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蚊传黄病毒的蚊虫细胞受体研究现状
研究日本脑炎病毒、登革病毒和西尼罗病毒这三种蚊传黄病毒在蚊虫细胞上的受体特性及功能,对于终揭示这三种蚊传黄病毒的致病机理,切断蚊传黄病毒传播途径具有重要的意义.本文介绍了这三种蚊传黄病毒相似的受体结合蛋白的结构与膜融合机制,综合论述了在C6/36细胞上受体研究的进展,推测这三种蚊传黄病毒可能在蚊虫细胞上有相同的受体分子.
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中国新疆部分地区蚊传黄病毒感染调查
目的 了解新疆部分地区不明原因发热患者蚊传黄病毒的感染状况.方法 采用ELISA方法对新疆维吾尔自治区南部喀什地区伽师县和麦盖提县、北部伊犁地区察布查尔县不明原因发热人群血清标本进行流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)、西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)IgM抗体检测.对检测结果阳性的血清标本平行进行以上3种病毒的交叉中和试验.结果 新疆南北部地区641例不明原因发热患者急性期血清中,乙脑病毒IgM抗体阳性率0.62%(4/641),登革病毒IgM抗体阳性率2.96%(19/641),西尼罗病毒IgM抗体阳性率1.72%(11/641).ELISA检测阳性患者血清中有6例存在乙脑病毒、登革病毒、西尼罗病毒中和抗体,滴度介于1∶10～1∶40之间.结论 新疆发热患者急性期血清标本可以检测到乙脑病毒、登革病毒、西尼罗病毒IgM抗体,部分病例血清中存在中和抗体.
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卫生部办公厅关于印发埃博拉出血热等6种传染病预防控制指南和临床诊疗方案的通知(三)
西尼罗热预防控制技术指南西尼罗热是由西尼罗病毒(West Nile virub,WNV)感染引起的人畜共患病,主要感染鸟类、人类和马、牛等哺乳动物.
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西尼罗热抗体多片段蛋白芯片试剂盒的研制
[目的] 研制西尼罗病毒(WNV)多片段蛋白芯片IgG抗体检测试剂盒.[方法] 构建基于WNV的E蛋白、M蛋白及prM蛋白检测的蛋白芯片,并对芯片的抗原点样浓度、芯片检测的特异性、芯片检测的灵敏度以及芯片检测的可靠性进行测定.并利用ELISA法对研制芯片的检测结果进行对比验证.[结果] 研制芯片的抗原点样适浓度为E蛋白0.05mg/ml、prM蛋白0.04mg/ml、M蛋白0.2mg/ml;其对M蛋白的检测灵敏度达1.5ng/ml.批内重复检测的CV值≤2%;检测结果的准确性和特异性与ELISA法相比基本一致.[结论] 本研究建立的西尼罗病毒多片段蛋白芯片的检测法具有较高的敏感性、特异性和可靠性,可用于西尼罗病毒IgG抗体的检测.
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哺乳动物细胞西尼罗病毒样颗粒表达、纯化及其鉴定
目的 利用哺乳动物细胞表达含有西尼罗病毒(W NV) prM和E蛋白,形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为西尼罗病毒感染的免疫诊断试剂的研制奠定基础.方法 筛选典型西尼罗病毒株,构建重组质粒,转染293T细胞,表达并纯化西尼罗病毒prM-E蛋白,利用透射电镜、免疫印迹试验、间接免疫荧光实验(IFA)和酶链免疫吸附试验(ELISA)对表达产物进行鉴定.结果 重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒(virus like particles VLPs),转染细胞上清纯化物中透射电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的病毒样颗粒蛋白能够与抗西尼罗病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性;间接ELISA证实,重组蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体.结论 在哺乳动物细胞中表达的西尼罗病毒样颗粒具有良好的抗原性,为西尼罗病毒感染快速特异诊断试剂研制奠定了基础.
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应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法
目的 应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)、黄热病毒(Yellow Fever Virus,YFV)、西尼罗病毒(West Nile Virus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法.方法 利用Primer Premier 5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性.结果 应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142bp、293bp、377bp、630bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5000PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105 copies/μl、2.6×104 copies/μl和1.37×104 copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应.结论 应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测.
