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MAPK信号通路在复方丹参注射液调节人羊膜上皮细胞AQP3表达中的作用研究
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)—细胞外信号调节激酶1和2(extracellular signal regulated kinase1/2,ERK1/2)信号转导通路在复方丹参注射液对人足月妊娠羊膜上皮细胞水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)表达调节中的作用.方法 原代培养足月妊娠羊水量正常与羊水过少人羊膜上皮细胞,将人羊膜上皮细胞均分为4组:分别为空白对照组、U0126组、复方丹参注射液组和U0126加复方丹参注射液组.采用免疫印迹技术检测人羊膜上皮细胞中磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)和AQP3的表达.结果 (1)在羊水量正常和羊水过少人羊膜上皮细胞中,均发现p-ERK 1/2表达水平在U0126组较空白对照组明显下降(P＜0.05),而复方丹参注射液组可以明显上调p-ERK1/2表达水平(P＜0.05),U0126加复方丹参注射液组人羊膜上皮细胞中p-ERK1/2表达水平高于U0126组,但低于复方丹参注射液组(P＜0.05).(2)在羊水量正常的人羊膜上皮细胞中,U0126组AQP3的表达与空白对照组比较无明显变化(P＞0.05)；复方丹参注射液组和U0126加复方丹参注射液组AQP3的表达水平均高于空白对照组(P＜0.05),但两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)在羊水过少羊膜上皮细胞中,U0126组AQP3的表达较空白对照组下降(P＜0.05)；复方丹参注射液组可以明显上调AQP3的表达水平(P＜0.05),而U0126加复方丹参注射液组AQP3的表达水平低于复方丹参注射液组(P＜ 0.05),但高于U0126组(P＜0.05).结论 羊水过少时,复方丹参注射液通过激活MAPK-ERK1/2信号转导通路来调节人羊膜上皮细胞中AQP3的表达水平.
关键词： 水通道蛋白3 细胞外信号调节激酶1/2 复方丹参注射液 人羊膜上皮细胞 羊水过少 -
复方丹参注射液对人羊膜上皮细胞水通道蛋白3表达的影响
目的 研究复方丹参注射液对人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)表达的影响,探讨复方丹参注射液治疗羊水量过少的机制.方法 选取无并发症的8例羊水过少和8名羊水量正常的足月产妇的hAECs进行原代培养,采用RT-PCR和免疫印迹Western blot技术,检测复方丹参注射液不同浓度(0.000、0.001、0.010、0.020、0.060、0.100 mg/mL)、不同作用时间(0、6、12、24、48 h)作用前后,两组hAECs中AQP3 mRNA和蛋白的表达.结果 (1)羊水过少组hAECs中AQP3的表达较羊水正常组下调(P <0.05).(2)复方丹参注射液浓度为0.010 mg/mL时,两组hAECs中AQP3的表达均达到峰值,与其他浓度作用结果比较,差异有统计学意义(P <0.05).(3)0.010 mg/mL浓度的复方丹参注射液作用12 h,两组hAECs中AQP3的表达均达到峰值,与其他作用时间比较,差异有统计学意义(P <0.05).(4)0.010 mg/mL浓度的复方丹参注射液作用12 h后,两组hAECs中AQP3的表达均上调,但羊水过少组中AQP3的表达上调较羊水正常组明显(P <0.05).结论 复方丹参注射液可调节hAECs中AQP3的表达,羊水过少时复方丹参注射液对hAECs中AQP3表达的调节作用更加明显.
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人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞
目的 探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化.方法 用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定.腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只.造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM.于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达.结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白；2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb.结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值.
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人羊膜上皮细胞与人羊膜间充质干细胞生物学特性对比
目的:比较人羊膜上皮细胞(human amnion epithelial cells,hAECs)与人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cells,hAMSCs)的生物学特性.方法:从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,采用低速胰蛋白酶-胶原酶消化法,分别分离获取hAECs及hAMSCs,观察此两种细胞的增殖生长情况,采用免疫荧光染色、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、诱导分化染色等方法对两种细胞进行生物学特性鉴定及对比.结果:hAECs为圆形或椭圆形,呈铺路石样生长,多传至5代;hAMSCs为成纤维细胞样的长梭形,呈放射状或漩涡状分布生长,可传至30代左右.hAECs表达上皮细胞标志角蛋白19(cytokeratin 19,CK19),部分表达波形蛋白;hAMSCs表达波形蛋白,不表达CK 19.两种细胞均表达CD29、CD44、CD73、CD90、OCT-4、Nanog.hAECs不表达CD105,成骨及成脂诱导阳性.结论:hAECs和hAMSCs均具有某些干细胞特性,hAECs不能无限增殖,其生长增殖及分化能力均低于hAMSCs.
