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辽东葱木皂苷体内外抗肿瘤作用的实验研究
目的通过体内外抗肿瘤实验观察辽东葱木皂苷的抗肿瘤作用.方法:在小鼠异体移植性S180肿瘤模型上观察辽东葱木皂苷的抗肿瘤作用,同时用MTT比色法检测辽东葱木皂苷对腺癌A549和喉癌Hep2细胞株的体外细胞毒作用.结果:辽东葱木皂苷对荷S180小鼠肿瘤生长有明显抑制作用,高、中、低剂量组抑瘤率分别是70.31%,47.23%,41.31%;而且能明显抑制体外培养的肿瘤细胞的生长,对两种细胞有明显的细胞毒效应,其IC50分别是0.0155 mg/ml和0.0246mg/ml;结论:辽东葱木皂苷具有一定的体内外抗肿瘤活性.
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仙鹤草鞣质成分的抗肿瘤作用研究
目的:研究仙鹤草提取物中鞣质成分抗肿瘤作用,为临床应用提供基础.方法:用70%丙酮提取过滤浓缩仙鹤草粉末,再对提取液进行正丁醇,乙酸乙酯进行多次萃取,得到溶于乙酸乙酯层的鞣质和溶于正丁醇层的鞣质,并用AB-8型大孔树脂纯化精致得其鞣质成分.然后用精制后的乙酸乙酯层的鞣质成分对HepG2肿瘤细胞和BEL-7402肿瘤细胞进行MTT药理实验来研究仙鹤草鞣质成分的抗肿瘤作用.结果:不同浓度的乙酸乙酯层作用于BEL-7402细胞72 h后,细胞的生长增殖作用被抑制,并随着药物浓度的增大而增强,作用较明显,但在250μg/mL和300μg/mL时抑制率无明显的增加,各剂量组OD值与空白组相比,均具有显著性差异(P<0.05),其IC<,50>为89.277μg/mL.不同浓度的乙酸乙酯层作用于HepG2细胞72 h后,细胞的生长增殖作用被抑制,并随着药物浓度的增大而增强,作用明显,但在250μg/mL和300μg/mL时抑制率无增加不明显,各剂量组OD值与空白性组相比,均具有显著性差异(P<0.05),其IC<,50>为127.85μg/mL.
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相思子毒素P2的体内外抗肿瘤作用研究
目的:研究相思子毒素P2( abrin P2)在小鼠体外和体内的抗肿瘤活性.方法:MTT体外试验法检测abrin P2对体外多种人肿瘤细胞的生长抑制作用；体内抗肿瘤试验观察abrin P2对小鼠肿瘤的抑制作用及对体重,胸腺、脾脏指数的影响.结果:MTT结果显示abrin P2对人鼻咽癌细胞CNE - 2Z、人肺癌细胞A- 549、人口腔上皮细胞KB、人胃癌细胞BGC均有较强的抑制作用.体内灌胃给予不同剂量的abrin P2(0.05mg/kg、0.075mg/kg和0.1mg/kg),共10天,对小鼠肿瘤Lewis、EMT6均有较强的抑制作用,抑制率达61.69％、49.6％,各给药组与空白对照组比较差异均具有统计学意义(P＜0.01),给药后小鼠体重及脏器指数与空白对照组比较稍低,但与阳性给药组比较对小鼠机体及免疫系统的损害小.结论:abrin P2在体内体外均有较强的抗肿瘤作用.