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胶体金免疫层析快速定量检测西尼罗病毒抗体方法的建立
目的 建立一种胶体金免疫层析快速定量检测西尼罗病毒抗体的方法.方法利用胶体金免疫层析技术,建立快速检测西尼罗病毒抗体的方法,评价其特异性和敏感性,进行定量检测并拟合标准曲线.结果该法可在15min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:104/test,线性范围1:101/test～ 1:10/test、回收率86.5％～ 122.7％.结论建立的检测西尼罗病毒抗体的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样本中的西尼罗病毒抗体进行定性、定量检测.
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福州口岸入境船舶上首次发现埃及伊蚊及其携带的病原体
[目的]通过加强入境船舶医学媒介监测,防止新蚊种、蚊媒传染病传人和传播.[方法]对入境船舶的积水容器进行蚊幼虫监测,并采样送实验室进行形态学鉴定,登革热、黄热病、基孔肯雅热等病原检测,对船舶实施灭蚊等卫生处理,对船员施行流行病学调查、体温检测、医学检查等措施.[结果]全船发现9处积水,1处蚊幼虫阳性,积水4000ml,幼虫70条,羽化后经实验室鉴定该蚊幼虫均为埃及伊蚊,未检出登革热、基孔肯雅、西尼罗、乙脑等病毒.对该轮船员进行流行病学调查、医学检查,未发现登革、基孔肯雅热、乙型脑炎、西尼罗热、黄热病等病人.对船舶实施灭蚊等卫生处理措施后,未再发现成蚊和蚊幼虫.[结论]埃及伊蚊属福州地区外来蚊种,是传播黄热病、登革热等热带病的重要媒介.提示福州口岸应提高防范意识,特别应加强来自蚊媒传染病疫区船舶的蚊媒监测、卫生处理工作.
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西尼罗病毒感染的抗体检测方法研究进展
病毒核酸编码3种结构蛋白和7种非结构蛋
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利用入境人员血清盘评价西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒
鉴于国内尚无明确的西尼罗病毒(West nile virus,WNV)感染病例报道,通过建立入境人员血清样品盘来评价自行研制西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA检测试剂盒.选择来自WNV感染区的入境人员血清286份,通过美国食品药物管理局(Food and drug administration,FDA)认证的FOCUS公司的West Nile Virus IgG Dxselect试剂盒以及Panbio公司的Dengue IgG Capture ELISA试剂盒筛选出评价用血清样品盘,平行比较评估自行研制的WNV IgG检测试剂盒结果,进一步对试剂盒的特异性,重复性和稳定性进行评价研究.结果显示,自行研制的试剂盒阳性检出率为35.6％,FOCUS West Nile Virus IgG Dxselect检测试剂盒则为32.5％,两者之间无统计学差异(x2 =3.05,P=0.078＞0.05),并具有良好的一致性(Kappa=0.837 2);其中两者的阳性检出符合率为91.18％,阴性符合率为95.34％,总符合率为92.66％.研制的间接ELISA方法诊断试剂盒具有良好的特异性,稳定性和敏感性,检测效果与境外权威认证的商品化试剂盒基本一致,为我国防控西尼罗病毒等外来传染病人境提供技术储备,也为尚未传人的传染病免疫试剂盒评价方法提供了参考依据.
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一种新发传染病--西尼罗病毒感染
西尼罗病毒(West Nile Virus,WNV)连续几年在北美肆虐引起了世界的广泛关注.本文简要回顾了WNV的历史,对WNV感染的病原学、流行病学、临床表现、实验室诊断、防治措施等进行了系统的介绍,以期对本病有一个较全面的认识.
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西尼罗病毒的细胞敏感性观察
本研究选用C6/36、BHK21、Vero和Vero-E64株传代细胞进行西尼罗病毒的细胞敏感性试验,观察西尼罗病毒在各传代细胞系上细胞病变出现的时间以及病变特征.结果表明,该病毒在4种传代细胞出现CPE的时间及特征均有所不同,其中C6/36细胞对西尼罗病毒的细胞病变特征为明显,出现时间适中,更适用于西尼罗病毒的组织培养研究.
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实验感染蚊虫及来亨鸡体内西尼罗病毒的RT-PCR检测
根据已发表的西尼罗病毒Chin-01株基因序列,参照文献资料选择合成一对引物,建立西尼罗病毒的RT-PCR检测方法,对反应条件进行了系列优化后,应用于感染蚊虫样本及来亨鸡血液样本中的病毒核酸检测.该方法的检测敏感性达到1.0PFU,感染蚊虫样本和来亨鸡血液样本均能够扩增出与预期值大小一致的特异性区带,经序列测定证明,与实验感染所用病毒株序列完全相同.可见RT-PCR是检测实验感染蚊虫和来亨鸡体内西尼罗病毒行之有效的方法.
