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现代生物技术在中药活性组分筛选中的应用
中药活性组分的确定是中医药现代化这个系统工程中一个十分重要的内容,阐明中药的活性组分,有利于科学地解释中药的作用机理,制定科学的中药生产加工质量控制标准,也有利于实现中药现代剂型的研制及中药的二次开发.传统的中药活性组分筛选的程序是对有效复方或单味药进行化学分离,制备出活性部位或单体,然后利用实验动物进行在体药理活性验证,消耗样品量大、使用大量的实验动物,劳动强度高、耗时耗力,并且一次试验筛选样品量有限,不适合成分复杂的中药活性组分的筛选.高通量药物筛选技术是以细胞水平、分子水平药物筛选模型为主的,结合组合化学、自动化技术建立的大规模筛选药物的方法,该技术的基本思路是直接观察药物与药物靶标的相互作用,使用样品量少,实验周期短,是更为适合成分复杂的中药活性组分筛选的新型技术.
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太极拳运动对中老年男子性功能的影响
1 资料与方法诊断为性功能障碍患者80例,均为男性,病程1-150个月,平均23.5个月.随机抽样分为两组,一组按医嘱服药和坚持太极拳运动,年龄30-70岁,平均年龄53.6岁,太极拳练习持续60min/d,每周练习4次.另一组按医嘱服药参加健身走锻炼,年龄30-70岁,平均年龄53.2岁,健身走练习持续60min/d,步速100-120步/分钟.实验周期共24个月.
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单管多重聚合酶链反应对缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血的基因分析
α-珠蛋白生成障碍性贫血(a地贫)是热带及亚热带常见的单基因遗传病,超过95%的α地贫位于16p13.3[1]上,α珠蛋白基因缺失是导致α地贫的主要原因,即含有1条或2条α-珠蛋白缺失.传统的缺失型α地贫的常用基因分析方法是Southern blot 分析.这种方法存在操作繁琐、实验周期长及使用放射性核素标记等诸多限制,不利于临床推广应用.随后建立起来的聚合酶链反应(PCR)技术也由于各类型的缺失型α地贫在其反应中,因所需试剂及热循环要求不同,对不同缺失型的α地贫需分别进行检测,不能满足临床筛查的需要.为此,我们参照国外的文献[2],设计了单管多重PCR方法,能在单管内一次性完成这3种单基因或多基因缺失的分析.
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大鼠急性酒精性脂肪肝造模方法的改进
目的:为酒精性脂肪肝的研究提供有价值的模型.方法:采用高浓度酒每日灌胃,同时改进饲料配方,增加食物中脂肪含量、增加铁剂的方法.结果:造模2 wk后可见肝脏轻微脂肪沉积,3 wk后呈中度脂肪肝,4 wk后为重度脂肪肝病变;与对照组相比,肝指数明显增大(模型组4.9±1.1;对照组4.0±0.6,P<0.05),具有统计学意义.结论:本造模方法与人类酒精性脂肪肝病变类似,方法简单易行、实验周期短,结论明确,一般实验室均可进行.
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重组腺相关病毒介导血管紧张素Ⅱ受体1反义基因对高盐饮食诱导的高血压大鼠血压的影响
目的 研究导入血管紧张素Ⅱ受体1反义基因对大鼠高盐饮食诱导的高血压的预防作用.方法 首先采用钙磷转染法进行三质粒共转染,包装重组腺相关病毒,后采用Dot-Blot方法检测病毒滴度.选取8周龄雄性SD大鼠分成3组,分别经尾静脉注射重组腺相关病毒和生理盐水,实验组(rAAV-AT1-Antisense),对照组(rAAV-GFP),正常组(0.9%NaCl);2周后,实验组和对照组给予高盐(8%氯化钠)饲料喂养,正常组继续给予正常饮食喂养,实验周期为12周,实验过程中,前三周每周测量血压一次,三周后,每两周测量血压一次;处死动物后通过半定量RT-PCR检测血管紧张素Ⅱ受体1在主动脉组织的表达情况.结果 高盐饮食1周后,对照组大鼠血压开始升高,到第5周时血压达到140 mm Hg,并维持到实验结束,实验结束时达到(142.7±4.5 mmHg);实验组大鼠和正常组大鼠的血压一样在整个实验过程中一直稳定在正常范围,实验结束时维持在(117±3.8)mmHg,(117.8±2.9)mmHg.整个实验过程三组动物并未出现因为病毒载体注入和表达所引起的严重毒副作用.结论 血管紧张素Ⅱ受体1反义基因可以预防高盐诱导的高血压,为临床应用反义AT1基因治疗高血压提供了可能.