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羊膜上皮细胞与肝病
人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial stem cells,hAECs)来自人的羊膜,呈上皮样结构单层排列生长在面向羊水的一面,hAECs来源于早期胚胎外胚层,大部分为单层立方和柱状上皮细胞,其主要功能是参与羊水的形成和传递,还能合成、分泌和形成基底膜和细胞外间质成分.近年来研究证实hAECs具有部分胚胎干细胞特性,可分化为3个胚层不同类型的细胞;而且hAECs免疫原性低、有抗炎作用并可分泌多种促生长、抗凋亡等活性因子;移植后无致瘤性和排斥反应[1-2];来源广泛、不受伦理限制,因此hAECs在再生医学上有广阔的应用前景.本文对hAECs的干细胞特性及其在肝病方面的实验研究进展做简要回顾,以期为hAECs在再生性治疗中的应用提供理论依据.
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人羊膜上皮干细胞移植与再生医学的研究进展
干细胞（stem cells ）具有自我复制和多向分化潜能，以及分泌多种细胞因子的功能，在再生医学研究领域备受关注。然而，干细胞的来源、体外维持干性的能力、免疫反应及其致瘤性等问题一直制约着干细胞在临床中的应用。人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cells ，hAECs）是一种不为人熟悉的干细胞，具有胚胎干细胞的特性；在特定环境中可诱导分化为多种类型的细胞，目前已广泛应用于多种疾病的治疗，取得了良好的临床疗效。本文就hA ECs干细胞特性及其细胞移植在疾病中的应用做一综述。
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人羊膜上皮细胞在纤维蛋白支架上的生长情况及细胞生长因子对其生长的影响
目的人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAEC)能否在体外构建的纤维蛋白支架上生长,以及表皮生长因子(epidema growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)对HAEC增殖的影响.方法以纤维蛋白凝块为支架,构建HAEC生长模型,观察HAEC在纤维蛋白支架上生长情况(对照组),并加入细胞生长因子,包括EGF,bFGF,TGF-β1,观察细胞生长因子对HAEC生长的影响(研究组).采用倒置显微镜、吉姆萨(Giemsa)染色和扫描电子显微镜观察HAEC的生长情况.采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法分别检测纤维蛋白支架上HAEC凋亡情况.结果HAEC在构建的纤维蛋白支架上生长良好.EGF组和bFGF组HAEC凋亡较对照组明显减少,差异有显著意义(P＜0.05),TGF-β1组HAEC凋亡较对照组明显增加,差异有显著意义(P＜0.05).结论HAEC能在构建的纤维蛋白支架上良好生长,EGF,bFGF可抑制HAEC凋亡;TGF-β1则促进HAEC凋亡.
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人羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病鼠的研究
目的 观察人羊膜上皮细胞在帕金森病鼠移植后的存活情况,以及它对帕金森病鼠旋转行为的改善作用.方法 采用6-羟多巴胺立体定向纹状体注射制作帕金森病鼠模型;51只大鼠随机分三组:人羊膜上皮细胞移植组、假手术PBS对照组以及空白模型对照组.制模成功后第5周用人特异性抗体Nestin和Vimentin检测人羊膜细胞的存活情况,第10周切片观察黑质部TH阳性神经元的变化情况,高效液相色谱--电化学仪测定纹状体多巴胺(DA),高香草酸(HVA),3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)等浓度以及脑脊液DA的含量.结果 人羊膜上皮细胞帕金森病鼠侧脑室内移植可以存活达10周;移植组大鼠旋转数较对照组明显降低(P≤0.01);黑质部TH阳性神经元数量较对照组升高(P≤0.01),纹状体区DA、HVA和DOPAC含量较PBS对照组明显升高(P＜0.01～0.05),移植组脑脊液DA含量较PBS对照组也显著增加(P＜0.01).结论 人羊膜上皮细胞侧脑室移植可以改善帕金森病鼠的旋转行为,其机制可能与其增加纹状体区多巴胺等递质水平有关.