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西尼罗病毒与乙脑病毒免疫交叉反应的实验研究
为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况.结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6 088和4 305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势.无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性.在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱.WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实.
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西尼罗病毒的宿主及其在传播循环中的作用
西尼罗热或西尼罗脑炎及脑膜脑炎目前已从偶尔发生转变为频繁暴发流行,成为危害公共卫生健康的重要虫媒病.由于西尼罗病毒宿主众多,传播媒介分布广泛,宿主及桥梁宿主和媒介的共同作用促成了该病大面积流行,本文综述了西尼罗病毒的宿主及其在传播循环中的作用.
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媒介蚊虫在西尼罗病毒传播循环中的作用
西尼罗病毒的频繁爆发和迅速蔓延成为当今全球普遍关注的新的公共卫生问题.研究证实蚊虫为其主要的传播媒介.为了探讨蚊虫在西尼罗病毒传播中的地位和作用,本文就西尼罗病毒相关的媒介蚊虫的种类、影响蚊虫感染和传播的因素以及蚊虫对于长期保存病毒的机制进行了综述,提出西尼罗病毒传播循环中蚊媒生物学的研究方向.
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TaqMan MGB Real-time RT-PCR 检测西尼罗病毒方法的建立
目的 建立一种灵敏、特异、高效的西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)感染诊断和流行病学调查的实验室检测方法. 方法 用C6/36细胞培养WNV并用Vero细胞蚀斑法滴定病毒浓度;根据WNV C蛋白基因组保守序列,设计一套特异性引物和TaqMan MGB探针,用细胞培养病毒液进行方法的条件优化;用不同病毒评价方法的特异性,用系列浓度病毒稀释液和染毒蚊子评价方法的灵敏性. 结果 建立的TaqMan MGB Real-time RT-PCR方法可检出低于0.01 PFU的WNV RNA,并可检出只含3只染毒蚊的标本;用该方法检测4种血清型登革病毒标准毒株、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒均为阴性. 结论 新建TaqMan MGB Real-time RT-PCR方法具有极高的特异性和灵敏性,是实验室早期诊断WNV感染和调查媒介携带WNV情况的理想方法.
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西尼罗病毒的研究进展
西尼罗病毒(West Nile Virus,WNV)属黄病毒科,为正单链RNA病毒,主要由蚊虫叮咬传播.近几年,随着WNV感染的流行,除蚊虫叮咬以外的传播途径如输血等日益受到重视,WNV感染的实验室诊断不断取得进展,相关疫苗的研制也在进行之中.本文就WNV的分子生物学、流行病学、感染与免疫、实验室诊断及疫苗的研究进展作一综述.
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TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测西尼罗病毒的研究
目的 建立特异、快速、灵敏的TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应(TaqMan-based Real-time PCR)用于西尼罗病毒(WNV)核酸检测,为WNV的感染诊断和流行病学监测奠定技术基础.方法 根据文献公开发表的WNV核酸检测引物和TaqMan探针,优选佳引物探针.应用DNAWorks 2.4在线软件设计8条寡核苷酸片段,基于PCR合成包含引物探针扩增区域的230个核苷酸作为WNV模拟核酸.并对TaqMan-based Real-time PCR条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度.结果 该方法对WNV核酸检测有高度特异性,与流行性乙型脑炎、登革热1～4型等虫媒病毒均无交叉反应,对构建的DNA检测灵敏度达100拷贝/反应.结论 TaqMan-based Real-time PCR是一种快速检测WNV特异、敏感的方法,适用于WNV的早期感染诊断和流行病学监测.
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西尼罗病毒空斑形成试验方法的建立与应用
目的建立西尼罗病毒的空斑形成试验方法,应用于病毒滴度测定和实验感染蚊虫及来亨鸡血液样本中病毒的定量检测.方法将稀释的样本接种常规制备的Vero细胞单层,用琼脂糖凝胶覆盖,孵育一定时间后,加中性红染色,计数空斑数,计算空斑形成单位.结果在琼脂糖凝胶中西尼罗病毒可形成直径大约1～3 mm的圆形或类圆形空斑.20%病毒鼠脑悬液的病毒滴度为107空斑形成单位.感染蚊虫样本和来亨鸡血液样本也出现典型的空斑.结论 建立了西尼罗病毒的空斑形成试验方法,该方法可应用于病毒滴度测定和实验感染蚊虫及来亨鸡血液样本中病毒的定量检测.
