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首乌藤多糖的分离纯化及初步结构解析
目的:精制首乌藤中多糖并对其化学结构进行初步解析.方法:经脱脂、水提、分级醇沉、脱色、透析等工艺制备首乌藤粗多糖,通过纤维树脂柱和凝胶柱进行分离和纯化.采用化学分析方法对得到的多糖进行理化性质分析,并通过高效凝胶渗透色谱(HPGPC),气相色谱(GC),紫外光谱(UV)及红外光谱(IR)等对样品进行纯度鉴定、相对分子质量测定、单糖组成及结构分析.结果:分离纯化得到6种均一多糖(SWTPA-1,SWTPB-1,SWTPB-2,SWTPB-3,SWTPC-1,SWTPC-2),相对分子质量分别为9 162,56 314,44 502,37 278,40 558,61 000.均不含大分子蛋白质、多肽、核酸、淀粉类物质、酚类化合物,均含有糖类物质的IR特征吸收峰.SWTPA-1,SWTPC-1和SWTPC-2为中性多糖,SWTPB-1,SWTPB-2和SWTPB-3可能为酸性多糖,SWTPA-1,SWTPB-1,SWTPB-3,SWTPC-1和SWTPC-2为吡喃糖且含有β型糖苷键,SWTPB-2为吡喃糖且含有β型和α型2种糖苷键,SWTPB-2,SWTPB-3,SWTPC-1和SWTPC-2还含有呋喃糖环.结论:首次从首乌藤中分离纯化出了6种均一多糖,聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶S-300可用于多糖的分离与纯化,糖醇乙酸酯衍生化法可较好地实现首乌藤多糖水解产物的衍生化.
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灰树花倍他葡聚糖工作对照品的相对分子质量测定方法研究
目的 测定灰树花倍他葡聚糖工作对照品的相对及绝对分子质量,并对两种分析方法进行比较.方法 色谱柱为TSK-G4000PW,流动相为0.7%硫酸钠(含0.02%叠氮化钠)或0.2%叠氮化钠溶液,流速为0.5 mL·min-1,柱温为35℃,高效凝胶渗透色谱(SEC)法用示差折光检测器,高效凝胶渗透色谱和激光光散射联用(SEC-MALL)法用DNDC仪和激光光散射仪联用.结果 采用0.7%硫酸钠为流动相,SEC法(P系列标样)和SEC-MALL法测得的相对分子质量分别为38893和37700,采用0.2%叠氮化钠为流动相,SEC法(P系列标样)和SEC-MALL法测得的相对分子质量分别为169292和37900.结论 SEC法受更多因素的影响,需注意标样和流动相等的选择,SEC-MALL法准确、可靠.
关键词： 灰树花 倍他葡聚糖 高效凝胶渗透色谱 高效凝胶渗透色谱和激光光散射联用 -
清开灵注射液中大分子物质相对分子质量高效凝胶渗透色谱研究
目的 清开灵注射液中大分子物质的测定研究.方法 采用高效凝胶渗透色谱法,测定了16批清开灵注射液样品.色谱柱为TSK-Gel GPWXL4000(7.8mm×300 mm)；流动相为10 mmol·L-1醋酸铵溶液；柱温为40℃,流速为0.6 mL·min-1,蒸发光散射检测器(氮气流速3.2L·min-1；漂移管温度115℃).结果 5家公司清开灵注射液M≥10 000平均分子累计峰面积比为0.107％,0.127％,0.727％,0.283％和0.553％.结论 该方法可用于清开灵注射液中大分子物质相对分子质量及其分布的测定；测定结果可为清开灵注射液质量标准提高提供依据.
