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双歧杆菌黏附素的提纯及鉴定
目的:双歧杆菌已广泛应用于益生菌及发酵乳的研制.由于双歧杆菌黏附于肠黏膜表面是其发挥作用的首要条件,开展对其黏附机制的研究有着重要意义.但目前有关双歧杆菌与肠黏膜上皮细胞的黏附机制所知不多,我们从青春型双歧杆菌中分离及纯化其黏附素.方法:黏附试验为检测青春型双歧杆菌与人肠上皮细胞系Lovo细胞间的黏附.收集双歧杆菌培养上清并用300 g/L硫酸铵沉淀,在4℃下8000r/min离心30min收集沉淀物.沉淀物溶解于0.01 mol/L pH7.4 PBS,加入至0.02 mol/LpH7.0 PBS平衡的Superdex 75柱中进行洗脱,速度为0.7mL/min,226 nm波长检测光密度ABS值.收集合并活性组分,冷冻干燥.干燥物溶解后加入至0.05 mol/L pH8.0PB平衡的Q-Sepharose FF柱中,先用同一缓冲液洗脱,然后分别用含0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L及1.0mol/L氯化钠的0.05 mol/L,PB进行阶段洗脱,速度为1.5 mL/min,检测各峰黏附活性,活性组分用SDS-PAGE进行分析.结果:使用硫酸铵沉淀对双歧杆菌黏附素进行了分离,沉淀物进一步经Superdex 75凝胶过滤和Q-SepharoseFF离子交换色谱纯化.结果黏附素不能结合与Q-Sepharose柱,经SDS-PAGE分析,证实纯化的黏附素成分基本单一,其M约为16ku.结论:双歧杆菌黏附素可能为一种M 16 ku的蛋白质,并且存在于培养液上清中.
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GPC法测定仙人掌多糖相对分子质量以及HPLC-ELSD法测定其单糖组成
多糖类的活性与其相对分子质量大小、聚合度、分支度以及溶液中高级构象等都有关,多糖相对分子质量太大或太小均会引起活性的下降.因此,多糖的结构是其生物活性的基础,多糖的一级结构和高级结构与其生物活性间的构效关系是当前糖化学和糖生物学共同关注的焦点问题.多糖结构研究的主要内容有相对分子质量测定、多糖的单糖组成、糖苷键构型、聚合度、分支度等基本结构以及多糖的溶液构象等[1].本研究用热水提取的仙人掌粗多糖,提取液经Savag法脱蛋白后,采用Sephacryl S-400柱色谱纯化,得到仙人掌多糖(OP),经过高效凝胶渗透色谱和常压凝胶柱色谱分析表明,OP为均一多糖.
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肺表面活性物质制备方法改进的研究
目的 筛选从矽肺患者双肺大容量灌洗回收液(wLLF)中提取人源性肺表面活性物质(HPS)的条件.方法 以提取HPS纯品的获得量为指标,采用正交实验设计分析佳提取条件组合,凝胶色谱纯化HPs.HPS纯品组分测定采用总磷脂含量测定(孔雀绿直接显色法),磷脂组分分析采用高效液相色谱法(HPLC).结果 提取佳的条件组合:初离心3000×g,15 min;3 kD孔径透析袋浓缩;再离心10 000×g,15 min;正丁醇萃取.纯化HPS色谱条件,层析柱:Sephadex LH-20凝胶层析柱(1.5 cm×40cm).流动相:氯仿一甲醇(1:l/v:v),流速:1.0 ml/min;收集220 nm滤片以PC为主峰液体.得到HPS纯品12 646.76 mg.其中磷脂占95.74%.磷脂酰胆碱Pc占80.43%.结论 HPS中磷脂酰胆碱含量高且磷脂成分齐全.该提纯方法值得推广.
关键词: 人肺表面活性物质 双肺大容量灌洗回收液 提取 色谱纯化 -
血管内皮生长因子的研究进展及其在缺血性脑血管病的应用前景
血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),也称血管渗透因子(vascular permeability factor,VPF),是在1989年由Ferraral等牛垂体泡星状细胞培养液中利用硫酸铵析出、肝素琼脂糖亲和层析法及两次反相高压液相色谱纯化得到的一种糖蛋白.
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1-(5-硝基吲哚-2-羰基)-4-[3-(1-甲基乙胺基)-2-吡啶基]哌嗪的制备
地拉韦定(delavirdine)是由美国Pharmacia&Upjohn公司研制的非核苷HIV-1逆转录酶抑制剂(NNRTIs),临床与其它抗HIV药联合使用,用于治疗获得性免疫缺陷综合征[1].1-(5-硝基吲哚-2-羰基)-4-[3-(1-甲基乙胺基)-2-吡啶基]哌嗪(1)是其重要中间体.文献[2-4]以5-硝基吲哚-2-羧酸(2)和1-[3-(1-甲基乙胺基)-2-吡啶基]哌嗪(3)为原料,在1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)作用下缩合制得.EDC价昂,后处理用氯仿作提取溶剂,且需通过柱色谱纯化,不适于规模化生产.
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钠通道的分离纯化及其结合活性的研究
目的 对大鼠脑和骨骼肌纤维膜进行钠离子通道分离和纯化,并将其应用于芋螺毒素的研究.方法 3种色谱分离纯化钠通道粗组分,配体结合实验研究钠通道活性及其与桶型芋螺毒素的相互作用.结果 经过纯化,大鼠脑钠通道纯化倍数达370倍,平均特异活性位点数达1.3 nmol·g-1.大鼠骨骼肌钠通道被纯化2 436倍,平均特异活性位点数达268 nmol·g-1;用纯化的钠通道与桶型芋螺毒素进行竞争结合,发现V8成分与钠通道作用强.结论 纯化出了较高纯度的大鼠脑钠通道和大鼠骨骼肌钠通道;桶型芋螺毒素中的V8成分与钠通道作用强烈,与传统型μ-芋螺毒素非常相似.