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不同来源一次性使用无菌注射器用活塞体外细胞毒性的比较研究
目的：对不同来源一次性使用无菌注射器用活塞体外细胞毒性进行评价，为科学监管提供技术支持。方法：将一次性使用无菌注射器用活塞浸提液分别与L929细胞接触培养，采用四唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性，计算相对增殖率，并进行细胞毒性评价。结果：不同厂家相同浸提比例，产品之间细胞毒性均存在差异，同一厂家不同浸提比例的条件下，产品细胞毒性未发现明显变化。结论：不同厂家产品配方及生产工艺不尽相同可能是导致不同厂家的产品的细胞毒性存在差异的原因，建议在产品标准中生物性能技术要求中增加细胞毒性评价项。
关键词： 一次性使用无菌注射器用活塞 细胞毒性 MTT -
汉黄芩素对人肺癌A549细胞株增殖活性的影响
目的：本实验通过研究汉黄芩素对人肺癌A549细胞株增殖活性的影响，为其机制的研究及临床应用提供理论依据。方法：实验通过MTT法、生长曲线法、检测不同浓度汉黄芩素、不同作用时间对肺癌细胞增殖活性的影响，通过HE染色实验观察汉黄芩素对A549细胞形态学变化。结果：实验显示汉黄芩素对人肺癌细胞株有较强的抑制作用，当药物浓度达到10μg/mL时，增殖抑制作用明显。随着给药时间延长，细胞存活浓度递减。汉黄芩素能够改变肺癌细胞形态，用药后与对照组比较细胞变圆，体积缩小，核质深染，胞质凝集。结论：汉黄芩素能够抑制人肺癌细胞A549增殖，改变细胞的形态，将对肺癌治疗具有一定的指导意义。
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硫酸镍对体外培养小鼠精原细胞的损伤作用
目的 初步探讨硫酸镍(NiSO4)对小鼠精原细胞的毒作用.方法 采用MTT、分光光度法和透射电子显微镜分别检测NiSO4,浓度为0、25、50、100、200、400和800μmol/L,染毒6、12、24和36 h对体外培养小鼠精原细胞的增殖、乳酸脱氢酶(LDH)活力及其超微结构的影响.结果 NiSO4显著抑制体外培养小鼠精原细胞的增殖,且存在剂量/时间依赖性(r=1,P＜0.01).50 μmol/L NiSO4染毒24和36 h,100、200、400和800 μmol/L NiSO4染毒6、12、24和36 h时,精原细胞悬液LDH活力显著低于对照组(P＜0.05),并呈剂量/时间依赖性(r=-1,P＜0.01).此外,NiSO4还可引起小鼠精原细胞超微结构改变,主要表现为细胞皱缩、胞内出现空泡,细胞膜和核膜破裂,细胞器模糊不清等现象,特别是NiSO4浓度在200μmol/L以上变化更明显.结论 NiSO4对体外培养的小鼠精原细胞具有明显毒作用.
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常用注射用辅料刺激RBL-2H3细胞脱颗粒的作用
目的 研究多种注射用辅料刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,建立和完善注射用辅科引发类过敏反应的筛选评价体系.方法 以不同浓度的注射用辅料羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物40/60( mPEG-PDLLA40/60)、聚乙二醇400(PEG400)、聚乙二醇600 (PEG600)、聚氧乙烯蓖麻油(CrEL)和吐温80处理RBL-2H3细胞,测定β-氨基己糖苷酶释放率,并通过MTT法进一步研究有脱颗粒作用的受试物对RBL-2H3细胞的毒性作用.结果 HP-β-CD、高浓度的mPEG-PDLLA40/60( 40 mg/ml)和吐温80(3.0 mg/ml)均能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒,呈浓度依赖性；PEG400、PEG600和CrEL在本研究的浓度范围内均不能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒.HP-β-CD有明显的细胞毒性,但不呈浓度依赖性；mPEG-PDLLA40/60无细胞毒性；吐温80没有明显的细胞毒性,但呈浓度依赖性.结论 RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放试验方法灵敏、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价注射用辅科类过敏反应的潜在应用价值.高浓度的吐温80直接刺激肥大细胞脱颗粒的作用可能是由其细胞毒性引起的.
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苦马豆素的提取分离及其抗肿瘤活性研究
目的通过小花棘豆中苦马豆素的提取分离,比较苦马豆素对人食道癌Eca-109、胃癌N-28、N-45和SGC-7901等几种肿瘤细胞体外生长的抑制作用,以筛选出对苦马豆素敏感的肿瘤细胞株.
