将结果报告如下:
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骨形态发生蛋白及其在骨科治疗中的应用
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein ,BMP)是一种从DBM中分离提纯的一类具有高效骨诱导活性的疏水性酸性糖蛋白.现已发现BMP-1~16,其中BMP-1~9已经获得了相应的cDNA克隆.Celeste1990年从人体的胎盘和胚脑基因组文库中获取了BMP-7的cDNA[1].BMP-7又被称为成骨蛋白-1(OP-1),属于β转移生长因子(transforming growth factor β,TGF-β)超家族成员,与同家族中BMP-5、BMP-6被归属于同一个亚类.
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大剂量应用尿激酶抢救动脉血栓2例
尿激酶为新鲜人尿分离提纯所得的高纯度酶制剂,系高效的血栓溶解剂,能激活纤维蛋白溶解酶原,使组成血栓的纤维蛋白水解,因而,使得m栓得以溶解,本院采用大剂量尿激酶成功的抢救因脑栓塞动脉血栓患者2例现报告如下.
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抗肿瘤药紫杉醇的不良反应
紫杉醇是从太平洋红豆杉中分离提纯的天然产物,其化学结构是紫杉烷类中一种四环二萜类化合物.紫杉醇的Ⅱ期临床试验于1987~1989年实施,1992年12月美国食品与药品管理局(FDA)批准紫杉醇用于治疗其他抗癌药物无效的晚期卵巢癌,1994年FDA又批准紫杉醇用于治疗晚期乳腺癌.紫杉醇由20世纪90年代中期引进我国,目前,进入我国市场的紫杉醇有美国施贵宝药厂的泰素,法国罗纳普朗克生产的多烯紫杉醇(泰索帝),以及澳大利亚生产的安泰素.我国早在1984年就开始对紫杉醇进行了多学科的研究,用国产红豆杉为原料,成功生产出紫杉醇(商品名紫素).紫素于1995年2月获准进行Ⅱ期临床试验,1995年8月获准新药证书,同年10月开始生产并面市[1,2,3].
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静脉注射白蛋白及免疫球蛋白的临床应用
因为白蛋白(Alb)与免疫球蛋白(γ-Gb)具有多种重要的生理功能,所以长期以来一直被用于多种疾病的治疗,但就其适应症、用法和疗效一直存在争议.在ICU危重病人的治疗中,更是经常面临这样的问题.下面将根据掌握的文献对两者的临床应用总结如下.一、背景资料Alb和γ-Gb是血浆蛋白的重要组成部分,各自具有重要的生理功能.Alb主要由肝脏合成,正常成人日合成量约10g,约占Alb总量的二十分之一.Alb半衰期22~26天,维持着75%~80%的血浆胶体渗透压,参与正常血浆pH的调节,并有重要运输作用,其可与脂肪酸、胆红素、甲状腺素、肾上腺素、二价金属离子(Ca2+、Cu2+等)及药物等多种物质结合,起到运输和调节作用.临床使用的Alb制剂是经低温乙醇工艺分离提纯并灭活病毒的液体制剂,Alb纯度可达96%以上.
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20(S)-9-硝基喜树碱的合成研究
本文采用混合硝化剂合成20(S)-9-硝基喜树碱.以喜树碱为原料,浓硫酸为反应介质,混合硝酸盐为硝化剂进行硝化反应,再经色谱分离提纯制得目标产物9-NC.使9-NC的收率由31%上升到40%左右.研究得到的佳工艺条件:喜树碱0.5 g,浓硫酸30ml;硝酸根0.007mol,硝酸铵和硝酸钙的摩尔比为1∶1;反应温度20℃,反应时间为1天.本方法具有收率高、易分离提纯等优点.
关键词: 20(S)-9-硝基喜树碱 混合硝化剂 分离提纯 -
茶多酚对石英粉尘所致肺泡巨噬细胞DNA损伤的保护作用
我们应用单细胞凝胶电泳技术检测了石英粉尘对肺泡巨噬细胞(AM)DNA的损伤,并探讨茶多酚的保护作用.一、材料与方法1.材料:健康雄性Wistar大鼠,体重200~300 g,由北京大学动物学部提供.石英粉尘由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所提供,粒径<5 μm的占95%,游离SiO2的含量>99%.临用前用生理盐水配成1 mg/ml的混悬液.茶多酚由浙江大学食品科技系提供,由绿茶分离提纯制备,淡黄褐色,含量>98%.
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封闭连续柱层析装置的研制
柱层析是复杂组分分离提纯的非常有效的手段.使用通常的柱层析装置,溶剂挥发扩散、环境污染.本文介绍的封闭连续柱层析装置洗脱液处于基本封闭的循环利用状态,易于实现自动控制.此外,还将洗脱和产品浓缩结晶两道工序结合起来,缩短了生产周期,洗脱液的用量可显著减少.
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人参皂甙在心血管系统药理作用研究进展
人参作为药用已有几千年的历史,近年来国内外学者对人参化学、药理及临床应用都进行了大量的研究,特别是人参化学成分的分离提纯与结构鉴定取得了突破性进展.人参含有多种化学成分,其中人参皂甙为主要成分,药理学研究证实人参皂甙是人参生理活性重要的有效成分,其有着多方面的药理作用.笔者仅就人参皂甙在心血管系统方面的药理作用的研究进展综述如下.
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内皮素在心血管疾病中的作用
内皮素(Eudotheliu,ET)系1987年首先发现并分离提纯为-21氨基酸组成的肽.内皮素由内皮细胞及体内几乎所有组织细胞生成.ET家族包括ET1,ET2及ET3三种同分异构肽[1],是目前已知的体内作用强的血管收缩物质,是机体在缺血缺氧的情况下,体内产生的一种致损伤因子[2],并有正性肌力作用,可刺激生长,致有丝分裂,导致血管及心脏重构,还可以刺激肾素及醛固酮的释放[1],近几年来对ET的研究得以重视,已发现ET参与了许多心血管疾病的机制,本文就ET对心血管疾病方面的作用作简要综述.
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肾上腺髓质素的研究进展
肾上腺髓质素(adrenomedullin-ADM)是一种在体内分布广泛的内源性血管活性肽[1],如肺、肾脏、血管和脑等部位,具有广泛的生物学特性,参与调节机体多种生理和病理活动.1 ADM的形成、来源ADM是日本学者Kiamura等1893年首次从人嗜铬细胞瘤组织中分离提纯的含52个氨基酸的新肽[2],分子内有一个二硫键,分别连接第16位和第21位上的两个半胱氨酸,形成一个环状结构[3,4].实验观察人类肾上腺动脉、静脉血浆中ADM并不明显升高,说明人类肾上腺髓质可能不是ADM的主要来源.研究表明血管内皮细胞和平滑肌细胞是合成分泌ADM的重要场所,且前者多于后者.
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蛋白质定量分析与进展
蛋白质是组成人体重要的成分之一,是生命的物质基础.与营养、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传、生命的起源和进化都有着密不可分的关系.蛋白质对肝脏、肾脏、胶体浸透压、水肿等都起调节作用,人体的神经和生理功能、大脑的兴奋与抑制,都离不开蛋白质的支持.因此,蛋白质的定量分析涉及到生产与科研的各个领域及生命有关的各个行业,是生物学科、食品检验及掺假掺伪[1]、临床检验、诊断疾病[2]、药物分离提纯和质量检验中常用的手段.本文就蛋白质的定量分析及进展作一综述.