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人羊膜上皮细胞移植治疗灵长类动物脊髓损伤的实验研究
目的 探讨人羊膜上皮细胞移植治疗恒河猴脊髓半切损伤的作用.方法 采用脊髓半切损伤制作恒河猴脊髓损伤模型,同时移植人羊膜上皮细胞或转染BDNF的羊膜上皮细胞,于损伤后70 d行荧光金注入脊髓损伤下方4 cm处,损伤后80 d观察实验动物的行为学变化,并行组织学检查.结果 治疗组脊髓损伤侧后肢运动功能恢复明显优于对照组.治疗组移植物内可见AchE、TH阳性神经纤维和GFAP阳性的神经胶质细胞,移植物内有荧光金染色.结论 移植人羊膜上皮细胞使恒河猴脊髓半切损伤后运动功能明显改善.
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人羊膜上皮细胞治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫研究
目的 探讨人羊膜上皮细胞移植治疗大鼠创伤性脊髓损伤的作用及细胞移植后免疫反应情况.方法 采取大鼠脊髓半横断方法建立动物模型后损伤局部直接注射移植细胞,设三组:羊膜上皮细胞移植组、骨髓源间充质细胞移植组、PBS液对照组；利用Basso Beattie Bresnahan运动功能评分(BBB评分)评价运动功能恢复情况,用ELISA法测定大鼠血清IL-2和IL-10水平、免疫组织化学法标记CD3+T细胞浸润情况评价移植免疫情况.结果 (1)BBB评分显示,三组大鼠在移植后3周内均有较快恢复并在3周后进入平台期,细胞移植组恢复更明显且羊膜上皮细胞组优于骨髓源间充质细胞组(P＜0.05).(2)羊膜上皮细胞组大鼠血清IL-2的水平较骨髓源间充质细胞组明显偏低,IL-10水平则偏高.(3) CD3免疫组化显示各组切片在早期均有CD3+细胞浸润,移植后3个月羊膜上皮细胞组CD3+细胞浸润明显少于骨髓源间充质细胞组(P＜0.05).结论 细胞移植治疗创伤性脊髓损伤效果明显；羊膜上皮细胞免疫原性较骨髓源间充质细胞弱.
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人羊膜上皮细胞治疗中枢神经系统疾病
人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cells，hAECs）是从胎盘内膜内壁分离纯化的一种可表达干细胞表面标记物的细胞。受精后第8天hAECs开始形成，这些细胞具有干细胞多向分化潜能。 hAECs具有促进小鼠脑内神经递质水平增加、减少炎症反应、分泌神经营养因子等营养、支持神经元存活的作用。应用实验动物模型研究对阿尔兹海默病、帕金森氏病、脊髓损伤、脑卒中等疾病都具有治疗效果。本文根据近年发表的研究报告，总结hAECs移植对中枢神经系统疾病的治疗作用，以探讨hAECs移植对中枢神经损伤保护机制的理论基础。
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PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞
目的 探索使用PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞(hAEC).方法 采用透射电子显微镜和动态光散射表征PEI-Fe3O4纳米颗粒.使用纳米颗粒标记原代培养的hAEC,普鲁士蓝染色评价其标记效率,台盼蓝染色法和CCK-8法检测细胞存活率和细胞毒性.结果 PEI-Fe3O4纳米颗粒呈紧凑的球形,平均粒径为13 nm,水动力学半径为17.56nm,zeta电位为+34.5 mV.浓度大于20μg/ml的纳米颗粒对hAEC的标记效率达到91％.50(t=16.37,P＜0.0001;t=10.39,P＜0.0001)、100 μg/ml(t=29.89,P＜0.0001;t=16.86,P＜0.0001)纳米颗粒浓度下的hAEC存活率和细胞活力均明显低于未标记时.结论 PEI-Fe3O4纳米颗粒可用于标记hAEC,在其工作浓度下未表现出显著的细胞毒性.
关键词： PEI-Fe3O4纳米颗粒 人羊膜上皮细胞 标记 -
羊膜上皮细胞移植治疗脑缺血缺氧新生大鼠
背景:研究表明移植羊膜上皮细胞可改善神经功能,但其作用机制尚不清楚.目的:观察缺氧缺血对新生大鼠脑神经干细胞和神经颗粒素表达的影响,及羊膜上皮细胞移植后对其治疗作用.方法:建立缺氧缺血性脑损伤模型,46只SD大鼠随机抽签法分为3组,移植组和模型组缺血缺氧后经侧脑室分别注入1 1012 L-1人羊膜上皮细胞悬液和PBS治疗;假手术组注射等量的生理盐水.结果与结论:移植组大鼠神经功能较模型组明显改善,移植后第3周脑切片检出NSE阳性细胞存在,神经颗粒素在第3周的表达模型组低于假手术组,移植组较模型组增加;而nestin结果显示模型组较假手术组增加,移植组较模型组增加.提示羊膜上皮细胞移植入脑缺血缺氧大鼠脑内后,可减轻缺氧缺血后神经元的损伤,改善神经功能,其机制可能是注射入侧脑室的细胞促进自体神经干细胞的增殖分化和突触再生而实现的.