关键词： 苦马豆素 抗肿瘤 MTT 食道癌Eca-109 -
苯并[a]芘对内皮细胞增殖活性的影响及与热应激蛋白70表达关系的研究
为探讨苯并[a]芘(BaP)对猪主动脉内皮细胞增殖活性的影响以及与热应激蛋白70(HSP70)表达的关系.采用离体培养猪主动脉内皮细胞,不同浓度BaP(0、0.5、1、10、20μmol/L)染毒24h,以MTT法分析不同浓度BaP对内皮细胞增殖活性的影响并以Western-blot 法检测内皮细胞HSP70表达的改变.结果发现,BaP染毒24h后,主动脉内皮细胞增殖活性随染毒剂量的增加而逐渐降低;低剂量(0.5μmol/L)染毒组HSP70的表达与对照组相比无明显差异,而中、高剂量(1、10、20μmol/L)抑制HSP70的表达.结果提示BaP抑制主动脉内皮细胞增殖生长活性;一定浓度的BaP能抑制主动脉内皮细胞HSP70的表达.
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四种细胞毒性试验测定柴油机尾气颗粒物提取物急性毒性的比较
目的 比较四种体外细胞毒性试验检测柴油机尾气颗粒物(DEP)提取物急性毒性的能力.方法 用浓度分别为5、10、20、40、80和160μg/ml的DEP提取物作用于16HBE细胞,于12、24及48h后,通过MTT法、中性红法、乳酸脱氢酶(LDH)法及蛋白测定法测细胞存活率.结果 MTT法在检测急性毒性方面与其它三种方法相比,染毒12h时就表现出了很高的敏感性.随着染毒时间的增加,MTT法与中性红法的敏感性逐渐提高,染毒24h后与对照组相比,各剂量组细胞存活率明显降低(P＜0.05).LDH法测定DEP提取物染毒24h后细胞存活率有所降低,但继续增加染毒时间,存活率不再发生变化.蛋白法测定染毒12h和24h的细胞存活率,仅高剂量组显著降低,染毒48h后,各剂量组细胞存活率均显著降低.结论 四种不同的细胞毒性试验测定结果存在差异,MTT法和中性红法比蛋白法和LDH法更为敏感.结合各试验检测的毒性指标可以看出,DEP提取物主要影响16HBE细胞内各细胞器的功能,如线粒体、溶酶体；对于细胞贴壁的影响和细胞膜损伤程度的影响较弱.
关键词： 柴油机尾气颗粒物提取物 MTT 中性红 乳酸脱氢酶 细胞毒性 -
苦碟子注射液的体外细胞毒性研究
目的：探讨苦碟子注射液(KDZ)的安全剂量及体外细胞毒性评价的可行性。方法：采用 MTT 法检测沈阳、通化两个厂家共12批次的KDZ对小鼠成纤维细胞(L929)的细胞毒性级别，并比较各两厂家之间的半数抑制浓度(IC50)差异是否存在统计学意义。结果：12批 KDZ 的给药浓度与 OD 值成显著的负相关，相关系数分别为-0.986和-0.924；12批KDZ原液对L929的细胞毒性级别均为4级，稀释64倍时毒性级别均为1级；两个厂家KDZ的IC50比较差异并无统计学意义(P＞0.05)。结论：当KDZ稀释64倍时对L929细胞基本无毒，采用细胞评价方法对KDZ进行安全性评估是可行的。
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兔BBMSCs体外培养及其与水凝胶复合体的制备
目的 探讨贴壁筛选法分离培养兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的条件,制备了可注射的PLGA-PEG水凝胶并检测其生物相溶性,为组织工程选择合适的基质干细胞奠定基础.方法 采用贴壁筛选法将兔BMSCs自少量骨髓中分离、纯化并培养,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线.制备凝胶,倒置显微镜下观察细胞的生长形态,并MTT法检测其生物相溶性.结果 兔BMSCs性状稳定,生长曲线相似,一周时细胞数目多；传代后3～4 h即可贴壁.水凝胶30℃的成胶时间为10 min,培养7d后水凝胶表面的BMSCs贴壁生长并显示出良好的细胞活性.结论 水凝胶具有良好的细胞相容性,可作为BMSCs生长增殖的良好载体,为组织工程提供支架材料.
