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马甲子叶提取物抗肿瘤活性部位的筛选
目的:从药用植物马甲子叶醇提物中分离筛选具有抗肿瘤作用的活性组分.方法:采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取马甲子叶醇提物,并将这三个萃取部位进行体外抗肿瘤实验,再把筛选得到的具有较好抗肿瘤活性的部位进行硅胶柱层析分离,并采用MTT法对分离得到的组分进行体外抗肿瘤活性比较.结果:通过体外抗HepG-2细胞和HeLa细胞实验表明,乙酸乙酯萃取部位具有较好抗肿瘤活性.通过硅胶柱分离,获得5个组分,通过MTT实验发现这5个组分中,石油醚:乙酸乙酯为1∶1和1∶2洗脱所得到的两个组分具有明显的体外抗肿瘤活性,其中石油醚:乙酸乙酯为1∶2的洗脱具有更好的杀伤作用,对HepG-2细胞和HeLa细胞的IC50分别为45.79,13.16μg/mL.结论:从马甲子叶醇提物乙酸乙酯部位中分离得到2种具有抗肿瘤作用的活性组分,为进一步分离抗肿瘤活性成分提供一定的指导作用.
关键词： 马甲子叶提取物 抗肿瘤活性 溶剂法和硅胶柱分离法 MTT 活性组分 -
世界中联中药分析专业委员会第五届学术年会暨换届大会在南京召开
2014年7月18-20日，由世界中医药学会联合会中药分析专业委员会、中药标准化技术国家工程实验室（中科院上海药物所）、天然药物活性组分与药效国家重点实验室（中国药科大学）共同主办，安捷伦科技有限公司、南京圣和药业有限公司共同协办的“世界中联中药分析专业委员会第五届学术年会暨换届大会”在南京成功召开，来自中国大陆、奥地利、德国、美国、荷兰、英国、加拿大、中国香港、中国台湾等国家和地区的300余位专家和代表参加了本次大会。
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蟾皮活性组分的分离与体外抗肿瘤活性考察
目的:分离蟾皮活性组分并考察大孔树脂不同洗脱部位对肺癌细胞A549生长的抑制作用.方法:采用静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,单因素试验优选蟾皮活性组分的大孔树脂纯化工艺.建立乙醇洗脱液中总生物碱和4种蟾毒二烯内酯类成分的含量测定方法,通过MTT试验测定不同洗脱部位对肺癌细胞A549的抑制率.结果:AB-8型大孔树脂对蟾皮总生物碱和4种二烯内酯类成分均具有较好的吸附分离性能,4个不同乙醇洗脱部位对肺癌细胞A549均表现出抑制作用,30％乙醇和70％乙醇洗脱液的细胞抑制率较高,IC50分别为1.83,2.23 mg·L-1.结论:大孔树脂可用于分离纯化蟾皮中活性组分,不同洗脱部位对肺癌细胞A549的抑制率呈现一定的浓度依赖性,30％乙醇和70％乙醇洗脱部位可作为蟾皮抗肿瘤制剂的重点有效组分.
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蛇床子催眠活性组分对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响
目的:评价蛇床子催眠活性组分(CHC)对睡眠剥夺大鼠催眠和促进学习记忆效应.方法:采用对氯苯丙氨酸(PCPA)联合小平台水环境法建立大鼠睡眠剥夺模型,同时给予CHC高、中、低剂量(160、80、40mg/kg) 6d,并设地西泮阳性组(3mg/kg),观察CHC对戊巴比妥钠协同催眠剂量的入睡潜伏期、睡眠持续时间,Morris水迷宫法评价大鼠空间认知和记忆能力.结果:入睡潜伏期CHC高、中剂量组显著低于模型组(P＜0.001);睡眠持续时间CHC高、中剂量组及地西泮阳性组显著高于模型组(P＜0.00l,P＜0.01).定位航行逃避潜伏期CHC高剂量组显著低于模型组(P＜0.05);搜索策略模型组多为边缘式、CHC中剂量组及空白组多为直线式或趋向式,与模型组比较有显著差别(P＜0.05).空间探索测试中目标时间CHC中剂量组显著高于模型组(P.＜0.01),穿越时间CHC高、中剂量组显著低于模型组(P＜0.05),穿越次数CHC高剂量组显著高于模型组(P＜0.05);探索策略模型组多为边缘式,CHC高、中剂量组及空白组多为趋向式,与模型组比较有显著差异(P＜0.01,P＜0.05).结论:CHC对PCPA小平台水环境睡眠剥夺大鼠具有显著催眠作用,且明显促进其空间认知和空间参考记忆.
