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TRIM28siRNA通过活化E2F转录因子1增加非小细胞肺癌PAa细胞对依托泊苷的敏感性
目的 探讨siRNA沉默TRIM28(tripartite motif containing 28)增强非小细胞肺癌(NSCLC) PAa细胞对依托泊苷的敏感性和可能的机制.方法 应用RNA干扰技术沉默TRIM28基因在PAa细胞中的表达;TRIM28siRNA单独或联合依托泊苷处理PAa细胞后,应用MTT法和集落形成实验检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting方法检测各组细胞中E2F转录因子1(E2F1)的表达水平.结果 在PAa中沉默了TRIM28的表达;TRIM28siRNA联合依托泊苷显著抑制PAa细胞的增殖和集落形成,明显诱导细胞凋亡;联合处理的PAa细胞中E2F1 mRNA和蛋白水平的表达明显增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少.结论 TRIM28siRNA联合化疗药物依托泊苷对抑制NSCLC细胞生长有明显效果.
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TRIM28在肺癌中的表达及预后价值分析
目的:探讨TRIM28在肺癌中的表达情况,与肺癌临床病理特征的关系,评估其在肺癌中的预后价值.方法:下载美国国立生物信息技术中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)的肺癌样本数据集GSE30219,对表达谱资料及临床信息进行分析.结果:TRIM28在肺癌组织中高表达,在高TNM分期肿瘤中高表达(P均＜0.01).在不同性别、AJCC T分期、有无区域淋巴结转移、远处转移、复发的肺癌患者中,TRIM28的表达均有显著性差异(P均＜0.05).TRIM28高表达与肺癌患者(HR=1.49,95％CI=1.31 ～ 1.69,P＜0.01)、肺腺癌患者(HR=2.12,95％CI=1.66～2.7,P＜0.01)、不吸烟患者(HR=3.56,95％CI=1.89～ 6.72,P＜0.01)和吸烟患者(HR=1.26,95％CI=1.02～1.55,P＜0.05)的预后不良相关,还可作为临床Ⅰ期(HR=2.4,95％CI=1.81～3.2,P＜0.01)、Ⅱ期(HR=1.6,95％CI=1.11 ～2.32,P＜0.05)和化疗(HR=1.66,95％CI=1.11～2.49,P＜0.05)患者预后的危险因素.结论:TRIM28高表达与肺癌多个临床病理指标和患者预后不良相关,可以作为潜在的判断肺癌患者预后的标志物和肿瘤治疗的靶点.
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食管鳞癌组织中TRIM28和p16的表达与临床病理因素的关系
目的 研究三结构域蛋白家族28(TRIM 28)和p16基因在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达情况,并观察二者与患者临床病理因素的相关性.方法 选取河北北方学院附属第一医院手术切除的ESCC患者肿瘤组织136例,并选取37例距肿瘤边缘5 cm以上的正常食管黏膜组织,用免疫组化SP法及对各个组织中TRIM28、p16蛋白的表达情况进行检测,并采用免疫荧光染色定位二者在ESCC中的表达部分,依据结果对它们与ESCC患者临床病理特征的相关性进行探究.结果 (1)TRIM28与p16在ESCC组织中的阳性率分别为91.2%(124/136)、32.4%(44/136),在正常食管黏膜组织中的阳性率分别为24%(9/37)、57%(21/37),差异均具有统计学意义(P<0.05).(2)免疫荧光染色显示二者均主要定位于ESCC癌细胞的胞核中.(3)二者的表达情况均与ESCC的TNM分期、浸润程度、淋巴结转移相关.(4)TRIM28与p16在ESCC中的表达呈负相关(r=-0.284,P=0.001).结论 在ESCC发生发展过程中TRIM28及p16均可呈异常表达,协同检测二标记物可辅助ESCC诊断并指导临床治疗.
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TRIM28在非小细胞肺癌中的表达及其对肺腺癌PAa细胞生长的影响
目的:鉴定TRIM28基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达;探讨TRIM28基因对NSCLC生长的影响.方法:免疫组织化学技术检测TRIM28在NSCLC组织中的表达.通过RNA干扰技术抑制肺腺癌PAa细胞系中TRIM28基因表达后,克隆形成实验和MTT实验观察细胞的生长和增殖情况;流式细胞仪分析细胞周期改变.结果:在48例NSCLC组织中,24例(50.0％)阳性表达TRIM28,而在癌旁正常肺组织中均不见TRIM28阳性染色(x2=27.034,P=0.000).TRIM28基因被干扰后,肺腺癌PAa细胞的活性和生长明显受到了抑制,并且引起细胞周期G1/S期阻滞.结论:TRIM28基因和蛋白在NSCLC组织中表达上调;siRNA阻断TRIM28表达后抑制肺腺癌PAa细胞生长,提示TRIM28可能作为新的NSCLC治疗靶点.
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TRIM28shRNA联合依托泊甙抑制非小细胞肺癌裸鼠肿瘤生长的研究
目的 构建TRIM28短发夹RNA(shRNA)稳定干扰非小细胞肺癌(NSCLC)PAa细胞株,并探讨TRIM28shRNA联合依托泊甙对裸鼠移植瘤生长的影响和可能的机制.方法 通过特异性shRNA慢病毒载体在PAa细胞中稳定干扰TRIM28表达;PAa细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型,并应用TRIM28shRNA单独或联合依托泊甙进行治疗;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法检测裸鼠移植瘤细胞凋亡情况和免疫组织化学技术检测移植肿瘤中E2F转录因子1(E2F1)的表达.结果 成功构建了TRIM28shRNA稳定干扰的PAa细胞株;证实TRIM28shRNA联合依托泊甙能够显著抑制裸鼠肿瘤的生长;TRIM28shRNA联合依托泊甙明显诱导肿瘤细胞凋亡并诱导肿瘤组织表达E2F1蛋白.结论 TRIM28shRNA联合化疗药物依托泊甙对抑制NSCLC肿瘤生长有明显效果.
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改良菌落PCR快速鉴定TRIM28基因阳性重组子的方法研究
目的:建立简便、可靠基因克隆菌落阳性重组子的筛选方法.方法:应用普通菌落PCR和改良的菌落PCR方法对TRIM28基因的阳性重组体进行阳性重组子的分析比较,同时探讨了PCR反应体系中模板浓度和DMSO对于扩增效率的影响.并对鉴定结果为阳性的克隆进行了进一步酶切和蛋白诱导表达分析.结果:运用改良的菌落PCR法简单快捷,结果可靠,反应体系中DMSO的浓度为4%左右可以很好地促进GC富集DNA模板的PCR扩增.其方法的可靠性得到了酶切验证和重组蛋白表达证实.结论:应用改良方法可以用于快速有效地筛选阳性重组菌落.