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糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的实验研究
目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:10％ FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中.每组8个复孔,加入6％的各组合药血清培养,分别于12、24、48、60h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达.结果:正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形.MTT:24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异(P＜0.01),60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05);24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异(P＜0.05);48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异(P＜0.01);60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异(P＜0.05).Western blotting:正常组与模型组、Y27632组比较RhoA蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异(P＜0.01);糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异(P＜0.05);Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异(P＜0.05);模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论:糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程.
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猫眼草乙酸乙酯部分的抗肿瘤活性研究
目的:分离猫眼草乙酸乙酯部分提取物,对其指标成分进行含量测定,并对其抗肿瘤活性进行体外细胞实验研究,以期为猫眼草的利用与开发提供理论基础,为开发天然的抗肿瘤药提供新的方向和更多的选择.方法:高效液相色谱法测定乙酸乙酯部分槲皮素与没食子酸的含量;溶剂洗脱法对猫眼草乙酸乙酯部分进行分离;MTT法测定不同浓度的猫眼草乙酸乙酯各组份对乳腺癌ZR-75-30细胞生长的抑制作用.结果:猫眼草乙酸乙酯部分含有槲皮素19.99％,没食子酸55.04％.从猫眼草乙酸乙酯部分得到17个流份合并为6个组份.猫眼草乙酸乙酯部分分离的各组分(浓度50 μ,g· ml-1-150 μg· m1-1范围)对乳腺癌细胞ZR-75-30的生长有抑制作用,且呈现一定的梯度关系,随着药物浓度的升高,对乳腺癌细胞的生长抑制率增强.其中组分2的抗肿瘤活性强.结论:猫眼草乙酸乙酯部分提取物含有黄酮和酚酸类成分,各组分对乳腺癌细胞生长均有抑制作用.
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白桦脂醇的体内抗肿瘤作用及机制
目的：研究白桦酯醇的体内抗肿瘤作用及机制。方法：采用小鼠肝癌细胞（H22）建立荷瘤小鼠动物模型，白桦脂醇灌胃10 d后，计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数；MTT法测定小鼠T淋巴细胞转化功能及NK细胞杀伤活性。结果：白桦脂醇三个剂量组、阳性对照组瘤重均减轻，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），中剂量组抑瘤率高；三个剂量组脾指数与阳性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），中、高剂量组与阴性对照组比较差异亦有统计学意义（P＜0.05）；中剂量组胸腺指数与阴性、阳性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；中剂量组T淋巴细胞转化率与阴性对照组和阳性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；低剂量组在效靶比为25∶1时，NK细胞杀伤活性高于阳性对照组（P＜0.05），在效靶比为100∶1，杀伤活性高于阴性对照组（P＜0.05）；中剂量组在效靶比为25∶1、50∶1、100∶1时，NK细胞杀伤活性均同时高于阴性对照组和阳性对照组（P＜0.05）；高剂量组在效靶比为25∶1时，NK细胞杀伤活性高于阴性对照组和阳性对照组（P＜0.05）。结论：白桦脂醇通过刺激激活免疫器官，提高T淋巴细胞转化功能、提高NK细胞杀伤活性来抑制肿瘤细胞增殖。
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滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响
目的:从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制.方法:体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-[4,5-dimethylthylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况.结果:与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖.结论:高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展.