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现代生物技术在中药活性组分筛选中的应用
中药活性组分的确定是中医药现代化这个系统工程中一个十分重要的内容,阐明中药的活性组分,有利于科学地解释中药的作用机理,制定科学的中药生产加工质量控制标准,也有利于实现中药现代剂型的研制及中药的二次开发.传统的中药活性组分筛选的程序是对有效复方或单味药进行化学分离,制备出活性部位或单体,然后利用实验动物进行在体药理活性验证,消耗样品量大、使用大量的实验动物,劳动强度高、耗时耗力,并且一次试验筛选样品量有限,不适合成分复杂的中药活性组分的筛选.高通量药物筛选技术是以细胞水平、分子水平药物筛选模型为主的,结合组合化学、自动化技术建立的大规模筛选药物的方法,该技术的基本思路是直接观察药物与药物靶标的相互作用,使用样品量少,实验周期短,是更为适合成分复杂的中药活性组分筛选的新型技术.
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中医方药作用特点及现代药效评价标准的缺陷
目前国际生物医学界对中医药提出频繁的要求是:证据(Evidence)[1～5].寻找证据面临两大主要问题:一是中药作用的物质基础;二是疗效的标准及判定.目前普遍关心和重视的是前者,姑且不论能否搞清中药药效物质,然而是否搞清了物质基础就等于阐明了中药复方,事实上问题远非如此简单.无论是中药复方、单味药或活性组分和单体,在鉴定其有无药理活性时其活性如何定位?新药研究药效学的国家标准基本模拟相应西药药理学;国际或国内分离提纯植物药单味药或复方的成分后,对其活性鉴定时也大多以此为标准或想当然将中药功效与现代药理划等号.
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双歧杆菌黏附素的提纯及鉴定
目的:双歧杆菌已广泛应用于益生菌及发酵乳的研制.由于双歧杆菌黏附于肠黏膜表面是其发挥作用的首要条件,开展对其黏附机制的研究有着重要意义.但目前有关双歧杆菌与肠黏膜上皮细胞的黏附机制所知不多,我们从青春型双歧杆菌中分离及纯化其黏附素.方法:黏附试验为检测青春型双歧杆菌与人肠上皮细胞系Lovo细胞间的黏附.收集双歧杆菌培养上清并用300 g/L硫酸铵沉淀,在4℃下8000r/min离心30min收集沉淀物.沉淀物溶解于0.01 mol/L pH7.4 PBS,加入至0.02 mol/LpH7.0 PBS平衡的Superdex 75柱中进行洗脱,速度为0.7mL/min,226 nm波长检测光密度ABS值.收集合并活性组分,冷冻干燥.干燥物溶解后加入至0.05 mol/L pH8.0PB平衡的Q-Sepharose FF柱中,先用同一缓冲液洗脱,然后分别用含0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L及1.0mol/L氯化钠的0.05 mol/L,PB进行阶段洗脱,速度为1.5 mL/min,检测各峰黏附活性,活性组分用SDS-PAGE进行分析.结果:使用硫酸铵沉淀对双歧杆菌黏附素进行了分离,沉淀物进一步经Superdex 75凝胶过滤和Q-SepharoseFF离子交换色谱纯化.结果黏附素不能结合与Q-Sepharose柱,经SDS-PAGE分析,证实纯化的黏附素成分基本单一,其M约为16ku.结论:双歧杆菌黏附素可能为一种M 16 ku的蛋白质,并且存在于培养液上清中.
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蒜氨酸及其相关活性组分的研究进展
大蒜中的多种活性物质具有很多重要生理功能,本文对大蒜中稳定的活性前体物质蒜氨酸在生物体内的转化途径、与真正发挥药效活性的物质硫代亚磺酸酯(如蒜辣素)的关系、活性物质因不稳定而产生物质的系列变化以及相关的物质代谢产物进行了总结.
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垂盆草中保肝降酶活性组分的筛选
景天科植物垂盆草(Sedum sarmentosum Bunge)是<中国药典>收载的常用中药之一,味甘、淡,性凉,具有清热解毒、利尿消肿之效,主治急、慢性肝炎.化学研究表明,垂盆草主要含有糖类、黄酮类、三帖类及垂盆草苷类[1].为了配合垂盆草药材活性组分的筛选,在垂盆草不同提取部位保肝降酶试验的基础上,对其有效部位——水溶性部分和脂溶性部分进行了化学成分的进一步分离,取从上述二部分分得的水溶性总苷和总黄酮进行了保肝降酶试验.现将方法和结果报道如下.
