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TRIM28siRNA通过活化E2F转录因子1增加非小细胞肺癌PAa细胞对依托泊苷的敏感性
目的 探讨siRNA沉默TRIM28(tripartite motif containing 28)增强非小细胞肺癌(NSCLC) PAa细胞对依托泊苷的敏感性和可能的机制.方法 应用RNA干扰技术沉默TRIM28基因在PAa细胞中的表达;TRIM28siRNA单独或联合依托泊苷处理PAa细胞后,应用MTT法和集落形成实验检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting方法检测各组细胞中E2F转录因子1(E2F1)的表达水平.结果 在PAa中沉默了TRIM28的表达;TRIM28siRNA联合依托泊苷显著抑制PAa细胞的增殖和集落形成,明显诱导细胞凋亡;联合处理的PAa细胞中E2F1 mRNA和蛋白水平的表达明显增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少.结论 TRIM28siRNA联合化疗药物依托泊苷对抑制NSCLC细胞生长有明显效果.
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呼吸道合胞病毒M2-1基因表达对人肺腺癌PAa细胞生长的影响
探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1基因在人肺腺癌PAa细胞的表达及对其生长的影响.重组真核质粒PXJ-41/M2-1转染肺腺癌PAa细胞,应用RT-PCR、Western blot方法检测表达.通过MTT生长曲线、流式细胞光度术、细胞贴壁能力、集落形成、接种裸鼠等,观察PAa细胞体内外生长变化.结果显示:①转染阳性重组子经双酶切及RT-PCR扩增均可见目的区带;②Western blot检测可见特异性条带;③PAa/M2-1细胞S期下降,G2/M期增加;贴壁能力下降,集落形成率增高,集落细胞数增多; ④PAa/M2-1细胞成瘤时间晚,但生长速度快,瘤组织由腺癌向鳞癌分化.提示M2-1基因可能促进PAa细胞生长,为下一步研究RSV与肺癌的关系提供了有力证据.
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PXJ-41/M2-1转染人肺腺癌PAa细胞及其稳定表达
目的探讨外源性呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1基因在人肺腺癌PAa细胞中获得稳定表达的可行性.方法将携有RSV M2-1基因的真核表达载体PXJ-41/M2-1,在脂质体介导下,导入人肺腺癌PAa细胞株.通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养,用RT-PCR及免疫组织化学方法检测M2-1在人肺腺癌PAa细胞内的稳定表达情况.结果经RT-PCR方法扩增到M2-1 620bp特异性条带.免疫组织化学证实,转染PXJ-41/M2-1后的PAa细胞内有M2-l蛋白的表达.结论在脂质体介导下,M2-1可导入PAa细胞内并获得稳定表达.
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肺金生方通过调控MMP-2/TIMP-2平衡抗肺癌侵袭转移研究
目的:探讨肺金生方对多种肺癌细胞株的体外抗肿瘤转移作用.方法:以肺金生方含药血清作用于肺癌A549、PG和PAa细胞,普通倒置显微镜观察各组细胞的生长特点及形态,MTT法检测细胞增殖情况,Boyden小室法观察细胞迁移,ELISA法检测25％肺金生方含药血清对MMP-2、TIMP-2表达的影响.结果:肺金生方含药血清作用于各细胞后,与正常细胞相比形态发生明显改变,明显梭形化,细胞数量减少;各浓度肺金生方组抑制率与空白组相比有差异,其中25％含药血清与空白组相比有显著性差异(P＜0.01),25％肺金生方含药血清组能减弱A549、PG和PAa细胞迁移,同时,各细胞肺金生方组MMP-2、TIMP-2的表达与空白血清组相比有差异(P＜0.05).结论:肺金生方可以通过调控MMP-2/TIMP-2平衡达到抗肺癌转移作用.
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间充质干细胞条件培养液促进肺癌细胞上皮间质转化
背景：骨髓间充质干细胞与肿瘤关系的复杂性严重限制了间充质干细胞的应用，因此明确间充质干细胞在肿瘤生长与转移中的作用已成为迫切需要解决的问题。
目的：探讨人骨髓来源间充质干细胞对人非小细胞肺癌A549、PAa细胞上皮间质转化的影响。
方法：收集间充质干细胞上清液作为间充质干细胞条件培养液培养肺癌细胞 A549和 PAa，观察肺癌细胞形态、上皮间质转化标志物E-钙黏素、N-钙黏素、波形蛋白以及其转录因子Slug、Snail、Twist等的表达以及肺癌细胞运动迁移能力的变化。
结果与结论：①与对照组对比：加入条件培养液的肺癌细胞形态发生了间质样变化，且E-钙黏素表达降低，N-钙黏素、波形蛋白mRNA与蛋白表达水平上升，转录因子Slug、Snail、Twist mRNA表达水平也明显增加，同时细胞运动迁移能力增强。②结果表明人骨髓来源间充质干细胞可以促进非小细胞肺癌A549、PAa细胞上皮间质转化过程，增强肺癌细胞运动迁移能力。