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条件性位置实验方法及非倾向性实验设计在药物依赖研究中的应用
在过去的二十余年,条件性位置研究(place-conditioning studies)被广泛用于研究阿片类成瘾药物的犒赏与厌恶效应[1].目前常用于药物成瘾的条件性位置研究包括条件性位置偏爱(conditionedplace preference,CPP)和条件性位置厌恶(conditionedplace aversion,CPA).与同时作为精神依赖性实验模型的自身给药(self administration,SA)、药物辨别实验等操作式强化模型(operant reinforcementparadigm)相比,条件性位置研究具有独特的优点:设备简单,实验周期短,动物不受操作式运动方式的影响,能测出药物的犒赏或厌恶效应,也不因受试药是否妨碍运动机能而影响实验结果,无药状态的测验能排除药物对测验成绩的干扰等.对成瘾背景下的CPP,CPA的深入研究,特别是实验方法和影响因素的研究,将对我们深入了解成瘾的机制有重要意义.本文就阿片成瘾背景下的条件性位置实验的原理及其装置、实验步骤及其倾向性的新进展作一简介.
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荧光显微镜划痕标记染料示踪技术的改进
划痕标记染料示踪(scrape-loading and dye transfer,SLDT)技术是一种简单快速研究培养细胞间缝隙连接通讯(gapjunction intercellular communication,GJIC)的方法.适用于各种培养细胞,具有方法简单、实验周期短、成本低廉的特点,自问世以来即在研究细胞通讯方面得到了广泛应用[1].
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原位分子杂交中脱片问题浅析
核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段.原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能准确定位组织细胞内的特定基因表达.但分子杂交实验操作步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因为很小的因素而导致实验失败.原位分子杂交实验中,所有的操作均是针对载玻片上的目的组织进行的,因此,实验中的脱片就是常常困扰实验者的一个问题[1~3].在此,笔者根据自己的实际操作经验和资料研究,对脱片问题进行简单分析,以求对实验有所帮助.
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异法同步实验模式的建立与应用
天然药物化学实验包括提取、分离、纯化及鉴定等技术.一种有效成分往往有多种提取分离的方法,但实验周期大多较长,操作繁琐,费时较多.所以,学生在实验室中只能按一种方法进行提取分离.在实验学时有限的情况下,如何更好地实施并满足实验教学大纲的基本要求是亟待解决的问题.因此,有必要对传统的单一实验模式进行改革.异法同步实验是指在同一实验室、同一时间内同步进行两种目的相同、但方法不同的实验项目.如生物碱的提取:从黄连中提取、纯化小檗碱并鉴定.具体实施步骤为:
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有限单元法在脊柱生物力学应用研究进展
自70年代起,有限单元法(finite element method,FEM)开始应用于脊柱生物力学研究[1].由于传统的力学试验研究需有完善的实验设备及较多的人力和物力,一旦实验条件发生变化,实验又将重新开始,增大了研究成本,延长了实验周期.随着计算机的发展,人们可以利用有限元数值模拟生物力学实验近似获得求解,显示了极大的优越性.近年来,FEM在脊柱生物力学应用中已取得迅猛发展.
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维生素C注射液细菌内毒素检查方法研究
<中国药典>1995年版中介绍的维生素C注射液检查方法为热原检查法,此方法受外界条件影响大,且实验周期长,实验费用高;而<美国药典>第23版介绍的细菌内毒素检测法则具有快速灵敏、省时省力等优点.为此,笔者参照1995年版<中国药典>二部细菌内毒素检查法,对以细菌内毒素检查代替热原检查进行了探讨.
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中药痔疮动物模型制备规范(草案)起草说明
1造模动物目前可应用于制备痔疮模型的动物有家兔、大鼠、小鼠、灵长类的帽卷尾猴、猕猴等.灵长类动物价格昂贵,可供研究的动物也少,实验周期长,饲养条件高,使用受到限制.较为常用的是家兔、大鼠、小鼠.一般选用成年动物,雌雄各半.
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MTT比色法在临床抗癌药物敏感性实验中的应用及进展
化疗作为恶性肿瘤的辅助治疗已得到肯定.但由于同一种肿瘤对不同抗癌药的敏感性不同,而且相同组织学类型,甚至相同分化程度的肿瘤发生于不同病人时,他们对同一种化疗药物的反应性也不同.因此选择合适的化疗药物对恶性肿瘤的治疗就显得非常重要,抗癌药物的体外敏感实验是利用细胞培养技术,在体外进行的药物敏感实验.常用的有由Salmon建立的HTCA法[1],Frie天man建立的3H-T天R渗入法,以及Mosmann提出的MTT比色分析法[2],上述方法中,HTCA为可靠,但培养成功率低,实验周期长,3H-TDR有放射危险,而MTT法简便、快速、经济,故被广泛用于临床抗癌药物的选择.