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全蝎胃蛋白酶酶解混合多肽体外抗凝活性研究及其组成分析
目的 采用凝胶过滤层析法分离全蝎酶解液的抗凝活性部位,并检测活性部分的分子量分布范围.方法 采用紫外检测法、考马斯亮蓝法检测,合并凝胶层析蛋白流分;以APTT凝血时间为指标,检验各组分体外抗凝活性;通过MALDI-TOF-MASS法检测分离部分的分子量分布范围.结果 全蝎酶解液通过凝胶过滤层析分得的2组分抗凝效果显著,分子量分布范围850～5 300.结论 体外抗凝试验表明:凝胶过滤层析法纯化分离全蝎胃蛋白酶酶解液方法 可行,MALDI-TOF-MASS表明活性组分为小分子肽类.
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Box-Behnken设计-响应面法优化地龙活性组分的冻干工艺
目的 优选地龙活性组分的冻干工艺.方法 采用单因素试验结合Box-Behnken响应面法,以冻干率为指标,考察1次升华温度、升华时间、解析干燥温度、解析干燥时间等因素对冻干工艺的影响,优化地龙活性组分的冻干工艺,采用HPLC法,测定优化后工艺样品的指纹图谱,并比较其与地龙药材指纹图谱相似度,确定佳冻干工艺.结果 确定地龙活性组分的佳冻干工艺条件:预冻温度-26.5℃,预冻4h,升华干燥温度-20℃、升华时间7h、解析干燥温度30℃、解析干燥时间3.5h,冻干率为96.55％,与对照药材的氨基酸指纹图谱相似度均大于0.9.结论 Box-Behnken响应面法用于地龙活性组分冻干工艺条件的优选是可行的,模型预测效果较好,优化工艺具备可行性.
关键词： 地龙 活性组分 指纹图谱 冷冻干燥 Box-Behnken响应面法 -
中药组分配伍理论与IGD 13C-NMR偶联指纹图谱
中药组分配伍理论经过近20年的研究,己越来越完善,越来越成熟.组学、配伍、指纹是中药组分配伍理论的3个关键词,即中药组分配伍理论将现代“组学”理念与传统“配伍”理念通过“指纹”图谱紧密地结合起来.中药现代化已经发展到了在中药组分配伍理论指导下,采用指纹图谱特别是反门控去偶(inverse gated decoupling,IGD) 13C-NMR偶联指纹图谱方法,研究现代中药的阶段.
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禽胰多肽对体外培养肝细胞分泌功能的影响
禽胰多肽(avian pancreatic polypeptide,APP)是由禽类胰腺合成并分泌的含36个氨基酸残基的直链多肽.研究表明,APP可促进动物采食,刺激胃肠道运动及其腺体的分泌.本实验室采用磷酸钙沉淀法从鸡的胰腺中分离出含APP活性组分的APP粗品,用该粗品添加于鸡饲料中发现,可提高鸡采食量,提高鸡腿肌重及单位肌组织中DNA及RNA的含量,促进鸡生长.
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浙贝母抑制耐药肿瘤P糖蛋白的活性组分研究
目的：阐明浙贝母抑制耐药肿瘤细胞P-糖蛋白（P-gp）的活性组分。方法：利用回流提取法通过树脂纯化技术，制备浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖。建立HepG2/mdr细胞株。利用Calcein-AM试剂盒HepG2/mdr细胞摄取实验对浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖进行P-gp潜在抑制剂的筛选。结果：制备的浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖含量为51.45%、47.84%、23.78%。HepG2/mdr细胞株P-gp的相对蛋白表达为(26.22±1.09)，极显著高于亲本HepG2细胞株(8.91±2.00)（P＜0.01）。阳性对照组Calcein荧光比率为(173.96±12.87)%，极显著高于空白组(100.00±11.49)%（P＜0.01）。浙贝母总生物碱、总核苷低剂量组Calcein荧光比率为(134.96±11.91)%、(126.89±10.42)%，显著高于空白组(100.00±11.49)%（P＜0.05）。浙贝母总生物碱、总核苷高剂量组Calcein荧光比率为(209.72±9.44)%、(162.42±7.83)%，极显著高于空白组(100.00±11.49)%（P＜0.01）。浙贝母总多糖低、高剂量组与空白组无显著差异。结论：HepG2/mdr细胞株表现出耐药性，阳性抑制剂抑制P-gp的外排活性；浙贝母总生物碱、总核苷抑制P-gp的外排活性，呈现浓度依赖性。
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中药提取物对脑缺血药理学研究进展
近年来,钙超载、毒性氧自由基和兴奋毒等学说的出现,为脑缺血的病理生理学机制奠定了基础,一些治疗脑缺血的药物如钙通道阻滞药、自由基清除剂和兴奋性氨基酸(EAA)拮抗剂也应运而生,但迄今尚无较理想的治疗药物.近年来,我国学者在传统治疗脑缺血方药的基础上,对组方中的各种单味中药材的抗脑缺血活性组分进行分离,并对其在抗脑缺血中的作用机制进行了大量的研究,取得了可喜的成果.本文对近年来部分生物碱类、黄酮类、皂甙类中药提取物对脑缺血作用机制的研究进展进行回顾和总结.