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人羊膜上皮细胞的研究进展
人羊膜上皮细胞源于胎盘羊膜组织,表达干细胞标志分子及相关基因,但不表达端粒酶基因,具有非致瘤性,同种异体移植后不发生免疫排斥反应,同时还可分泌免疫抑制因子,防止移植后炎性反应的发生,因此可以看作是免疫赦免细胞.人羊膜上皮细胞具有明显的可塑性和多向分化潜能,在不同生长因子的调节下,可分化为肝样细胞、心肌样细胞、神经胶质细胞、神经元细胞和胰岛样细胞等,在细胞替代治疗及组织再生医学上有广阔的应用前景.尽管如此,仍还不能将人羊膜上皮细胞称之为严格定义上的干细胞,凼其小具有长期的自我更新和产生单个细胞克隆的能力,此外人羊膜细胞在体内分化成有功能的各种细胞类型需要进一步研究证实.
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人羊膜上皮细胞对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的定位修复
背景:人羊膜上皮细胞具有无致瘤性、来源丰富、容易获取、免疫原性低、无医学伦理限制等优点,很多优势是胚胎干细胞和诸多成体干细胞所不具备的,有望成为今后临床移植治疗的重要种子细胞.目的:观察并研究荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记的人羊膜上皮细胞对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的定位修复情况.方法:使用酶消化法从人羊膜中分离得到人羊膜上皮细胞,观察细胞形态,人羊膜上皮细胞的鉴定采用免疫细胞化学法检测细胞角蛋白19的表达.用四氯化碳腹腔注射诱导小鼠肝损伤.将用CFSE标记的人羊膜上皮细胞通过尾静脉注射移植到肝损伤小鼠体内,细胞移植后7 d后检测小鼠组织病理学变化,30 d后检测肝功相关指标.结果与结论:①实验成功分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞;②免疫细胞化学检测显示人羊膜上皮细胞可表达上皮细胞标志角蛋白19;③冰冻切片免疫荧光显示人羊膜上皮细胞可以归巢到受损肝脏;④人羊膜上皮细胞移植后对肝损伤小鼠的肝功能、组织病理学改变都有明显修复作用;⑤结果证实,人羊膜上皮细胞可有效改善肝组织的生理功能,为细胞定位移植治疗肝脏疾病的修复情况提供实验数据.
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腺病毒载体携带标记基因EGFP转染人羊膜上皮细胞
背景:人羊膜上皮细胞具有干细胞的某些性能,可诱导分化为角膜样上皮细胞,但在体外培养时无法示踪,不能有效地监测其细胞转归.目的:探讨利用腺病毒载体将标记基因EGFP转染入人羊膜上皮细胞的可行性及感染效率.方法:pDC316-mCMV-EGFP腺病毒包装后,腺病毒载体携带标记基因EGFP转染体外培养的人羊膜上皮细胞,并扩增培养,观察转染后人羊膜上皮细胞与未转染人羊膜上皮细胞的形态差异,并在荧光显微镜下观察转染基因的表达,用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期及EGFP阳性表达率.结果与结论:①多数转染细胞筛选出的抗性克隆以及培养的克隆细胞与正常体外培养的人羊膜上皮细胞在形态上无显著差异;②瞬时转染后48 h的人羊膜上皮细胞中增强型绿色荧光蛋白阳性表达率高达99.01%;③转染后的人羊膜上皮细胞的细胞周期有所减慢,说明利用腺病毒载体能将标记基因EGFP转染入人羊膜上皮细胞,可更直观地观察到人羊膜上皮细胞在体外的进一步转归.
