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Notch信号通路在血小板衍生生长因子-BB诱导人胰腺癌细胞增殖过程中的作用
目的 探讨Notch信号通路在血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导人胰腺癌细胞(HPAC)增殖过程中的作用.方法 MTT法检测PDGF-BB及γ-secretase抑制剂4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPT)对HPAC增殖活力的影响;Western blotting检测细胞Notch蛋白表达水平的变化;染色质免疫共沉淀(CHIP)检测Notch下游靶基因转录水平的变化.结果 PDGF-BB显著促进HPAC增殖,提高细胞Notch表达水平,增强Notch靶基因的转录;不同剂量的DAPT及血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抑制剂处理细胞,显著反转了PDGF-BB的作用.结论 Notch信号通路在PDGF-BB诱导胰腺癌细胞增殖中起到重要作用.
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Menin调控小鼠胚胎早期发育相关基因的研究
目的 研究1型多发性内分泌肿瘤综合征相关基因(Men1)编码的蛋白(menin)对小鼠胚胎早期发育相关基因的调控,并探讨其可能的作用机制.方法 以经丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层细胞培养未分化的小鼠胚胎干细胞,使其体外分化形成胚胎体.RT-PCR鉴定胚胎体胚胎发育期标志基因表达;染色体免疫共沉淀结合启动子基因芯片技术检测成熟胚胎体中menin调控的下游基因,Real-Time PCR鉴定结果.结果 RT-PCR结果表明胚胎体相当于小鼠胚胎发育的早期器官形成期.基因芯片检测显示,menin能调控8 640个备选基因中的784个;基因分析显示,menin能通过多个信号通路调控下游基因,包括Wnt信号通路的1500003O03Rik、Prkca、 Fosl1、 Nfatc3、 Dvl1;TGF-β信号转导途径的Thbs1、Tgfb3、Bmp4、Smurf2;凋亡信号通路的Casp6、1500003O03Rik、Prkar1a、Ripk1、Traf2、Capn5、Endog、Myd88;MAPK信号通路的Casp6、Arrb2、Fgf15、1500003O03Rik、Map3k4、Map2k1ip1、Tgfb3、Prkca、Traf2、Dusp7、Atf2等.结论 Menin可能通过Wnt、MAPK、TGF-β、凋亡等多种信号通路对小鼠胚胎早期发育相关基因进行调控.
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雄激素/雄激素受体对小鼠附睾Caveolin-1表达调控机制的研究
目的:探讨雄激素和雄激素受体(AR)对小鼠附睾Caveolin-1表达的调控机制. 方法:通过搜索前期染色体免疫共沉淀-测序(ChIP-seq)实验得到的小鼠附睾AR结合位点的数据库,寻找Caveolin-1基因相关联的AR结合位点.分别取正常小鼠、睾丸阉割小鼠以及睾丸阉割后补充外源雄激素的小鼠的附睾组织,一方面,抽提总RNA,利用逆转录PCR以及逆转录荧光定量PCR检测Caveolin-1基因的mRNA表达水平;另一方面,利用AR抗体进行染色体免疫共沉淀(ChIP),采用ChIP-PCR以及ChIP-qPCR的方法,检测Caveolin-1基因相关联的AR结合位点在体内与AR的结合情况. 结果:从小鼠附睾AR结合位点的数据库中找到两个Caveolin-1相关联的AR结合位点,均位于第二内含子区域.睾丸阉割后,Caveolin-1基因的表达显著升高(P＜0.05),表达量是对照组的(1.8±0.17)倍;两个AR结合位点的富集倍数分别由正常状态下的(13.5±1.47)倍和(10.5±1.03)倍降至(1.05±0.17)倍和(1.4±0.14)倍(P＜0.01).补充雄激素后,Caveolin-1基因的表达又降至正常水平(P＜0.05),为正常对照组的(1.03±0.06)倍.两个AR结合位点的富集倍数则分别升至(16.4±2.6)倍和(10.0±0.92)倍(P＜0.01). 结论:Caveolin-1在小鼠附睾内是AR的一个直接靶基因,其表达受雄激素的负调控.该研究为理解雄激素/AR在小鼠附睾内的调控网络提供了新的视角.
关键词： 雄激素 雄激素受体 Caveolin-1 染色体免疫共沉淀 -
AP-2α对基质金属蛋白酶-20作用的研究
目的:通过研究AP-2α转录因子对基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinase - 20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确AP-2α的功能,为研究AP-2α在釉质形成中的作用奠定基础.方法:利用RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统、染色体免疫共沉淀技术等来分析AP-2α与MMP-20启动子区域的转录调控能力.结果:小鼠成釉细胞转染AP-2α siRNA后,成釉细胞中MMP-20 mRNA的表达水平显著上调.染色体免疫共沉淀结果显示,AP-2α可能通过与MMP-20启动子特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达.双荧光素酶报告基因检测显示预测结合位点突变后,AP-2α对MMP-20启动子的表达水平无显著影响.结论:AP-2α基因沉默可显著上调MMP-20的mRNA表达水平；而AP-2α过表达可显著抑制MMP-20活性.提示AP-2α转录因子与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达水平.
