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呼吸道合胞病毒M2-1基因表达对人肺腺癌PAa细胞生长的影响
探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1基因在人肺腺癌PAa细胞的表达及对其生长的影响.重组真核质粒PXJ-41/M2-1转染肺腺癌PAa细胞,应用RT-PCR、Western blot方法检测表达.通过MTT生长曲线、流式细胞光度术、细胞贴壁能力、集落形成、接种裸鼠等,观察PAa细胞体内外生长变化.结果显示:①转染阳性重组子经双酶切及RT-PCR扩增均可见目的区带;②Western blot检测可见特异性条带;③PAa/M2-1细胞S期下降,G2/M期增加;贴壁能力下降,集落形成率增高,集落细胞数增多; ④PAa/M2-1细胞成瘤时间晚,但生长速度快,瘤组织由腺癌向鳞癌分化.提示M2-1基因可能促进PAa细胞生长,为下一步研究RSV与肺癌的关系提供了有力证据.
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人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染PAa和A549肺腺癌细胞系
目的探讨人呼吸道合胞病毒(hRSV)对肺癌细胞的影响.方法构建其转录调控因子M2-1基因真核表达质粒pXJ-41/M2-1,用DNA测序、酶切、PCR等方法鉴定基因重组情况.结果 DNA测序表明该基因具有高度保守性;经脂质体转染、以β-actin为参照进行RT-PCR,筛选出了高效稳定表达M2-1基因的人肺腺癌PAa和A549细胞株,并经Western blot验证有M2-1蛋白的表达.结论为进一步探讨M2-1基因在肺癌发生发展中的作用打下基础.
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呼吸道合胞病毒M2-1基因在人肺腺癌PAa细胞的转染及表达
目的拟将呼吸道合胞病毒M2-1基因转染人肺腺癌PAa细胞并获得表达.方法应用基因重组和基因转染技术,将在呼吸道合胞病毒转录及复制过程中起调控作用的M2-1基因cDNA片段插入质粒pXJ41,再转染人肺腺癌PAa细胞,并通过RT-PCR和免疫荧光及Western blot等技术鉴定M2-1基因表达.结果①阳性重组子pXJ41/M2-1经双酶切,产生620 bp大小片段;②RT-PCR扩增M2-1基因可见620 bp清晰的条带;③免疫荧光染色见转染M2-1基因的PAa细胞胞浆内可见特异性绿色荧光;④Western blot检测转染M2-1基因的PAa细胞,于22 000处可见特异性条带.结论呼吸道合胞病毒M2-1基因在人肺腺癌PAa细胞的成功转染和表达为今后进一步研究奠定基础.