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马甲子叶提取物抗肿瘤活性部位的筛选
目的:从药用植物马甲子叶醇提物中分离筛选具有抗肿瘤作用的活性组分.方法:采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取马甲子叶醇提物,并将这三个萃取部位进行体外抗肿瘤实验,再把筛选得到的具有较好抗肿瘤活性的部位进行硅胶柱层析分离,并采用MTT法对分离得到的组分进行体外抗肿瘤活性比较.结果:通过体外抗HepG-2细胞和HeLa细胞实验表明,乙酸乙酯萃取部位具有较好抗肿瘤活性.通过硅胶柱分离,获得5个组分,通过MTT实验发现这5个组分中,石油醚:乙酸乙酯为1∶1和1∶2洗脱所得到的两个组分具有明显的体外抗肿瘤活性,其中石油醚:乙酸乙酯为1∶2的洗脱具有更好的杀伤作用,对HepG-2细胞和HeLa细胞的IC50分别为45.79,13.16μg/mL.结论:从马甲子叶醇提物乙酸乙酯部位中分离得到2种具有抗肿瘤作用的活性组分,为进一步分离抗肿瘤活性成分提供一定的指导作用.
关键词： 马甲子叶提取物 抗肿瘤活性 溶剂法和硅胶柱分离法 MTT 活性组分 -
苦参碱改构体X对人鼻咽癌CNE1细胞的凋亡诱导作用
目的:探讨苦参碱改构体X体外诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡的作用与机制.方法:用0,29,58,116,232,464μmol·L-1不同剂量改构体X处理对数生长期CNE1细胞48 h,采用MTT法检测苦参碱改构体X对CNE1细胞增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测改构体X对CNE1凋亡率和细胞周期的影响,Western blot法检测改构体X对CNE1细胞内Bcl-2、Bax及p53等凋亡过程中相关蛋白表达的影响.结果:苦参碱改构体X作用CNE1 48 h后,MTT结果显示,改构体X对CNE1细胞增殖有抑制作用并具有浓度依赖性;流式细胞仪分析结果显示,改构体X 58,116 μmol· L-1浓度组细胞凋亡率高出苦参碱组70.02％,75.73％,高于阴性对照组(P＜0.05,P＜0.01);细胞周期测定结果显示改构体X各剂量组均可不同程度地将CNE1细胞周期抑制在G1期,与阴性对照组相比具差异显著性(P＜0.05,P＜0.01);Western blot检测表明,苦参碱改构体X作用CNE1 48 h后,凋亡相关蛋白Bcl-2降低,Bax,p53增加,与阴性对照组相比有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:苦参碱改构体X在体外可诱导CNE1细胞凋亡,其促凋亡机制可能与阻滞细胞周期、增加促凋亡蛋白Bax和p53表达并降低抑制凋亡蛋白Bcl-2表达有关.
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中药复方脑还丹对Aβ诱导的大脑皮质和海马神经元损害的保护作用研究
目的:探讨中药复方脑还丹对A β诱导的大脑皮质和海马神经元损害的作用.方法:采用MTT法及NSE免疫组化方法观察脑还丹药物血清对经A β25-35处理的原代培养的新生大鼠大脑皮质和海马神经元的影响.结果:体外培养的新生大鼠大脑皮质和海马神经元经A β 25-35处理后,活细胞数减少,而脑还丹含药血清能够促进神经元的存活率以及促进神经元的生长发育,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:中药复方脑还丹能够减轻A β对大脑皮质和海马神经元的毒性作用.
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益肺清化颗粒对人脐静脉内皮细胞增殖的影响
目的:研究不同浓度益肺清化颗粒及益肺清化颗粒与吉非替尼联用对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用.方法:以不同浓度益肺清化颗粒含药血清及益肺清化颗粒与吉非替尼联用干扰HUVEC.结果:高剂量益肺清化颗粒对HUVEC的增殖有抑制作用(P＜0.05,P＜0.01);10-80μ mol/L剂量的吉非替尼对HUVEC细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),且呈一定的线性量效关系;30、60μmol/L吉非替尼联合益肺清化颗粒高剂量含药血清对HUVEC增殖具有抑制作用.结论:高剂量益肺清化颗粒对HUVEC增殖具有抑制作用,且与吉非替尼在30或60μmol/L剂量联用下,具有明显的增效作用.