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人羊膜上皮细胞有向心肌样细胞分化的特性
目的:通过体外诱导分化实验,评价人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力.方法:实验于2005-09/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.①对象:经产妇知情同意,无菌采集健康足月剖宫产胎盘6份,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:采用机械法将羊膜从胎盘组织上剥离,D-Hank's液冲洗后剪成碎片,加入含有0.2 g/L乙二胺四乙酸的0.5 g/L胰蛋白酶溶液,离心、消化、过滤,收集滤液,加入胎牛血清终止消化,重复消化2次.合并3次消化所得的细胞悬液,离心后将细胞沉淀悬浮于L-DMEM培养基中,按1.25×108 L-1密度接种,常规培养3 d后更换培养基,待细胞达80%~90%融合后用胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化,终止后离心弃上清,细胞沉淀用培养基重新悬浮,按1×107 L-1密度传代.③实验评估:用流式细胞仪鉴定人羊膜上皮细胞表型;使用10 μmol/L 5-氮杂胞苷和1 mmol/L抗坏血酸磷酸盐诱导第2代人羊膜上皮细胞,免疫荧光染色法检测诱导后细胞中特异蛋白结蛋白和α-辅肌动蛋白的表达,RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA-4和心肌特异性收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA的表达.结果:①人羊膜上皮细胞的免疫组化特征:人羊膜上皮细胞几乎不表达CD44,不表达波形蛋白,表达角蛋白19.②人羊膜上皮细胞α-辅肌动蛋白和结蛋白的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达肌系细胞标志α-辅肌动蛋白和结蛋白.③人羊膜上皮细胞Nkx2.5、GATA-4和α-肌球蛋白重链mRNA的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达心肌特异性转录因子Nkx2.5 mRNA和GATA-4 mRNA，心肌特异的可收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA未见表达.结论:通过胰蛋白酶消化法分离获得的人羊膜上皮细胞具有向心肌样细胞分化的特性,可能成为细胞心肌成形术的候选供体细胞.
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人羊膜上皮细胞移植修复兔臂丛神经损伤
背景:目前人们把目光多集中在干细胞修复脊髓损伤方面,而对于干细胞移植治疗周围神经损伤的研究却不多,尤其人羊膜上皮细胞修复治疗周围神经损伤的研究和报道更少.目的:探讨人羊膜上皮细胞对臂丛神经的修复作用.方法:应用测力神经根拉钩水平牵拉臂丛神经根的方法制备大白兔臂丛损伤模型,提取人羊膜上皮细胞并扩增培养,扫描电子显微镜下观察人羊膜组织及羊膜上皮细胞的超微结构,人羊膜上皮细胞转染绿色荧光蛋白标记并注射入臂丛神经损伤区,苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察羊膜上皮细胞对兔臂丛神经损伤的修复作用.结果与结论:①分离得到的人羊膜上皮细胞表达上皮细胞标志物角蛋白CK19,不表达间充质细胞标志物波形蛋白,不同程度表达CD29,CD73.扫描电子显微镜观察到人羊膜上皮细胞胞体饱满,连接紧密,细胞状态良好.②人羊膜上皮细胞移植到新西兰大白兔臂丛神经损伤模型后18周,免疫荧光检测到神经损伤区可见有表达绿色荧光蛋白的羊膜上皮细胞.③术后6周实验组大白兔前爪功能开始恢复,术后12,18周实验组大白兔前爪功能得到明显改善,功能评分明显提高,对照组几乎没有恢复.以上结果可见人羊膜上皮细胞参与了臂丛神经损伤的修复.
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人羊膜上皮细胞抗细胞衰老作用的研究进展
细胞衰老是细胞在执行生命活动过程中,随着时间的推移,细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程.人们对细胞衰老机制的研究由来已久,目前主要有差错理论、程序理论及端粒学说.细胞衰老可以促使生物衰老,不仅可以导致组织器官功能减弱与丧失,而且与恶性肿瘤、心衰、糖尿病等多种重要疾病的发生有关.因此,深入研究细胞衰老和抗衰老的机制有着重要意义.近年来,国内外大量的实验研究表明[1-7],人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)具有较强的抑制细胞分化、促进细胞增殖、增强细胞活力和功能、保护细胞免受不良影响的伤害,以及抑制细胞凋亡的作用,为抗细胞衰老研究提供了崭新的路径.现笔者就HAECs的生物学特性,以及其用于抗细胞衰老的研究方法和成果作一综述.
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人羊膜上皮细胞治疗大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的效应及免疫调节作用
目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用.方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型；用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧脑室移植5×105个hAECs;采用kono评分动态观察行为学变化；采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变,以及hAECs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球芯片捕获技术(CBA)检测血浆细胞因子的含量.结果:hAECs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P＜0.01),神经功能明显改善,体重稳定,脑和脊髓炎性细胞浸润减轻.hAECs移植后3周,宿主脑和脊髓组织中均有较多人细胞核抗原阳性细胞即hAECs存活；与对照组相比,hAECs治疗组FoxP3+ Treg、Th2、CTL、NKT、B淋巴细胞百分比明显升高(P＜0.01或P＜0.05),而Th17细胞显著减少(P ＜0.01)；Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P＜0.05或P＜0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:hAECs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+ Treg和下调Th17细胞有关.
关键词： 人羊膜上皮细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫调节 大鼠