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GPC法测定仙人掌多糖相对分子质量以及HPLC-ELSD法测定其单糖组成
多糖类的活性与其相对分子质量大小、聚合度、分支度以及溶液中高级构象等都有关,多糖相对分子质量太大或太小均会引起活性的下降.因此,多糖的结构是其生物活性的基础,多糖的一级结构和高级结构与其生物活性间的构效关系是当前糖化学和糖生物学共同关注的焦点问题.多糖结构研究的主要内容有相对分子质量测定、多糖的单糖组成、糖苷键构型、聚合度、分支度等基本结构以及多糖的溶液构象等[1].本研究用热水提取的仙人掌粗多糖,提取液经Savag法脱蛋白后,采用Sephacryl S-400柱色谱纯化,得到仙人掌多糖(OP),经过高效凝胶渗透色谱和常压凝胶柱色谱分析表明,OP为均一多糖.
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基于高效凝胶渗透色谱法的银耳多糖质量控制研究
目的:建立银耳多糖质量控制方法.方法:采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测定银耳多糖相对分子质量及其分布和多糖的量.色谱条件:ShodexSugarKS-804(300mm×8mm,7μm)和KS-805(300mm×8mm,17μm)凝胶排斥色谱柱串联做为分离柱,流动相为水,体积流量0.8mL/min,柱温40℃,进样量40μ,检测条件为示差检测器.结果:银耳多糖峰出现在14.40～15.30min,对应相对分子质量为1.26×106～1.39×106.在0.01～2.0mg/mL呈良好的线性关系(r=0.999).银耳多糖质量浓度范围分别为:1.1～1.5mg/mL(以透析银耳多糖为对照)和0.8～1.1mg/mL(以蓝色葡聚糖为对照).多糖检测限和定量限分别为0.8μg和2μg.结论:所建立的方法简单、快速、准确、重现性好、灵敏度较高,可作为银耳多糖质量控制的方法.
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高效凝胶渗透色谱法测定枸杞多糖的相对分子质量
近年来,多糖由于其具有免疫、抗肿瘤、抗病毒等多方面的生物活性与功能,已越来越受到广大的科研工作者的重视.由于多糖的药效是与其结构、纯度和相对分子质量密切相关的[1],故准确而快速地测定多糖相对分子质量及其分布是一项重要工作.高效凝胶渗透色谱(HPGPC)由于其迅速、正确和重现性好等优点,被越来越广泛地应用于测定大分子的相对分子质量及其分布.
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玉郎伞多糖化学成分的研究
目的:从玉郎伞中分离出玉郎伞多糖,并对其化学组成进行研究.方法:玉郎伞经醇提后的药渣用热水提取,乙醇沉淀,Sevag试剂脱蛋白,采用DEAE纤维素(DEAE-52)柱层析分离纯化,气相色谱和薄层色谱分析其组成.结果:分离得到的玉郎伞多糖经Sephadex-75凝胶柱层析,硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)证实为单一多糖,紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰,薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成.结论:玉郎伞多糖首次从玉郎伞中提取获得,为玉郎伞主要成分之一.
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透明质酸酶催化透明质酸水解的适反应条件
目的 确定透明质酸酶(HAase)催化透明质酸(HA)水解的适条件.方法 HAase不同条件下催化HA水解,反应结束后利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测量反应产物的相对分子质量及其分布系数.结果 HAase催化HA水解受温度、pH值、酶浓度、底物浓度、反应时间等因素的影响.结论 HAase催化HA水解的适反应条件是底物浓度为10 g/L,酶浓度为150 000 U/L,pH为5.0,反应温度为50℃.
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高效凝胶渗透色谱法测定硫酸软骨素的分子量及其分布
目的用高效凝胶渗透色谱法对硫酸软骨素的相对分子量及其分布进行测定.方法色谱柱为TSK 4 000 PW(7.8 mm×300 mm),以已知相对分子量的葡聚糖为标样,0.2 mol / L硫酸钠溶液(用稀硫酸调pH5.0)为流动相,柱温35℃,示差折光检测器.结果测得硫酸软骨素的重均分子量(Mw)为37 000～48 000 D,分布宽度(Mw / Mn)为1.34～1.45.结论该法操作简便,快速,可用于硫酸软骨素的分子量及其分布的质量控制.
