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Notch信号通路在血小板衍生生长因子-BB诱导人胰腺癌细胞增殖过程中的作用
目的 探讨Notch信号通路在血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导人胰腺癌细胞(HPAC)增殖过程中的作用.方法 MTT法检测PDGF-BB及γ-secretase抑制剂4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPT)对HPAC增殖活力的影响;Western blotting检测细胞Notch蛋白表达水平的变化;染色质免疫共沉淀(CHIP)检测Notch下游靶基因转录水平的变化.结果 PDGF-BB显著促进HPAC增殖,提高细胞Notch表达水平,增强Notch靶基因的转录;不同剂量的DAPT及血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抑制剂处理细胞,显著反转了PDGF-BB的作用.结论 Notch信号通路在PDGF-BB诱导胰腺癌细胞增殖中起到重要作用.
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Ki67与核酸荧光共染在细胞周期研究中的应用
病原微生物与宿主细胞的相互作用是感染过程中的一个重要环节，也是研究肿瘤生物学的一项重要内容。动态研究细胞周期变化对了解病原体作用于细胞具有重要意义。本研究用Ki67／4′，6‐二脒基‐2‐苯基吲哚（4′，6‐diamidino‐2‐phenylindole ，DAPI）和Ki67／碘化丙啶（propidium iodide ，PI）共染技术分析了小鼠脾细胞的细胞周期变化，并介绍其具体应用。
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CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究
目的 建立人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)的体外培养方法,并探讨氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对HAEC进行联合标记示踪的可行性.方法 运用酶消化法获取HAEC,收集第2代细胞,流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的表达率,SP免疫化学法鉴定HAEC.CM-Dil与DAPI对HAEC进行体外标记,荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14 d的标记情况,台盼蓝染色检测细胞活力,CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响.结果 HAEC贴壁培养后呈扁平多角形,CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99.64％、2.21％、32.41％、0.84％、36.70％,细胞角蛋白Keratin阳性表达.HAEC在CM-Dil和DAPI联合标记1d后,荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光,标记率为100％；14 d后,经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近,细胞形态无改变.台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96.8％ ～ 98.9％,CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CM-Dil和DAPI可有效标记HAEC,染色简单、无细胞毒性,荧光衰减较慢,可作为HAEC的标记及示踪方法.
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骨髓间充质干细胞在移植肝中的定居
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)在移植肝中的定居.方法 通过密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs,应用流式细胞仪鉴定细胞表面抗原(CD45、CD44、CD90)的表达,分别用0.5、1.5、2.5 mg/L浓度的4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对间充质干细胞标记12h,在荧光显微镜下观察细胞标记情况,用佳标记浓度标记的细胞在肝移植门静脉套管前注入移植肝中,分别在7、12d取冰冻病理标本,在荧光显微镜下观察间充质干细胞的定居情况.结果 密度梯度离心法成功分离培养出间充质干细胞,流式细胞仪鉴定结果显示CD90、CD44、CD45阳性表达率分别为97.1％、87.4％、1.1％.3种浓度的DAPI均能标记间充质干细胞,其中1.5 mg/L标记率高,达95％.移植术后7、12 d的病理标本中均能观察到荧光.结论 BMSCs能够成功定居在肝移植术后的肝脏中.
关键词： 骨髓间充质干细胞 4’ 6-二脒基-2-苯基吲哚 肝移植