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美洲大蠊活性组分对矽尘致大鼠肺纤维化的影响
[目的]探讨美洲大蠊抗肺纤维化活性组分(ML-HB)对矽肺大鼠纤维化的影响.[方法]成年雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、ML-HB高、中、低剂量组,每组32只.除正常组外,其余各组采用气管暴露法注入SiO2混悬液复制矽肺模型,模型复制后第3天,经腹腔给药干预,ML-HB高、中、低剂量组以120、60、30mg/(kg·d)给药,模型组给予等剂量生理盐水,正常组无特殊处理.给药后第30、45、60、75天分别处死8只大鼠,并观察大鼠肺组织外观,采用免疫组织化法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)的表达,ELISA法检测肺匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的质量体积浓度.[结果]模型组大鼠肺组织体积明显增大,颜色暗红且不均匀,表面被灰白色斑状结节覆盖,触之有沙粒感,无弹性,表明矽肺模型复制成功.与正常组比,各时间点模型组α-SMA、COL-Ⅰ阳性表达增强,TNF-α和TGF-β1质量体积浓度升高(P＜0.05).与模型组相比,ML-HB各剂量组α-SMA、COL-Ⅰ表达有所降低,中剂量组改善明显;ML-HB中剂量组TNF-α、TGF-β1质量体积浓度均降低(P＜0.05).[结论] ML-HB可降低SiO2染毒后肺组织中α-SMA、COL-Ⅰ、TNF-α和TGF-β1的表达,延缓肺组织炎性病变、干预胶原蛋白的沉积,从而抑制肺纤维化的进一步发展.
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防己茯苓汤抗炎组分筛选及其机制分析
目的 研究防己茯苓汤(防己、黄芪、桂枝、茯苓、甘草)的抗炎活性组分及其作用机理.方法 利用水煎、乙醇提取和有机溶剂萃取方法获得水/醇提取物和组分,利用脂多糖和IFN-γ刺激造成鼠巨噬细胞炎症模型,采用Griess法考察细胞中一氧化氮产量,FRAP法考察总抗氧化能力；Western Blot法考察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)蛋白的表达.结果 和其它组分相比,乙醇-乙酸乙酯提取组分(EAFD)抑制亚硝酸盐的活性强,其IC50低,且对静息巨噬细胞的活力无影响.该组分能抑制iNOS (P ＜0.0l)和COX-2(P＜0.05)的蛋白表达,同时提高总抗氧化能力(P＜0.01).结论 实验结果提示乙醇-乙酸乙酯提取组分是防己茯苓汤主要的抗炎活性组分,部分通过抑制炎症中关键诱导型合酶的蛋白表达,提高总抗氧化能力而发挥抗炎作用.
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水蛭化学成分及药理作用的研究进展
水蛭是一类高度特化的环节动物,通常生活在淡水域中.因其唾液腺中含有丰富的活性物质及嗜血的生活习性,被广泛应用于药物的成分或疾病的治疗中.文章结合实验室的水蛭素研究成果,综述了水蛭的分布分类,活性组分,药用价值及临床应用,表明了水蛭在传统中医药和现代医药学方面具有十分广阔的应用前景,也为其今后的深入探究提供了可靠的科学依据.
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中药活性组分靶向制剂的研究进展
靶向制剂(target-oriented drug systems,TODDS)亦称靶向给药系统,是指借助载体、配体或抗体将药物通过局部给药或全身血液循环而选择性地浓集于靶组织、靶器官、靶细胞或细胞内结构即靶区,而对非靶区没有或几乎没有作用的制剂.早期的靶向制剂主要是针对癌症的治疗药物,随着研究的深入,靶向制剂已被引申到"运载"多种药品.
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中药活性组分缓控释制剂的研究进展
中药缓控释制剂是继中药传统制剂之后,被称为中药药物制剂发展的第二、三代.缓释制剂系指用药后能内持续释放药物以达到长效作用的目的,其中药物的释放主要是一级速度过程;控释制剂系指药物在预定时间内以预定速度释放,使血药浓度长时间恒定在有效浓度范围内,狭义控释制剂系指药物在预定时间内以零级或接近零级速度释放的制剂.
