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4个地区独一味的ITS基因片段序列分析
目的:检测独一味的ITS基因序列片段,并利用ITS序列作为遗传标记分析了来自4个不同地区(甘南玛曲、西藏林芝、四川若尔盖道班、四川若尔盖热当坝)的独一味的遗传变异情况.方法:采用Plant DNA Mini Kit法作为基因组DNA提取的佳方法,提取植物独一味的核基因组DNA,并且建立了适合独一味的PCR反应体系,利用合成的特异性PCR引物对所提取的DNA中rRNA基因内转录间隔区序列进行套式扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳得到电泳图谱,并进行分析,测序.经Clusta 1X软件排序,MEGA3软件统计分析和分支分析,建立系统发育树,并计算各类群间的遗传距离.结果:琼脂糖电泳图谱及所测序列显示,来自于植物独一味的核DNA中rRNA基因内转录间隔区全长为670bp左右,甘南玛曲和西藏林芝的独一味遗传距离较小,四川与甘南玛曲和西藏林芝的独一味遗传距离较大.结论:基于ITS序列分析.作为品质突出的甘南玛曲独一味和其他地区的独一味相比,并未形成一个区别于其他地区独一味的一个独特的种.根据ITS序列特征所构建的系统树,与传统分类有所不同.
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改良菌落PCR快速鉴定TRIM28基因阳性重组子的方法研究
目的:建立简便、可靠基因克隆菌落阳性重组子的筛选方法.方法:应用普通菌落PCR和改良的菌落PCR方法对TRIM28基因的阳性重组体进行阳性重组子的分析比较,同时探讨了PCR反应体系中模板浓度和DMSO对于扩增效率的影响.并对鉴定结果为阳性的克隆进行了进一步酶切和蛋白诱导表达分析.结果:运用改良的菌落PCR法简单快捷,结果可靠,反应体系中DMSO的浓度为4%左右可以很好地促进GC富集DNA模板的PCR扩增.其方法的可靠性得到了酶切验证和重组蛋白表达证实.结论:应用改良方法可以用于快速有效地筛选阳性重组菌落.