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短葶山麦冬多糖质量控制方法研究
目的 建立短葶山麦冬多糖质量控制方法.方法 采用高效凝胶渗透色谱(HP-GPC)法测定短葶山麦冬多糖相对分子质量及其分布和样品中多糖含量.色谱条件:Ultrahydrogel 250(300mm×7.8mm,5μm)凝胶色谱柱,流动相为水,流速0.5mL·min-1,柱温35℃,进样量20μL,检测器为示差检测器.结果 短葶山麦冬多糖的主峰出现在16.23~18.75min,重均分子量约为1831~1910Da,分子量分布系数1.31~1.35;在0.01~2.0mg·mL-1呈良好的线性关系(r=0.9991);短葶山麦冬多糖的含量约为80%(以葡聚糖标准品(Fluka)为对照).多糖检测限和定量限分别为0.1μg和0.2μg.结论 所建立的方法简单、快速、准确、重现性好、灵敏度较高,可作为短葶山麦冬多糖质量控制的方法.
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不同方法对寡聚甘露糖醛酸铬配合物分子量测定的影响
目的 探讨不同方法对于测定具有抗2型糖尿病活性的海洋寡聚甘露糖醛酸铬配合物(HS203)分子量测定的影响.方法 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),高效凝胶渗透色谱(HPGPC)及高效凝胶渗透色谱与多角度激光光散射器联用(HPGPC-MALLS)法分别测定HS203的分子量,并考察了不同色谱柱以及不同分子量对照品的选择对于HS203分子量测定结果的影响.结果 PAGE法表明HS203的聚合度为5～20之间,通过计算得出HS203的重均分子量范围在2 400～2 600Da.在HPGPC分析过程中,不同色谱柱对于HS203分子量测定结果影响不大,采用右旋糖酐作为对照品测得分子量为6 000～7 100Da,明显大于PAGE结果,采用结构相似的自制对照品测定结果为2 900～3 100 Da,与PAGE结果较为接近.采用HPGPC-MALLS法测定结果约为3 000 Da,也与PAGE法所测结果相近.结论 不同测定方法测得的HS203分子量结果不同.PAGE法能直观地观察到HS203聚合度的分布情况,并能真实反映分子量大小.HPGPC法应用普遍,操作方面,但对照品的选择对HPGPC法测定分子量十分重要,必须选用与待测样品结构相似的对照品.HPGPC-MALLS法测定糖类化合物分子量无需对照品且结果可靠,但该法需要专用且昂贵的仪器.
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红花注射液大分子物质定量检测研究
目的：建立红花注射液中大分子物质的含量测定方法。方法采用高效凝胶渗透色谱法，以右旋糖酐D4为对照品，建立了红花注射液中大分子物质的检测方法，并对3批红花注射液样品进行检测。色谱柱为TSK-Gel G4000 PWXL凝胶柱（300 mm ×7.8 mm），流动相为10 mmol/L醋酸铵溶液，柱温为40℃，流速为0.6 mL/min，蒸发光散射检测器（氮气流速2.5 L/min，漂移管温度100℃）。结果红花注射液中存在大分子物质，相对分子质量为15517；对其含量测定发现，该品种大分子物质含量较低。结论该方法稳定、操作简单，可用于红花注射液质量标准提高研究。
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国产与进口低分子肝素相对分子质量及其分布比较研究
目的:考察国产低分子肝素的相对分子质量及其分布情况,并与进口低分子肝素比较,为制订该品种国家标准提供依据.方法:高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法,色谱柱:TSK-GEL G3000SW(7.5 mm×30 cm,10μm);柱温:35℃;流动相:2.84%硫酸钠水溶液(pH5.0);检测波长:234 nm;流速:0.5 mL·min-1.结果:测得国内外15个厂家共124批低分子肝素样品的相对分子质量及其分布情况.结论:大部分国内产品能符合BP 2003版对低分子肝素的相对分子质量的要求,但国内产品的相对分子质量分布整体较国外产品宽.
